性病实验室诊断标准及应用ppt课件.ppt

性传播疾病实验室诊断标准及应用 1 常见性传播疾病的实验室诊断 金标准 淋病淋球菌培养梅毒暗视野检查 TPPA FTA ABS WB 沙眼衣原体衣原体培养 核酸扩增技术支原体感染支原体培养生殖器疱疹病毒培养 核酸扩增技术尖锐湿疣核酸杂交和核酸扩增技术HIV 艾滋病蛋白印迹试验 HIV抗原检测滴虫性阴道炎湿片法 毛滴虫培养细菌性阴道病G染色查线索细胞软下疳细菌培养 核酸扩增技术性病性淋巴肉芽肿衣原体培养 核酸扩增技术 2 一 梅毒的诊断标准 3 4 5 1 暗视野检查 镀银染色法2 非梅毒螺旋体抗原血清试验3 梅毒螺旋体抗原血清试验 一 实验室诊断方法的临床意义 6 暗视野显微镜法直接镜检图像 1000 7 1 暗视野检查临床意义 当标本阳性时 可确诊梅毒 适宜于早期梅毒 一 二期 特别是早期一期梅毒 早期先天梅毒 暗视野显微镜检查法被WHO确定为性病实验室的必备方法当标本阴性时 不能排除梅毒诊断不适用于来至口腔的标本暗视野显微镜检查法是能够立即在获得性或先天性梅毒的早期进行直接诊断的唯一标准 8 2 RPR类临床意义 RPR等试验一般认为是梅毒初筛试验 阳性者 均需作确证试验 VDRL用于神经梅毒诊断 有些疾病可导致生物学假阳性 复发或再感染可阳转或滴度升高 为疗效观察 判愈方法 早期梅毒治疗后血清滴度应下降4倍认为治疗有效 9 3 TPPA TPHA 临床意义 1 为梅毒确证试验 其敏感性 一期梅毒76 69 90 二期梅毒为100 潜伏梅毒为97 97 100 晚期梅毒为94 其特异性 100 2 治疗后可终生阳性 不能作为疗效指标 3 IgM抗体可作为梅毒早期诊断或胎传梅毒诊断 4 可有1 生物学假阳性存在 如 SLE 10 两类血清学方法临床意义的比较 RPR类 RPR等试验可用于大标本量的筛查 RPR定量可排除生物学假阳性 RPR是疗效判定的指标RPR是疗后随访的指标RPR用于判定是否血清复发 TPPA类 是金标准TPPA等试验是确诊指标在HIV感染者中 血清学试验可发生难于解释的现象 若怀疑梅毒感染应作HIV检查 11 二 实验室诊断方法临床应用 1 适用对象2 方法学的灵敏度3 不同病期方法学选择4 血清学结果解释5 RPR滴度与治疗效果6 疗后血清学随访7 生物学假阳性8 胎传梅毒实验室诊断标准9 神经梅毒实验室诊标准 12 1 适用对象 皮肤 性病门诊输血前检查手术前检查入院检查产前检查检验检疫 13 2 方法学的灵敏度 病原学检查 PCR镀银染色暗视野血清学方法 FTA ABSTPPARPR抗体 IgMIgG 14 3 不同病期方法学选择 一期二期三期 暗视野 镀银染色 PCR IgMFTA ABS TPPA ELISA CLIA RT WB RPR 暗视野 镀银染色 PCR等FTA ABS TPPA ELISA CLIA RT WB RPR VDRL 病理等 15 4 血清学结果解释 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 16 TPPA为什么做滴度 经常有人提问 17 18 夫 妻 子结果不一致情况 19 5 RPR滴度与治疗效果 1 治疗成功 早期梅毒患者在治疗后6个月内症状消失 且RPR滴度有至少4倍的下降 晚期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后12 24个月内RPR滴度有至少4倍的下降 2 治疗失败 治疗后症状持续或重新出现 治疗后RPR滴度反而上升了4倍或以上 RPR滴度较高 1 32或以上 但在六个月内没有达到4倍的下降 抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并HIV感染及神经梅毒的可能性 3 血清固定 经正规治疗后 梅毒患者RPR一般都会转为阴性 但有1 3 的病人即使经足量抗梅治疗 RPR滴度仍持续呈低滴度阳性 这种现象称为血清固定 其原因尚不明了 血清固定患者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒 20 6 疗后血清学随访 方法 RPR时间 第1年 每3个月检查1次第2年 每6个月检查1次第3年 最后1个月检查 21 7 生物学假阳性常见原因 大家忘掉只有梅毒才能达到1 8 22 23 RPR在妊娠患者中 有28 的假阳性发生 24 25 XX梅毒事件 华西都市报 2012年8月 李冬梅 化名 怀孕 2012年12月26日 初检胎检筛查疑患梅毒 2013年1月4日 另一家机构 夫妻再检均呈阴性 2013年5月14日 待产 第2天产检结果被告之有梅毒 2013年5月16日 剖腹产 2013年5月21日 另一家机构 李冬梅RPR TPPA 双女与母一致 2013年9月 前往重庆 RPR TPPA 26 8 胎传梅毒实验室诊断标准 暗视野检查阳性 非梅毒螺旋体抗原血清试验持续阳性 非梅毒螺旋体抗原血清抗体滴度是母亲的4倍以上 患儿19S IgM阳性 随访18个月观察 27 9 神经梅毒的实验室诊断 梅毒血清学试验 RPR TPPA 阳性 脑脊液异常 WBC计数 10 10 L蛋白量 500mg L 3 脑脊液VDRL试验阳性 可FTA ABS阳性 6 28 梅毒血清学检测 策略一 非梅毒螺旋体抗原血清试验 RPR 阳性 阴性 报告 RPR阴性 梅毒螺旋体抗原血清试验 TPPA RPR定量试验 报告 RPR阴性滴度TPPA阳性 阳性 阴性 报告 RPR阳性TPPA阴性 前带 早期 第2次收费 1 8习惯 29 孕产妇梅毒检测及服务流程 接受初次产前保健的孕产妇 采用RPR或TRUST等筛查 采用TPPA等证实 阳性 阴性 诊断梅毒感染 阳性 排除梅毒感染 阴性 继续常规产前保健 2个疗程治疗 RPR定量检测和随放 方法 前带 早期 真阳 真能排除 真梅毒 30 梅毒血清学检测 策略二 梅毒螺旋体血清试验 ELISA 阳性 阴性 报告 ELISA阴性 推荐TPPA复检 RPR定性 定量试验 报告 ELISA阳性RPR阳性及滴度 阳性 阴性 报告 ELISA阳性 TPPA阴性 RPR阴性 报告 ELISA阳性RPR阴性 阳性 阴性 报告 ELISA阳性 TPPA阳性 RPR阴性 敏感性 第2次收费 收费不 以谁为准 31 我室推荐的梅毒血清学试验 策略三 梅毒螺旋体抗原血清试验 TPPA等 TPPA TPPA 阴性报告 RPR RPR 现症梅毒抗梅治疗疗后观察 既往感染随访或抗梅治疗 第2次收费 32 我室推荐的梅毒血清学试验 策略四 梅毒螺旋体抗原血清试验 TPPA等 RPR滴度 1 32直到出现阴性 TPPA RPR 阴性报告 TPPA RPR 生物学假阳性 TPPA RPR 既往感染或随访 TPPA RPR 现症病人抗梅治疗疗效随访 面对当前梅毒血清学检测存在的问题 即将有策略五 33 梅毒孕产妇所生儿童随访与先天梅毒感染状态监测流程 梅毒产妇所生新生儿 不能开展暗视野 IgM 采静脉血 RPR定量 能开展暗视野 IgM 阴性 诊断先天梅毒感染 阳性 滴度 母亲4倍 无论有无症状 滴度 母亲4倍 有症状 滴度 母亲4倍 无症状 治疗 随访 18月TPPA 阳性 预治疗 每3个月RPR定量 观察症状 阳性 阴性 RPR滴度不下降或上升 结合症状 6月后RPR未阴 滴度低水平 连续2次阴性 每3个月TPPA 18月TPPA 连续2次阴性 排除先天梅毒感染 阴性 无此线 34 欧盟梅毒指南 2008年版 初筛试验 选用EIA TPPA TPHA如果怀疑早期梅毒最好用TP特异性IgM检测 如果阴性 1 2周后重复检测RPR VDRL不推荐作为初筛试验 但可作为有症状早期梅毒的快速检测方法 需要同时检测滴度 35 确证试验 初筛阳性 应用另外一种TP特异性试验确证 EIA用TPPA TPHA确证 TPPA TPHA用EIA确证然后再做滴度如果初筛和确证结果不一致 则做重组抗原免疫印迹试验初筛和确证试验阳性 而RPR TRUST阴性 推荐做IgM检测 阳性结果需要对第二份血样进行重复检测以确证 36 判断梅毒活动性 成功治疗后 滴度 32罕见 IgM检测 可以说明疾病的活动性 但是晚期梅毒IgM可能为阴性 如果治疗前RPR TRUST为阴性 IgM检测有助于判断病情 37 血清学试验选择 筛选试验 1 EIA 2 TPPA 3 TPPA TPHA加VDRL RPR 疑似早期梅毒 EIA IgM初筛阳性 另一实验证实TPPA EIA RPR VDRLEIA confirmwithTPPAorTPHA 2个试验不一致 免疫印迹 VDRL RPR滴度1 16 IgM阳性为梅毒活动的标志之一 治疗当天滴度为判断疗效的最佳依据 梅毒早期VDRL RPR滴度可能较低 38 39 40 41 42 43 44 45 二 淋病的实验室诊断标准 46 淋病诊断标准 实验室方法 1 显微镜检查涂片 革兰染色对男性病人有诊断价值 敏感性90 95 特异性98 100 对女性病人敏感性50 70 2 培养敏感性 80 100 特异性 100 3 核酸检测 荧光PCR NG CT核酸TMA双检 NG CT Uu三检等敏感性 100 死菌活菌 尿液分泌物均可特异性 100 47 有诊断意义的报告报告方式 要包含4个因素对男性单纯性NG感染 敏感性可达95 对女性NG感染 敏感性只有50 不能作为诊断指标不能作为判愈指标 显微镜检查临床意义 48 淋菌培养临床意义 是临床诊断的金标准 是WHO推荐的淋病筛查的唯一方法是判愈的指标可以对疑似 或非生殖器部位标本 NG的菌株作进一步的鉴定可进行NG耐药监测 PPNG TRNG QRNG科研 49 三 生殖道沙眼衣原体感染的诊断标准 50 沙眼衣原体诊断标准 实验室检查方法 1 培养法 McCoy细胞特异性高 100 敏感性低价昂 费时 费力设备 2 抗原检测 直接免疫荧光试验 DFA 用种特异的沙眼衣原体主要外膜蛋白单克隆抗体用荧光素标记染色 需荧光显微镜 检查者要有经验 区别非特异性荧光 酶免疫吸附试验 ELISA 敏感性71 97 特异性97 99 可成批检测 快速免疫层析法 明窗试验等 51 明窗试验 clearviewchlamydia 临床意义此法诊断女性宫颈沙眼衣原体感染的敏感性为87 特异性为98 8 简便 快速 医生和病人都容易接受不是金标准注意事项标本的量一定要够 拭子要大一点 转动一圈 停留时间要长一点男性若分泌物少 可用首段尿液沉淀注意Na离子或其它原因造成的假阳性 52 3 核酸扩增试验 NAAT 聚合酶链反应与连接酶链反应 PCR LCR 荧光定量PCR NG CT核酸TMA双检 NG CT Uu三检等 优点 1 敏感性 90 97 特异性99 100 2 可以用尿液作检查 非侵袭性方法3 筛查 无症状病人缺点 1 价格昂贵需要贵重仪器 设备2 人员需要培训 53 200份标本同时用3种方法检测Ct结果 明窗试验IDEIAPCEFQ PCR阳性476266阴性153138134合计200200200 54 四 生殖器疱疹实验室诊断标准 55 生殖器疱疹诊断标准 实验室检查方法 1 病毒抗原检测 单克隆抗体免疫荧光试验 IFA 或酶免疫吸附试验 ELISA 来检测抗原 2 培养 看特征性细胞病变 特异性100 但敏感性不高 需设备条件 技术 3 核酸检测 荧光PCR 双检 三联检4 抗体检测 IgM 56 其它方法介绍 复合PCR 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 请在此输入您的文本 57 HSV快速检查方法 HSV IDEIA 酶免疫放大 与金标准相比 其敏感性达93 6 特异性达97 8 可同时检测HSV 1和HSV 2型文献报道 HSV 1致GH的比例在上升DAKO专利技术可成批 可单人份做2小时出结果可目测 可上机 58 M PCR与IDEIA检测HSV比较 HSV IDEIAM PCRIDEIA IDEIA Total 1665171 0131131Total166136302 59 五 尖锐湿疣实验室诊断标准 60 人类乳头瘤病毒诊断标准 实验室检查方法 过去行业标准中无实验室检测方