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文档简介

实验十六RNA的定量测定 一 实验目的掌握用地衣酚法测定RNA含量的原理和方法 二 原理当RNA与地衣酚试剂在沸水中加热时 RNA被酸降解 所产生的核糖进一步转变为糠醛 它与地衣酚 3 5 二羟基甲苯 在高铁离子的催化下可反应生成绿色物 后者在670nm处有最大吸收峰 在10 100mg mL范围内其光密度值与RNA浓度有线形关系 三 试剂和器材1 试剂0 1mg mL标准RNA溶液 地衣酚试剂 2 器材可见分光光度计 恒温水浴锅四 操作步骤1 标准曲线的绘制取12只试管分成6组 按下表操作 取2管的平均值 以DNA浓度为横坐标 光密度为纵坐标 绘制标准曲线 2 样品的测定取待测样品1mL 加蒸馏水1mL及二苯胺溶液2mL 沸水浴保温45min 冷却 然后在670nm波长出测定光密度值 根据测得的光密度值 从标准曲线上查得相应的RNA的mg数 按下式计算待测样品的RNA的含量 RNA 待测样品中测得的RNA的mg数 待测样品液中样品的mg数 X100 五 注意事项样品蛋白质含量高时 应先用5 TCA沉淀蛋白质 有较多DNA样品时也会发生干扰 可在试剂中加适量的
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