实验八 化学因素对微生物的影响.ppt

实验九理化因素对微生物的影响 一 实验目的 1了解某些物理因素因素对微生物生长的影响及芽孢对不良环境的抵抗能力 2了解某些化学因素因素对微生物生长的影响 二 基本原理 环境因素 包括物理因素 化学因素和生物因素 如温度 渗透压 紫外线 pH 氧气 某些化学药品及拮抗菌等对微生物的生长繁殖 生理生化过程产生影响 不良的环境条件使微生物的生长受到抑制 甚至导致菌体的死亡 但是某些微生物产生的芽孢 对恶劣的环境条件有较强的抵抗能力 三 实验材料 1菌种 大肠杆菌 枯草芽孢杆菌2培养基 牛肉膏蛋白胨培养基3其他物品 培养皿 无菌圆滤纸片 镊子 无菌水 无菌滴管 水浴锅 紫外线灯 黑纸 4药品 氯霉素 土霉素 高锰酸钾 结晶紫液 紫药水 四 实验内容及步骤 一 物理因素对微生物生长的影响 1 微生物生长的最适温度不同的微生物生长繁殖所要求的最适温度不同 根据微生物生长的最适温度范围高温菌 中温菌和低温菌 自然界中绝大部分微生物属中温菌 1 取6支装灭过菌牛肉膏蛋白胨培养液试管 每管装5mL 分别标明20 37 50 三种温度 每种温度2管 共6管 2 向每管接入培养18 20h的大肠杆菌菌液0 1mL 混匀 3 将上述各管分别按不同温度进行振荡培养24h观察结果 根据菌液的混浊度判断大肠杆菌和枯草芽孢杆菌生长繁殖的最适温度 2 微生物对高温的抵抗能力 不同的微生物对高温的抵抗力不同 芽孢杆菌的芽孢对高温有较强的抵抗能力 1 向培养48h的枯草芽孢杆菌和大肠杆菌斜面 各加入无菌生理盐水5mL轻轻刮下菌苔制成菌悬液 混匀 2 取8支装有灭过菌的牛肉膏蛋白胨培养液试管 每管装5mL培养液 按顺序1至8编号 共8支 3 单号 1 3 5 7 培养液管中各接入大肠杆菌菌液0 1mL 或2滴 双号 2 4 6 8 培养液管中各接入枯革芽孢杆菌菌液0 1mL 或2滴 混匀 4 将8支已接种的培养液管同时效入100 水浴中 10mim后取出1至4号管 再过10mim后 取出5至8号管 各管取出后立即用冷水或冰浴冷却 5 将各管置于37 温箱中培养24h后 观察和记录生长情况 以 表示不生长 表示生长 并以 表示不同生长量 3 紫外线对微生物的影响 紫外线主要作用于细胞内的DNA 使同一条链DNA相邻嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体 引起双链结构扭曲变形 阻碍碱基正常配对 从而抑制DNA的复制 轻则使微生物发生突变 重则造成微生物死亡 紫外线照射的剂量与所用紫外光灯的功率 瓦数 照射距离和照射时间有关 当紫外光灯和照射距离固定 照射的时间越长则照射的剂量越高 紫外线透过物质的能力弱 一层黑纸足以挡住紫外线的通过 本实验是验证紫外线的杀菌作用及不同微生物对紫外线的抵抗能力 1 取牛肉膏蛋白胨培养基平板4个 分别标明大肠杆菌 枯草芽孢杆菌等试验菌的名称 2 分别用无菌移液管取培养18 20h的大肠杆菌 枯草芽孢杆菌菌液0 1mL 或2滴 加在相应的平板上 再用无菌涂棒涂布均匀 然后用无菌黑纸遮盖部分平板 3 紫外灯预热10 15min后 把盖有黑纸的平板置紫外灯下 打开培养皿盖 紫外线照射20min 照射的剂量以平板没有被黑纸遮盖的部位 有少量菌落出现为宜 取去黑纸 盖上皿盖 4 37 培养24h后观察结果 比较并记录两种菌对紫外线的抵抗能力 4 氧气对微生物生长的影响 根据微生物对氧气的需求 可把微生物分为好氧菌 厌氧菌和兼性好氧菌 1 取肉膏蛋白胨半固体培养基试管4支 2 用穿刺接种法分别按种枯草芽炮杆菌 大肠杆菌 每种菌接种2支培养基试管 3 37 恒温培养48h后观察结果 注意各菌在培养基中生长的部位 四 实验内容 二 化学因素对微生物生长的影响 1不同药物的杀菌试验 1 取培养18 20h的大肠杆菌 枯草芽孢杆菌斜面各1只 分别加入5mL无菌水 用接种环将菌苔轻轻刮下 振荡 制成均匀的菌悬液 2 取4个无菌培养皿 每个试验菌皿在皿底写明菌名及测试药品名称 3 分别用无菌滴管加菌4滴 或0 2mL 菌液于相应的无菌培养皿中 4 将融化并冷却至45 50 的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约15ml 迅速与菌液混匀 冷凝 制成含菌平板 5 用镊子取分别浸泡在氯霉素 土霉素 红汞和结晶紫药品溶液户的圆滤纸片各一张 置于同一含菌平板 6 将平板倒置于37 温箱中 培养24h后观察结果 测量并记录抑菌圈的直径 根据其直径的大小 可初步确定测试药品的抑菌效能 2不同pH对微生物生长的影响 1 配制牛肉膏蛋白胨液体培养基 分别调pH至3 5 7 9和11 13管 每管盛培养液5mL 灭菌备用 2 取培养18 20h的大肠杆菌斜面1只 加入无菌水5ml 制成菌悬液 3 每管肉膏蛋白胨液体培养基中接种大肠杆菌液1滴 或0 1mL 摇勺置37 温箱中培养 培养24h后观察结果 根据菌液的混浊程度判定微