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文档简介
DNA的限制性内切酶酶切分析 1 酶切组分加入体积 2人一组 ddH2O7ul10 bufferEcoRI2ul质粒DNA8ulEcoRI3ul盖紧 混匀 稍离心 37 水浴反应1h 限制性内切酶 RestrictionEndonuclease RE 由细菌自身产生 能识别双链DNA分子中特定的碱基顺序 以内切方式水解核酸中的磷酸二酯键 产生粘性末端或平头末端 实验原理 EcoRI的作用模式图 产生5 突出粘性末端 GAATTC CTTAAG 5 3 5 3 EcoRI G CTTAA 5 3 3 5 OH P AATTC G 5 3 3 5 P OH EcoRI Bcl 2 1 9kb pBS 2 96kb pBS Bcl 2 4 86kb Bcl 2重组质粒的酶切模式图 2 点样 取4 l6 上样缓冲液加入20 l酶切产物 混匀后取10ul加到点样孔中 3 电泳 100V稳压进行电泳30分钟 4 观察结果 紫外分析仪上观察DNA存在处显亮绿色荧光条带 DNAMarker 样品 2000bp 1000bp 750bp 500bp 250bp 100bp 2961bp 1900b
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