没食子酸丙酯在大鼠体内生物利用度的测定.pdf

福建中医学院学报2 0 0 8 年6 月第1 8 卷第3 期 J o u r n a lo fF u j i a nU n i v e r s i t yo fT C MJ u n e2 0 0 8 18 3 没食子酸丙酯在大鼠体内生物利用度的测定 叶蕻芝1 蔡晶1 徐伟2 魏晓文2 郑良朴1 张凌燕1 郑春松1 胡 娟2 1 福建中医学院中西医结合研究院 福建福州3 5 0 1 0 8 2 福建中医学院药学系 福建福州3 5 0 1 0 8 关键词 没食子酸丙醋 生物利用度 稳定性 首过效应 中图分类号 R 2 8 5 5文献标识码 A文章编号 1 0 0 4 5 6 2 7 2 0 0 8 0 3 0 0 2 7 0 3 血栓性疾病是人类的主要杀手之一 血栓性 心脑血管病的死亡率在我国人口总死亡中约占 4 0 每年全国死于该病患者达2 0 0 万人 由于现 代社会来自工作 社会 生活等方面的影响 使心 脑血管病的发病率不断提高 且发病的年龄跨度 不断扩大 没食子酸丙酯 C 0 H 2 0 是从中药赤芍 中提取的有效成分没食子酸并经过结构改造而成 的化学药物 化学名为3 4 5 一三羧基苯甲酸丙 酯 在临床实践中证明没食子酸丙酯对心脑血管 疾病的治疗 疗效显著 副作用小 是一味理想的 治疗药物 由于目前其剂型主要为注射剂 给临床 用药上带来不便 如能开发出口服制剂 前景将非 常乐观 1 仪器与材料 1 1 仪器 L C 1 0 A t v p 单泵高效液相色谱仪 E l 本岛津 S P D 一1 0 A v p 检测器 日本岛津 C B M 一 1 0 2 色谱工作站 日本岛津 S h i m p a c k V P O D S 柱 大连伊利特 隔膜真空泵 天津市腾达过滤器 件厂 型号 G M O 3 3 定量进样系统2 0 斗l 0 4 5 p m 微孔滤膜 快速混匀器 常州国华电器有限公 司 型号 S K 一1 离心机 上海宏亭科学仪器厂 型号 T G 卜1 6 G A 1 2 试药 没食子酸丙酯注射液 山东方明药业 股份有限公司 批号 0 5 0 6 0 0 2 4 一羟基苯甲酸丙 酯 批号 4 4 7 9 0 肝素 1 0 0 0U n i l 江苏万邦生化 医药股份有限公司 批号 0 4 1 2 1 1 2 甲醇 色谱 纯 进1 2 1 水为超纯水 电阻 1 8M Q 考马斯亮 蓝 南京建成生物工程研究所 批号 2 0 0 5 1 2 1 2 氯化镁 无水氯化钙 磷酸二氢钾 无水碳酸钠 葡 萄糖 氯化钠 氯化钾等为分析纯 1 3 动物 S D 大鼠 雄性 体重2 5 0 3 0 0g 福建 中医学院动物房提供 小鼠雌雄各半 体重 2 0 2 g 福建省疾病预防控制中心提供 生产许可证 S C X K 闽 2 0 0 5 0 0 0 1 使用许可证 S Y X K 闽 2 0 0 5 0 0 0 1 2 实验方法与结果 2 1 口服没食子酸丙酯生物利用度的考察 2 1 1 色谱条件 1 色谱柱为S h i m p a c k V P O D S 柱 2 5 0m m 4 6m m 5 斗m 流动相为甲醇一2 冰醋酸 5 7 4 3 V V 溶液 流速为lm m i n 进样 量2 0 肛l 检测波长2 7 0a m 保留时间为5 7 5m i n 室温下操作 2 1 2 标准曲线的制备 分别取大鼠空白血浆 0 3m 1 8 份 于2I I l l 肝素荡过的刻度离心试管中 分别加入P G 对照液 浓度为1 0 0m g m 1 5 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 6 0 7 0 斗l 再各加入内标液 1 0 0 m g m 1 3 0 斗l 加甲醇至2l I l l 混匀器充分混匀 3 0 0 0r m i n 离心1 0m i n 取上清液过0 4 5 肛m 滤 膜备用 扪 在选定色谱条件下进样分析 测得空白 血样色谱图见图1 测定药物和内标峰面积值及 其比值见表1 所得标准曲线见图2 收稿日期 2 0 0 8 0 4 1 0 基金项目 福建中西医结合研究院科研基金资助课题 z X 5 0 0 2 福建省卫生厅中医药研究项目资助课题 w z 脚 福建省自然科学基 金项目 2 0 0 6 J 0 1 1 0 作者简介 叶蕻芝 1 9 6 8 一 女 副研究员 主要从事中药化学的基础研究 福建中医学院学报第1 8 卷 置 V 越 憩 小 逛 5 Z 一 保留时间 m i n 图1空白血样色谱图 注 1 P G 对照品2 内标 表1P G 及内标峰面积比值 j 磐2 丑lj 蝮 墨1 咯o 5 枯o 01 02 03 0 1 0 5 0 6 0 7 0 8 0 浓度 m g m 1 图2 空白血样标准曲线 以P G 和内标峰之比 Y 对P G 浓度 X 用最 小二乘法计算得回归方程 Y 0 0 2 4 9 5 6 X 一 0 0 6 3 8 3 r 0 9 9 9 4 结果表明P G 在2 5 3 5 斗g I I l l 浓度范围内呈良好的线性关系 2 1 3 口服生物利用度的测定 将大鼠分为8 组 每组5 只 3 0m g k g 灌胃 分别于2 0 3 0 3 5 4 0 4 5 6 0 9 0 1 2 0r a i n 取血 血样同上法处理 进样2 0 斗l 测定其血药浓度 给大鼠腹腔注射没食子酸丙酯注 射液3 0m g k gr 3 1 分别于1 5 1 0 1 5 2 5 3 5 6 0 9 0 1 2 0m i n 取血 血样同上法处理 进样2 0 肌l 测定其 血药浓度 结果见表2 表3 表2口服药物和内标峰面积比值 根据结果计算得 F A U C 口f l t A U C 注射 0 2 2 3 2 0 3 2 1 4 9 0 1 7 1 0 0 1 0 3 8 6 表3 注射药物和内标峰面积比值 8 4 1 6 9 2 1 4 7 5 0 6 9 3 5 5 6 1 0 5 0 2 4 7 1 9 5 5 3 2 2 4 9 8 2 9 8 4 2 1 0 4 3 7 1 9 7 3 0 2 5 6 1 0 9 3 3 5 6 3 7 8 9 1 7 7 5 0 5 6 4 7 7 1 6 3 5 8 5 4 0 3 7 6 5 5 1 1 8 9 6 9 5 0 7 6 4 0 8 5 1 1 2 8 3 1 5 3 4 9 5 6 1 7 1 4 11 6 0 1 4 9 2 9 2 0 0 6 1 2 9 4 8 0 7 2 0 6 8 3 0 4 5 7 2 6 5 O 6 3 0 0 0 6 0 1 9 3 8 7 9 0 0 8 5 5 1 0 O 0 0 5 6 5 6 0 0 0 1 5 3 1 0 7 4 6 4 6 0 3 4 1 3 7 2 3 6 9 4 7 5 6 9 1 2 3 8 3 9 6 0 1 6 9 1 5 3 0 0 1 9 5 6 9 4 9 0 2 1 3 4 7 2 2 0 2 1 4 4 4 2 4 0 2 1 4 9 0 1 7 0 根据结果计算得 F A U C 口J l t A U C 注射 0 2 2 3 2 0 3 2 1 4 9 0 1 7 1 0 0 1 0 3 8 6 5 m巧巧够 如协 第3 期叶蕻芝等 没食子酸丙酯在大鼠体内生物利用度的测定2 9 2 2 肝首过效应的考察 2 2 1简易肝微粒体的制备 4 小鼠脱颈椎处死后 迅速取出肝脏放入冰浴中 称取肝组织5g 加K H 液 N a C l11 9m m o l L N a 2 C 0 32 5m m o l L K C I4 6 m m o l L K H 2 P 0 41 2m m o l L C a C l 22 5m m o l L 葡萄 糖1 1m m o l L 至约2 51 1 1 l 组织匀浆 在4 1 0 0 0 0r m i n 离心2 0m i n 取上清液备用 肝微粒体液 2 2 2 没食子酸丙酯在肝微粒体液中的代谢 取 肝微粒体液2m l 分别加0l x l 和4 0 斗l 没食子酸 丙酯标准液 再加入K H 液制成体积为1 0m l 的 混和液 取上述混合液置3 7 水浴中 每1 0m i n 震摇1 次 通空气5s 在0 5h 后各取0 9m l 加 内标1 0 斗l 加氯仿6m l 涡旋3 0s 3 0 0 0r m i n 离 心1 0m i n 取氯仿层4r n l 置5 5 水浴上用N 2 吹 干 再用1 0 0I L l 流动相溶解 进样2 0 肛l 在选定 色谱条件下测定得代谢谱图见图3 图4 5 4 名3 詈z 塞t 一1 保留时问 n a n 图3 空白肝微粒体液色谱圈 图3 中未见P C 色谱峰 说明其在肝微粒体液 中基本被代谢完全 一 保留时间 r a i n 图4 加入P G 4 00 1 肝微粒体液色谱图 2 3 蛋白测定 将肝微粒体液稀释1 0 倍 取2 支 试管 一支加蒸馏水6 0 斗l 另一支加稀释后的肝 微粒体液6 0 斗l 各加考马斯亮蓝3m l 在5 9 5n m 下测紫外吸收 测得蛋白浓度 O 3 4 2 I 0 1 3 5 3 0 6 2 8 1 5 8 3 7 m g m 1 3 结果与讨论 通过对口服没食子酸丙酯在大鼠体内生物利 用度的考察 得出其生物利用度 F 仅为1 0 3 8 6 在人工胃 肠液中没食子酸丙酯稳定 但在小鼠肝 微粒体液中代谢明显 肝脏的首过是造成药物口 服生物利用度低的主要原因 在灌胃的大鼠血液 色谱图中在3m i n 出现明显色谱峰 这与没食子 酸对照品的色谱峰一致 见图5 图6 5 童a 蓍z 心 逛1 一I t 保留时间 m i n 图5 口服血液色谱峰 2 O3 O I O 5 一 保留时间 r a i n 圈6 没食子酸对照品色谱峰 上图表明没食子酸丙酯口服后在大鼠肝脏中 被代谢为没食子酸 因此认为肝首过效应是造成 口服没食子酸丙酯在大鼠体内生物利用度低的主 要原因 参考文献 1 曾洁 楼永明 高效液相色谱法测定注射用通脉脂的含量 J 海峡药学 2 0 0 1 1 3 4 3 0 3 1 2 王跃生 李计萍 杜贵友 等 高效液相色谱法测定家兔血浆 中赤芍8 0