螺旋藻 论文.doc

螺旋藻的药理和临床研究新进展 孙春燕螺旋藻粉的药理和毒性研究 刘用国 王江融 李菊芬 宝玉荣 作者：刘用国 王江融 李菊芬 宝玉荣单位：刘用国 王江融 李菊芬 福建省药品检验所；宝玉荣 广东深圳万乐药业有限公司关键词：海峡药学990320 螺旋藻含有丰富的蛋白质，由18种氨基酸组成，其中有人体必需的8种氨基酸和6种维生素，还有人体必需的微量元素等。具有防癌，抗癌，提高机体免疫功能和抗疲劳等作用1。本文对螺旋藻的部分药理作用和急性毒性进行研究2，结果报道如下。1 材 料1.1 螺旋藻粉 福清市新大泽螺旋藻有限公司提供(使用时制成每毫升含36mg的混悬液) .螺旋藻多糖的药理作用研究螺旋藻多糖,抗辐射,抗衰老,抗疲劳,罗庆良,熊国林,王瑾,徐晶,谢应先,陈婉华,王艳丽, 螺旋藻多糖 螺旋藻多糖(Polysaccharide of Spirulina)是从螺旋藻中提取的一种无毒的天然产物，具有多种生物学活性。为了进一步探讨螺旋藻多糖的作用，本文以小鼠为动物模型，观察极大螺旋藻多糖对小鼠生理功能的影响。螺旋藻多糖可以提高受射线致死剂量照射的小鼠30天内的存活率；促进小鼠多能干细胞和造血祖细胞的增殖和分化；促进受到辐射损伤的小鼠造血系统的恢复，增强小鼠的抗辐射能力。螺旋藻多糖可以提高小鼠的廓清指数，提高机体的非特异性免疫力；可以提高全血中超氧化物歧化酶（SOD）的活性，降低肝组织中过氧化物的含量，延缓机体衰老；螺旋藻多糖还可以提高小鼠的耐力游泳时间，增强机体对疲劳的耐受力。 Polysaccharide of S.Maxima (PSM) isolated form Spirulina is one kind of natural product. The PSM has many biological functions. To study the functions of PSM, we exam the effects on the physiological functions of the mice.The PSM could increase the 30 days survival rate of the mice irradiated lethally by 60Co- ray, accelerate the CFU-S and CFU-MIX proliferate and differentiate, enhance the radioprotective capability of the mice. The PSM could increase the phagocytic index (K) of the mice. It showed that PSM could raise the nonspecifici immunity. The PSM could enhance the SOD activity and decrease the LPO concentration of the liver, postpone the aging. PSM also has the anti-fatigue effect. 山东医药工业2001年总目录螺旋藻多糖对小鼠免疫系统的作用朱爱民等(6，44)扬州大学医学院近几年主要科研成果一览表螺旋藻多糖的化学保护和抗肺衰老的药理研究 螺旋藻藻蓝蛋白的研究进展本文综述了近年来螺旋藻藻蓝蛋白的提取、纯化、理化特性、生理活性及产品开发等方面的研究进展情况,并提出了未来几年研究的主要方向在于提取工艺、药品开发和质控方法.中国海洋药物1998年04期钝顶螺旋藻的药用价值张成武,吴洁,欧阳平凯 螺旋藻属蓝藻门颤藻科螺旋藻属(Spir-ulina),是一种无分支、螺旋形丝状蓝藻(或蓝菌藻Cyanophyta)。人们常在碱性湖泊中找到它,有时甚至在pH值高达11的湖泊中找到它,而这么高的pH值能抑制绝大多数其它藻类和微生物的生长。螺旋藻富含蛋白质、维生素、矿物质,必需氨基酸和必需脂肪酸(例如-亚麻酸)的含量也很丰富。现在,人们对螺旋藻的兴趣不仅限于其丰富的营养价值,许多研究人员己经开展了关于螺旋藻潜在药用价值的研究。其内容涉及降低血液中的胆固醇含量、防癌抗癌、增强免疫功能、增加肠道乳酸菌群、降低重金属和药物的肾毒性以及放射防护等诸多方面。目前研究较多的是钝顶螺旋藻Spirulina platensis(Notdst.)Geitl.【作者单位】：南京化工大学生物工程与科学系;南京化工大学生物工程与科学系;南京化工大学生物工程与科学系 南京 210009;南京 210009;南京 210009【分类号】：R285【DOI】：cnki:ISSN:1002-3461.0.1998-04-008【正文快照】：螺旋藻属蓝藻门颤藻科螺旋藻属(Spir一ulina),是一种无分支、螺旋形丝状蓝藻(或蓝菌藻Cyanophyta)。人们常在碱性湖泊中找到它,有时甚至在pH值高达11的湖泊中找到它,而这么高的pH值能抑制绝大多数其它藻类和微生物的生长。螺旋藻富含蛋白质、维生素、矿物质,必需氨基酸和必需脂肪酸(例如7一亚麻酸)的含量也很丰富。现在,人们对螺旋藻的兴趣不仅限于其丰富的营养价值,许多研究人员已经开展了关于螺旋藻潜在药用价值的研究。其内容涉及降低血液中的胆固醇含量、防癌抗癌、增强免疫功能、增加肠道乳酸菌群、降低重金属和药物的肾毒性以及放1刘力生,郭宝江,阮继红,王勤,戴馨仪,陈林香,吴伯堂; 螺旋藻多糖对机体免疫功能的提高作用及其机理研究 J;海洋科学; 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Results HSV-2 gB mRNA were less expressed in PSP treated group than that in the control (P0.01).Conclusion One of the mechanism of PSP against HSV-2 may be explained by the considerable inhibition of HSV-2 gB gene trscription. 【Key words】 polysaccharide from spirulina platensis; HSV-2; in situ hybrization 单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus-2， HSV-2)在人群中感染较为普遍。孕妇生殖器感染可引起早产、流产、死胎、胎儿畸形以及智力低下等，并与子宫颈癌的发生密切相关1，2。近几年研究表明：钝顶螺旋藻多糖（polysaccharides from Spirulina platensis，PSP）是钝顶螺旋藻中具有抗肿瘤、抗辐射、抗病毒和免疫调节作用的重要生物活性物质3，4。我们的前期实验结果表明，PSP有抗HSV-1的作用，但PSP抗HSV-2的实验研究未见报道。本文研究了PSP对HSV-2糖蛋白gB mRNA表达的抑制作用，结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂配制 螺旋藻多糖：参照文献5，6，采用改良的三氯乙酸去蛋白法提取螺旋藻多糖，纯度达92以上。以双蒸水配成10mg/ml母液，过滤除菌，分装，4保存，临用时以DMEM培养基稀释至所需浓度。 细胞培养所用的DMEM干粉培养基为美国GIBCO公司产品，胰酶为Amersco公司产品，新生牛血清为杭州四季青公司产品；地高辛DNA检测试剂盒为Roche公司产品。 1.2 细胞株与病毒 非洲绿猴肾细胞Vero细胞株为本室保存传代细胞系。于DMEM基础培养液中加入10%的新生牛血清，100U/ml青霉素，100g/ml链霉素，置5CO2孵箱中37培养，3天传代1次。标准单纯疱疹病毒2型（HSV-2）333株来源于中国协和医科大学，Vero细胞中传代，毒种保存于-70。 1.3 病毒滴度的测定 以TCID50表示病毒毒力。取上述制备好的毒株，做10倍系列稀释，10-1至10-10。将各稀释度的毒株接种于Vero细胞，各6复孔，同时设阴性对照。37培养3天后，观察细胞病变，以出现细胞病变的最高稀释倍数的倒数作为TCID50。 1.4 原位杂交检测HSV-2糖蛋白gB mRNA的表达 1.4.1 探针的设计7，8 根据Gen Bank中HSV-2 全基因序列，设计对应于HSV-2糖蛋白gB基因序列的寡核苷酸探针序列为5-ggcgactttgtgtacatgtccccgttttacggctaccgg -3，由上海生工公司合成，并于5末端标记地高辛。 1.4.2 原位杂交9 Vero细胞制成2105/ml细胞悬液，接种在放有盖玻片（飞片）的培养板中，每孔加入1.8ml细胞，于5CO2孵箱中37培养2448h，弃生长液，加约100 TCID50病毒液50l，37吸附2h，吸出病毒液，加200l不同浓度的PSP（100g/ml、50g/ml和10g/ml）， 置5CO2孵箱中37培养。24h后，取出细胞飞片经4%多聚甲醛室温下固定20min，PBS漂洗2次，梯度乙醇脱水，蛋白酶K（1g/ml）37消化30min，PBS漂洗2次，2SSC洗2次，梯度乙醇脱水，空气干燥。每张飞片滴加50l 杂交液，预杂交2h；加入含探针的杂交液，置于密闭湿盒中，60过夜。杂交结束后，飞片在室温下依次经2SSC、1SSC、0.5SSC漂洗各2次，于Buffer洗液中10min，封闭液Buffer中37孵育30min，加入抗体液37孵育3060min，Buffer洗液中10min，置Buffer平衡10min，新鲜配制的显色液中避光孵育10min至数小时，终止反应。中性树胶封片。 实验同时设3个阴性对照：(1) 杂交前用Rnase A 100g/ml预处理细胞飞片，37，1h；(2) 加未标记的探针进行反应；(3) 正常的Vero细胞。阳性对照为未加PSP作用的HSV-2感染Vero细胞组。所有操作步骤与其他样本相同。结果判定：400光镜下随机选择视野，观察200个细胞，计数杂交阳性的细胞数。阳性信号呈明亮的蓝紫色。 1.5 统计学方法 核酸杂交结果以(xs)表示，多组数据比较采用方差分析。转贴于 中国2 结果 光镜下观察原位杂交结果，可见表达HSV-2糖蛋白gB基因的Vero细胞被染成蓝紫色，染色部位位于细胞浆，而正常Vero细胞未见阳性信号表达（图1）。不同剂量PSP作用的HSV-2感染组，其糖蛋白gB mRNA的表达显著低于阳性对照组（P0.01），10g/ml、50g/ml、100g/ml PSP可使gB mRNA的表达由86.61%分别降至62.29%、46.12%和31.56%（表1）。 表1 PSP对HSV-2糖蛋白gB mRNA表达的影响 注：与阳性对照组比较，*P0.01 3 讨论 目前临床应用的抗疱疹病毒药物主要为核苷类衍生物，多通过单一环节抑制病毒复制，如作用于病毒的DNA合成酶，它们以酶反应底物类似物的形式与正常底物竞争，掺入病毒核酸链，造成病毒核酸复制中断，发挥抑制病毒作用，但易产生耐药性、副作用大10，11。因此研究作用于病毒基因复制、转录及转译等多环节的药物和制剂是当今国内外开发抗病毒药物的热点。 我们的前期研究工作发现，PSQ对Vero细胞无明显的毒性，可明显阻滞HSV-2向细胞吸附，并有效地抑制病毒复制，但不影响病毒的释放。HSV-2为双股DNA病毒，其复制是一个相当复杂但又十分程序化的过程。已知HSV-2包膜糖蛋白