水源的大肠菌群检测与生理生化测定.ppt

实验十一水源的大肠菌群检测与生理生化测定 实验目的 1 了解大肠菌群的检测在环境评估和食品质量监测中的重要意义 2 掌握细菌在鉴定培养基的识别方法以及鉴定培养基的选择原则 3 掌握大肠菌群最近似数的测定方法 实验原理 大肠菌群是指一群在37 24小时培养的条件下能发酵乳糖产酸 产气 需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 主要由肠杆菌科的四个属内的细菌组成 埃希氏菌属 柠檬酸杆菌属 肠杆菌属 克雷伯氏菌属 水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物 水的微生物学的检验 特别是肠道细菌的检验 在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义 同时也是评价水质状况的重要指标 国家饮用水标准规定 饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个 细菌总数每mL不超过100个 大肠菌群在肠道内数量最多 国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指示菌 本实验采用多管发酵法来测定水样中的大肠菌群 多管发酵法可运用于各种水样的检验 本实验包括乳糖蛋白胨液体培养基初发酵 伊红美兰培养基 EMB 平板分离和乳糖蛋白胨液体培养基复发酵三个部分 水的大肠菌群数是指100mL水样内含有的大肠菌群实际数值 以大肠菌群最近似数 MPN 表示 实验材料 1 培养基乳糖蛋白胨发酵培养基 蛋白胨1 牛肉膏0 3 乳糖0 5 NaCl0 5 1 6 溴甲酚紫乙醇溶液 产酸指示剂 pH7 2 7 4 分装于装有杜氏小管的试管中 115 20分钟伊红美兰培养基 蛋白胨1 乳糖1 NaCl0 5 琼脂2 5 pH7 6 115 20分钟 2 伊红水溶液 0 5 美兰水溶液 单独灭菌 2 无菌水 灭菌取水器 载玻片等 实验步骤 一 水样采集采集疑似大肠菌群较多的水源 方法同实验十 二 水样稀释根据水样的污染程度将水样稀释成10 1 10 2稀释度 三 初发酵检测 乳糖蛋白胨液体培养基 四 平板分离将阳性结果的初发酵培养物分别划线接种于伊红美兰平板上 连续划线或者分区划线法 37度培养18 24小时 观察结果 阳性结果的标准 1 深紫黑色 有金属光泽 2 紫黑色 不带或略带金属光泽 3 淡紫红色 中心颜色较深 大肠菌群能够分解乳糖产生大量的有机酸 在低pH值条件下 两种染料结合生成沉淀 可起产酸指示剂的作用 五 革兰氏染色观察将阳性结果的菌落取部分涂片 进行革兰氏染色 观察结果 阳性结果的标准 革兰氏阴性 且无芽孢 六 复发酵确认将革兰氏阴性无芽孢的菌落接种于乳糖蛋白胨液体培养基中 每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1 2个 37度培养24小时 观察结果 阳性结果的标准 发酵液变为黄色杜氏小管内有气泡 七 查表计数根据三个梯度 即三个取水样的体积 每5管中出现阳性结果的管数 查阅GB T5750 12 2006生活饮用水标准检验方法微生物指标总大肠菌群MPN检索表 得到大肠菌群5次重复测试统计表的细菌最可能数 再乘以相应稀释倍数 即可换算为100mL水样中的大肠菌群数 实验结果 1 记录本次实验的检测数据 每升水样中大肠菌群数量 2 参照已有的水源国家卫生标准对检验的水源地的水质作出评价 饮用水 水源水 游泳池水卫生的国家标准饮用水1L水不得超过3个准备加氯消毒后供饮用的水 水源水 1000准备净化处理及加氯消毒后供饮用的水 水源水 10000游泳池水 100 实验思考 1 什么是大肠菌群 2 水中若