生物化学实验 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳.doc_第1页
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实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 一、实验目的 1、了解电泳的基本原理。 2、掌握醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。二 、实验原理 电泳的基本原理： 1、任何一种物质的质点，由于其本身在溶液中的解离或由于其表面对其他带电质点的吸 附，会在电场中向一定的电极移动。 2、一般来说，在碱性溶液中（即溶液的PH值大于等电点pI），分子带负电荷，在电场中 向正极移动；而在酸性溶液中刚好相反。3、醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。 4、醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成，它具有均一的泡沫样的结构，有强渗透性，对分子 移动无阻力，作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少，应用范围 广，分离清晰，没有吸附现象等优点。三 、实验步骤 1. 浸泡 用镊子取醋酸纤维薄膜1张，分光泽面和粗糙面。为了点样方便，在粗糙面离边缘2cm处用铅笔轻轻的画一条与边缘平行的直线，然后将薄膜放在巴比妥缓冲液中浸泡20min，用镊子取出纤维薄膜，用滤纸吸干，平置于载玻片上粗糙面朝上 2 点样： 取出2块载玻片，分别滴一滴血清蛋白A和血清蛋白B，然后用盖玻片的平边取样（注意均匀），然后轻轻的在纤维薄膜的铅笔横线上点样（注意要轻） 3 电泳： 在电泳槽中搭建好滤纸桥，倒入缓冲液（注意两边液面高度一致），将纤维薄膜架 于桥上（点样端靠近负极，点样面朝下），接好导线，调节电泳仪参数，电泳30min 4. 染色 取出纤维薄膜，于培养皿染色液中染色10min. 5. 漂洗 取出纤维薄膜，放在漂洗液中漂洗数次，漂洗到可见色带清晰的电泳图谱。四、
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