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实验1大肠杆菌的分离与培养实验时间 2011 5 23 1 利用液体培养基可以扩大培养大肠杆菌 2 利用固体培养基对大肠杆菌进行划线分离 培养 目的是获得单菌落 3 利用附加抗生素的培养基筛选含有重组dna的受体细胞 实验原理 器材 高压灭菌锅 培养皿 恒温水浴锅 恒温培养箱 摇床 酒精灯 涂布器 接种环 移液枪 电子秤 锥形瓶 药品 lb液体和固体培养基 去离子水 70 酒精 氨苄青霉素 大肠杆菌 含有重组dna的大肠杆菌 实验器材与药品 实验步骤及现象 1 筛选分离含有重组dna的受体细胞 设置对照组 2 4号 和实验组 1 3号 向实验组培养皿中加氨苄青霉素 向1 2号加含有重组dna的大肠杆菌向3 4号加混合大肠杆菌 既有普通的 也有转基因的 实验步骤及现象 用涂布器涂布i 用酒精灯灼烧涂布棒 靠近涂布端的手柄也要灼烧 静置冷却 以防温度过杀死微生物 ii 用移液枪取50 l的大肠杆菌加至培养基上 1000 l 1mliii 用涂布棒将其均匀涂布于平板上 iiii 静置5min 倒置培养于37 c的培养箱中 在培养皿壁上写 姓名 实验名称 一天后调查统计各个处理菌落数目 实验步骤及现象 2 大肠杆菌单克隆的分离与培养 设置对照组 6号培养皿 和实验组 5号培养皿 向实验组培养皿中加入氨苄青霉素 实验步骤及现象 用接种环划线i 将接种环放在火焰上灼烧 直到其烧红 ii 在火焰旁冷却接种环 同时打开离心管 iii 在火焰旁将已冷却的接种环伸入普通大肠杆菌菌液中 蘸取一环菌液 盖上试管 iiii 左手将皿盖打开一条缝隙 右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划三至五条平行线 盖上皿盖 iiiii 灼烧接种环 待其冷却后 从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线 重复这一操作 在三 四 五区域划线 实验步骤及现象 划完线在培养壁上写班级 性名 实验名称 放在37 c培养箱中倒置培养 一天后处理菌落数目 3 配制lb固体培养基 1 28g固体培养基 40ml的水 一瓶加氨苄青霉素 另一瓶不加 灭菌 倒平板 实验步骤及现象 未加氨苄青霉素所加菌液 转基因分离方法 涂布现象 分布均匀 数量适中 实验结果与分析 未加氨苄青霉素所加菌液 混合分离方法 涂布现象 分布均匀 但有杂菌 实验结果与分析 未加氨苄青霉素所加菌液 普通分离方法 划线现象 无大肠杆菌 但有几个黄色杂菌 实验结果与分析 加氨苄青霉素所加菌液 转基因分离方法 涂布现象 分布均匀 相对较多 实验结果与分析 加氨苄青霉素所加菌液 普通分离方法 划线现象 有菌 集中分布 不均匀 相对少 实验结果与分析 加氨苄青霉素所加菌液 混合分离方法 涂布现象 分布均匀 数量较多 但有黄色透明杂菌 实验结果与分析 实验结果与分析 这次实验过程中 总的来说较上次在分工方面有了显著的提高 故而实验做的比较有序 但美中不足的是实验结果依然与预期有不同之处 培养基被标记错误 杂菌较多 无菌操作
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