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题目：猪瘟活疫苗（细胞源）细胞制备标准操作规程 重庆。公司GMP管理文件猪瘟活疫苗（细胞源）细胞制备标准操作规程颁发部门：GMP办公室起草人：日期：编号：SOP-PM-0054-00审核人：日期：执行日期：批准人：日期：分发部门：生产部、技术部、质管部1 目的建立猪瘟活疫苗（细胞源）细胞制备标准操作规程，确保细胞制备过程规范化、标准化，防止污染和交叉污染。2 范围适用于猪瘟活疫苗（细胞源）细胞制备岗位。3 责任者猪瘟活疫苗（细胞源）细胞制备岗位操作人员；QA人员。4 内容4.1 准备工作4.1.1 各种溶液、器皿的准备4.1.2 含双抗（300单位/ml）的汉克氏液、0.25%胰酶溶液、75酒精、含双抗（100单位/ml）的乳汉液、犊牛血清量足够当次操作；4.1.3 手术刀、手术剪、镊子、盛有玻璃珠的消化瓶、废液缸、细胞转瓶、纱囊（以上物品均要求无菌）量足够当次操作；4.1.4 生产操作空白记录、生产状态卡、记录用笔等应齐全；4.1.5 水浴锅已清洁且可用；4.1.6 操作无菌间“清场合格证”。4.2 睾丸的处理4.3 将装有牛睾丸的保温盒外表消毒后传递进无菌操作间。将处理好后的牛睾丸按无菌操作除去被膜、副睾。称质量M1克，根据M1确定15L转瓶的瓶数=（M1/4）。4.3.1 机械消化将去除被膜、附睾的睾丸组织剪成12mm小块，含双抗（300单位/ml）的汉克氏液反复冲洗，至上清液清亮为止。4.3.2 化学消化将组织块移入消化瓶中，加入6倍质量睾丸的0.25%胰酶溶液，塞紧瓶口，置37水浴锅中消化40分钟，中间每隔10分钟轻摇一次，待组织块蓬松，表面起绒毛即消化完毕。用75%酒精消毒瓶体表面，移至百级操作台，倾去胰酶。4.3.3 细胞生长液的准备乳汉液（DHP） 1,4000 mL双抗 10 mL犊牛血清(BVD/MD抗体阴性) 1350 mL 7.5%碳酸氢钠溶液将PH值调至7.2-7.44.3.4 细胞的分散弃去胰酶溶液后，用同量的乳汉液脱酶3次。4.3.5 以玻璃珠振摇法（放入装有适量玻璃珠的三角瓶中，用力快速振摇50次，振幅不小于10cm）分散细胞，再加入细胞生长液100 mL左右，待组织块沉淀后，将上清通过带有3层纱布进行过滤，组织块中加入细胞生长液50 mL左右，以玻璃珠振摇法分散细胞收集细胞悬液。如此再反复进行2次，振摇手法宜先轻后重。4.3.6 单层原代细胞转瓶的制备4.3.6.1 按照按猪瘟活疫苗（细胞源）生产主要用液配制操作规程配置好细胞生长液。4.3.6.2 将细胞悬液中加入分装于1.5 L转瓶中，装量为瓶容积的110，塞紧瓶口，置37进行旋转培养，转速为每小时1012转，培养的细胞一般于35天长成致密单层。4.4 清场4.4.1 将穿戴过的洁净服、口罩、鞋、帽、使用过的器皿进行收集、消毒。4.4.2 清除废弃的麻绳、纸屑、棉花等，并将其放
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