紫外分光光度仪的性能测定.doc

专业：_ _姓名：_ _学号：_日期：_地点：_ _实验报告课程名称：_大学化学实验P_指导老师：_ _成绩：_实验名称：_紫外分光光度仪的性能测定_实验类型：_验证性_同组学生姓名：_ _一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验目的和要求1、 掌握紫外分光光度仪的性能测试内容及测定方法（中国药典方法）。2、 熟悉紫外分光光度仪的操作方法。3、 了解紫外分光光度仪的构造原理。二、实验原理1、紫外-可见分光光度计的检测原理：利用某些物质的分子吸收200-800nm光谱区的辐射进行分析测定的方法，属于分子吸收光谱。紫外分光光度计按光路不同可分为：（1）单光束分光光度计。特点：使用时来回拉动吸收池移动误差、对光源要求高、比色池配对。（2）双光束分光光度计。特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差、对光源要求不高、可以自动扫描吸收光谱。（3）双波长分光光度计。特点：利用吸光度差值定量、消除干扰和吸收池不匹配引起的误差。装 订 线装 订 线2、 紫外-可见分光光度计的性能好坏，会直接影响到测定的结果准确性，因此在使用前需进行检验校正。 3、 利用重铬酸钾溶液在规定波长处的吸收系数来检验仪器吸光度的准确性。 4、 同种厚度的比色皿，由于材料与工艺的不同往往会导致其透光率不一致，从而会影响到测定结果，故使用时需加以选择配对。5、 光的吸收谱曲线和光吸收定律 a、光强度：光强度市直单位时间内照射在单位面积上的光的能量。用字母 I 表示，它与单位时间照射 在单位面积上的光子的数目有关，与光的波长没有关系 b、透射率：T=It/I0 T愈大，物质对光的吸收愈少，T=0%，光全部被吸收，T=100%，表示光全部透过P.实验名称：_紫外分光光度仪的性能测定_姓名：_学号：_ c、吸光度：A=- logT= log I0/It ，A越小，物质对光的吸收越少；A=0，表示光全部透过；A=无穷，光全部吸收 d、郎伯-比尔吸收定律 A=k1b k1：比例系数，b：液层厚度郎伯定律 A=k2c k2：比例系数，c：溶液浓度比尔定律 A=kbc装 订 线三、主要仪器与试剂仪器 型紫外分光光度计，试剂 重铬酸钾溶液、蒸馏水、擦镜纸、碘化钠溶液、亚硝酸钠溶液。四、实验步骤 1、吸光度的准确度吸光度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120干燥至恒重的基准重铬酸钾约50mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处（先进行扫描得到波峰和波谷的波长）测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较，符合下表的规定。 a、打开紫外分光光度计的软件，等待系统自动校正 b、两个比色皿加入硫酸溶液，一个作为样品位，一个作为参比位，用以校正测量基线。 c、吸收度检定：样品池的比色皿用样品期硅酸重铬酸钾润洗三次后，先进行扫描得到波峰和波谷 的波长 d、在测得的相应4个波峰、波谷点规定的波长处，测定吸光度并计算其吸收系数，并与规定的吸 收系数相比，比较是否符合药典的规定。 e、两个比色皿加入蒸馏水，一个作为样品位，一个作为参比位，用以校正测量基线。2、杂散光的检查 杂散光的检查可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长 处测定透光率，应符合表中的规定。 分别侧定一定浓度的碘化钠(1.00%, 220nm,T0.8%)和亚硝酸钠(5.00%,340nm,lk0.8%)水溶液在杂 散光影响比较显著的波长处的透光率，置lcm石英吸收池中，比较是否大于规定值。P.实验名称：_紫外分光光度仪的性能测定_姓名：_学号：_五、实验数据记录和处理 (1)吸光度准确度的检验表1. 重铬酸钾硫酸溶液校正吸光度的准确度数据表试剂浓度(g/ml)波长（nm）A1A2A3A平均吸光系数(E1%/1cm)3520.64840.64760.64590.6473107.17 重铬酸钾的硫0.006043130.29340.29420.29390.293848.64 酸溶液2560.87220.87240.87240.8723144.42 2350.75040.750.75030.7502124.21 表2. 重铬酸钾硫酸溶液吸光度的测定值与理论值的比较 波长（nm）所测吸光系数(E1%/1cm)药典规定吸光系数(E1%/1cm)许可范围235124.21 123.0-126.0256144.42142.8-146.231348.6447.0-50.3352107.17 105.5-108.5（2) 杂散光的检查表3. 杂散光的检查数据表试剂浓度%(g/ml)测定用波长/nmT1%T2%T3%T%平均药典中T%的记录值NaI1.00 2200.050.050.050.058%NaNO25.00 3400.020.020.020.028%实验结论：由上述两表可知，紫外分光光度计基本符合要求。P.P.实验名称：_紫外分光光度仪的性能测定_姓名：_学号：_六、讨论、心得 1、 注意要吸收池配对。 2、 注意比色皿每次测定时的方向。 3、 比色皿要保持清洁，池壁上液滴应用绸布或擦镜纸擦干，不能用手拿透光玻璃面。 4、 测定样品前应检查所用溶剂在测定样品所用波长附近是否有吸收，要求不得有干扰吸收峰。 5、 样品溶液浓度应适当，一般应使测得的吸收度控制在0.20.7。 6、 操作结束后，应仔细检查样品室内是否有溶液溢出，若有溢出，必须及时七、思考题 1、同组比色皿透光性的差异对比色测定有何影响？ 答：进入比色皿的选定光线应该是稳定的(强度稳定、波长稳定），它在比色皿中被溶液吸收一部分 能量后再穿出比色皿而加入光电池产生电信号得到读数，然后进行结果计算。如果有比色皿本 身透光率的差异而出现的不是溶液对光线的吸收，而这个差异产生的电信号数值又算在样品溶 液的电信号内，这就产生了测定的读数误差，从而导致计算结果有不应该有的误差。 2、检查分光光度计的下列性能（波长精度、稳定度、灵敏度、重现性、线性），有什么实际意义？ 答：波长精度是指仪器波长指示器上所示波长值与仪器实际输出的波长值之间的符合程度。，用二者 之差来衡量其准确度性。 波长重复性是指在对同一个吸