不同浓度乙醇灌流液对牛蛙离体心脏活动影响.doc

不同浓度乙醇灌流液对牛蛙离体心脏活动影响一、【目的要求】1、学习斯氏离体蛙心灌流法。2、了解心肌的生理特性。3、探究不同浓度酒精对离体心脏活动的影响。二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。本实验采用静脉内注入乙醇的方法,观察了不同浓度乙醉对蟾蛤血压和心率的影响。3、 【实验仪器】牛蛙3只、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、滴管、培养皿(或小烧杯)、纱布、棉线、任氏液。蛙心套管(斯氏套管或八木氏套管)、套管夹、75%酒精（烧杯，量筒，滴瓶）。4、 【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只牛蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内23 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.52 cm)，即可进行实验。（2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉 (不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。2、 实验观察(1)记录正常心搏曲线(2)改用10酒精溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线 氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。(3)向套管内加5滴15酒精溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。(4)同法向套管内分别加入浓度分别为25、35、45、55、75的酒精溶液5滴，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清洗23次，待心搏恢复正常。3、实验结果与分析将记录到的各段心搏曲线附在实验报告中，计算给药前后曲线的频率、振幅和基线变化。测量结果填入表中。5、 【实验结果】表一：各测量结果比较表 1改变灌流成分对蛙离体心脏活动的影响实验项目心率/（次/min）振幅/g基线变化周期（s）（上移或下移）波动率（bpm）10酒精对照272.322.2360.67给药272.67下移2.2480.91恢复15酒精对照给药恢复25酒精对照给药恢复35酒精对照给药恢复45酒精对照给药恢复55酒精对照给药恢复75酒精对照给药恢复6、 【注意事项】1. 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。 2 .上述各实验项目，一旦出现作用应立即用正常任氏液换洗，以免心肌受损，而且必须待心搏恢复正常后方能进行下一步实验。 3. 复习心肌生物电的产生机制及各种离子对心脏活动的影响。4. 尽量选用健壮、体大的雄性蟾蜍，手术过程中注意保护心脏，避免损伤。5. 实验中及时用任氏液冲洗心脏，待曲线恢复平稳后再进行下一步操作。6. 每次更换任氏液都必须保持灌流液液面高度恒定，以免因灌流量变化而影响结果。7. 严格控制每次药品加入量，先加一滴，效果不明显再加一滴。8. 滴加药品和换取正常任氏液，须及时标记，以便观察分析。 9. 吸滴瓶中的任氏液和吸蛙心套管内溶液的吸管应区分专用，不可混淆使用，以免影响实验结果。7、 【参考文献】1. 邹丽瑛,吴蘩,BM,Attura.不同浓度酒精对灌流鼠心的作用兴奋抑制.生理学通讯,1994;(增刊):203)1)2. 王福伟,张翼,阎彩珍.酒精对离体蟾蜍和大鼠心脏收缩的影响.河北医科大学学报,1997;18(4):2033. 赵善民,晋玲,黄丽娟.不同浓度乙醇对蟾蜍血压和