课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 专题2微生物的培养和应用 思考1 农业生产中 尿素被利用的特点 思考2 土壤中的细菌能利用尿素的原因及反应式 思考3 学习本课题要达到哪两个目的 一 课题背景 1 尿素的利用 2 细菌利用尿素的原因 3 本课题的目的 二 研究思路 思考6 什么是选择培养基 美国黄石国家公园的一个热泉 思考6 什么是选择培养基 从物理性质看此培养基属于哪类 在此培养基中哪些作为碳源 氮源 这种培养基如何对分解尿素的细菌进行选择 筛选菌株 1 自然界筛选菌株 例子 原因 启示 2 实验室筛选菌株 原理 方法 利用选择培养基分离 选择培养基的概念 分解尿素的细菌的选择培养基的分析 A 属于固体培养基 琼脂是凝固剂 B 碳源 葡萄糖 唯一氮源 尿素C 培养基名称 以尿素为唯一氮源的选择培养基 常见的一些选择培养基 思考9 常见的微生物生长计数的方法有哪两种 常见的测定微生物数量的方法 显微镜直接计数法 先将待测样品制成悬液 然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数 根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出单位体积内的微生物总数 此法计得的是活菌体和死菌体的总和 故又称为总菌计数法 显微镜直接计数是测定微生物的方法公式 观察到的红细胞平均数 观察到的细菌平均数 红细胞含量 细菌含量优点 设备简单 能观察微生物的形态特征 缺点 难以计数微小的细菌 此法计得的是活菌体和死菌体的总和 故又称为总菌计数法 一般用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数 间接计数法 最常用稀释涂布平板计数法应用 统计样品中活菌的数目 原理 当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约含有多少活菌 从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是 平均菌落数 涂布的稀释液体积 稀释倍数 思考11 完成表格 比较两种计数法的异同 思考14 请尝试归纳总结出两种计数法的注意事项 统计菌落数目 1 方法 2 稀释涂布平板法 间接计数法 统计的是活菌数 原理 计算公式 注意事项 为了使结果接近真实值 要设置重复实验 求菌落的平均值 至少3个平板 成功的关键是恰当的稀释度 3 显微镜直接计数法 统计的是总菌数 特点 4 两种计数法的比较 显微镜 血细胞计数板 培养基 菌体本身 菌落数 方便 简单 计数的是活菌 死菌 活菌都在内 复杂 有误差 M C V 统计的是活菌体和死菌体的总和 故又称为总菌计数法 难以计数微小的细菌 统计方法类似于 培养液中酵母菌种群数量的变化 思考15 设置对照组的目的是什么 思考16 分析书上案例 回答相关问题 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 对照实验的相关知识 常用设置对照的方法 空白对照 不给对照组任何处理因素 条件对照 给对照组施以部分实验因素 但不是所要研究的处理因素 自身对照 对照组和实验组都在同一研究对象上进行 相互对照 不单设对照组 而是几个实验组相互对照 对照实验 是指除了被测试的条件外 其他条件都相同的实验 实例 在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时 A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落 但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落 分析其原因 原因 土样不同 培养基污染或操作失误 或者是混入了其他的含氮物质 思考16 分析书上案例 回答相关问题 思考 请尝试分析A同学的实验结果与其他组不同的原因 思考 请你通过设置对照 帮助A同学排除上述因素的影响 另一种方案 空白对照 将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养 作为空白对照 以证明培养基是否受到污染 实验方案有两种 一种方案 相互对照 可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验 增加实验组数 如果结果与A同学一致 则证明A无误 如果结果不同 则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题 小结 通过这个事例可以看出 实验结果要有说服力 对照的设置是必不可少的 设置对照 1 目的 2 本实验的对照组设置 用与A同学相同的土壤进行至少3次的重复实验 用与A同学相同的培养基不接种作为空白对照进行实验 思考17 实验设计的内容包括哪些 思考18 结合书上图2 7 你能说出该实验的流程吗 思考19 你能归纳总结出该实验操作的哪些注意事项 操作流程 二 实验的具体操作 土壤取样从肥沃 湿润的土壤中取样 先铲去表层土3cm左右 再取样 将样品装入事先准备好的信封中 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌 制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 应在火焰旁称取土壤10g 在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在火焰旁进行 分离不同的微生物采用不同的稀释度原因 不同微生物在土壤中含量不同目的 保证获得菌落数在30 300之间 适于计数的平板 三 样品的稀释 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度 测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量 选用的稀释范围相同吗 原因 土壤中各类微生物的数量 单位 株 kg 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万 放线菌数约为477万 霉菌数约为23 1万 结论 为获得不同类型的微生物 就需要按不同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件 取样涂布 实验时要对培养皿作好标记 注明培养基类型 培养时间 稀释度 培养物等 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30 300的平板 则说明稀释操作比较成功 并能够进行菌落的计数 如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大 表明试验不精确 需要重新实验 微生物的培养与观察 在菌落计数时 每隔24h统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 培养不同微生物往往需要不同培养温度 细菌 30 37 培养1 2d放线菌 25 28 培养5 7d霉菌 25 28 的温度下培养3 4d 计数 微生物的培养与观察 菌落的特征 思考17 实验设计的内容包括哪些 思考18 结合书上图2 7 你能说出该实验的流程吗 思考19 你能归纳总结出该实验操作的哪些注意事项 三 实验设计 1 实验设计的内容 2 实验流程 3 具体操作过程 四 操作提示 无菌操作 1 2 3 4 做好标记 制定计划 注意事项 1 样品稀释液的最佳浓度为保证每个平板有30 300个菌落 3 每一个稀释度至少要涂布3个平板作为重复实验 5 菌落的特征 4 为了排除培养基本身的影响 应设置相同培养基未接种进行空白对照 自主学习6 阅读教材P25 26页剩余内容 完成下列思考 思考20 如何判断有无杂菌污染 思考21 如何判断选择培养基是否起到了选择作用 思考