CD44在不孕症子宫内膜组织的表达及意义.doc

CD44在不孕症子宫内膜组织的表达及意义【摘要】目的: 探讨CD44在不孕症子宫内膜组织中的表达与不孕症发生的关系,寻找不孕症的发病规律。方法: 采用免疫组化S-P法检测41例不明原因不孕症及35例正常宫内膜组织中CD44的表达水平及分布。结果: 在正常子宫内膜腺上皮及间质细胞中，增生期仅见CD44的弱阳性表达，分泌期表达水平增加，在分泌中期表达最高，分泌晚期表达下降。在不孕组中，增生期CD44仅有弱表达，分泌期表达增加，与增生期比较差异显著（P0.05）。结论:不孕症中CD44表达异常可引起内膜接受性的降低,使着床失败引起不孕。 【关键词】 子宫内膜 Expression and Clinical Significance of CD44 in Endometrium with Infertility TIAN Lin，GUO Hong-li，DU Xing-gui，et al.(Department of Pathology，Renmin Hospital，Yunyang Medical College，Shiyan，Hubei 442000) Abstract:Objective To explore the relationship between the expression of CD44 in endometrium and infertility，so that the mechanism of infertility was elucidated. Methods The level of expression of CD44 in 41 unknown reason infertility and 35 normal endometrium was measured by immuno-histochemical method(S-P technique).Results In glandular epithelium and stromal cells of normal endometrium，the weak expression of CD44 was observed during proliferative phase，the expression was increased gradually in secretory phase,and the highest expression in mid-secretory phase，decreased in late secretory phase.In infertility,there was weak expression in proliferative phase，the expression increased gradually in secretory phase（P0.05).Conclusion The anormal expression of CD44 in infertility will reduce endometrium’s acceptation,which led to the failure of imbed. Key words:CD44；Endometrium；Unknown Reason Infertility 不孕症是妇科常见病之一，80%由解剖内分泌异常及感染等因素所致，20%为不明原因不孕。近来研究发现，部分黏附分子在人子宫内膜呈周期性表达，并证实在不孕症中有其表达异常，这提示该表达异常可能与不孕症的发生有一定关系1。CD44是一类重要的黏附分子，目前国内外在女性生殖系统疾病的研究主要集中在子宫内膜癌子宫内膜异位症等疾病2-3，而尚未见关于其与不明原因不孕症发病机制研究的报道。本研究应用免疫组化S-P法检测不明原因不孕症宫内膜组织及正常宫内膜组织中CD44的表达水平，以探讨它们在腺上皮及间质细胞的表达与不明原因不孕症的关系。 1 材料和方法 1.1 材料 本研究病例为郧阳医学院附属人民医院和附属东风医院病理科1998年1月-2003年12月的诊刮内膜标本，有完整的临床和病理资料。育龄妇女，2439岁，平均年龄31.6岁，月经周期规律，内分泌正常，近3个月内未用过任何激素类药物，腹腔镜检查正常，排除解剖感染精神等因素确诊为女性不明原因不孕症，行诊断性刮宫术刮出的内膜组织41例作为不孕组。另选相同年龄段正常生育妇女诊断性刮宫术获取的内膜组织35例作为正常对照组。选取的每份内膜组织行常规石蜡包埋，连续切片，各切3张，厚4 μm，分别作HE染色免疫组化染色和作阴性对照用，每组均含41例不孕症宫内膜组织和35例正常宫内膜组织。在HE染色切片中，根据John M4子宫内膜月经周期组织学分期标准，将其分为增生期内膜（月经周期第414天）、分泌早期内膜（月经周期第1519天）、分泌中期内膜（月经周期第2023天）和分泌晚期内膜（月经周期第2428天）。正常组及不孕组各期标本数分别为6、7、16、6例和 6、9、17、9例。 1.2试剂 鼠抗人的CD44(H-CAM)单克隆抗体购自北京中杉生物技术有限公司,SP试剂盒及DAB显色剂均为福州迈新生物技术有限公司产品。 1.3方法 1.3.1 免疫组化实验:石蜡切片常规脱蜡入水，行抗原修复H2O2阻断血清封闭，滴加50 μl一抗，PBS代替一抗作阴性对照，4 冰箱过夜。滴加生物素标记的二抗，PBS冲洗3次。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素，DAB显色。苏木精复染，盐酸分化，氨水返蓝。中性树胶封固。 1.3.2结果判定标准:独立观察切片至少5个具有代表性的高倍视野，不少于1 000个细胞。根据镜下着色深浅及阳性细胞占总细胞数的百分比进行半定量计数：阳性细胞数75%计为3；无着色(-)计为0，浅黄色(+)计为1，黄色(+)计为2，棕黄色(+)计为3。CD44阳性标准为细胞膜有明显棕黄色颗粒，少量胞质着色。以两项计分的相加数为最终值。 1.4 统计学处理 计量资料用均数标准差(xs)表示，各组样本均数间比较采用SPSS10.0统计分析软件包进行单因素的方差分析，计数资料率的比较采用四格表Fisher精确概率法检验，以α=0.05为检验水准，P0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1正常组月经周期腺上皮及间质细胞CD44的表达正常组增生期，CD44在子宫内膜腺上皮及间质细胞仅有弱表达，分泌早期增加到3.000.38，差异有显著性(P0.05)；分泌中期腺上皮表达值为4.030.68，是分泌早期的134%(4.03/3.00)，进入分泌晚期表达减少到2.920.37。可见分泌中期腺上皮的表达，为表达的高峰期（见表1）。在宫内膜腺上皮中，CD44呈较强的膜表达，未见或少量胞质表达；间质细胞为胞膜或胞质或膜质混合表达（见图1）。 2.2不孕组月经周期腺上皮及间质细胞CD44的表达不孕组增生期，腺上皮及间质细胞CD44仅有弱表达，分泌早期表达增加到2.560.36，相当于增生期的218%(2.56/1.17)，差异显著（P0.05）。对比不孕组腺上皮分泌中期及正常组腺上皮分泌中期表达结果发现，不孕组比正常组表达低1.25个计分值，为低水平表达，差异有显著性（P0.05）。这提示，虽然子宫内膜在植入窗CD44表达比增生期显著增加，但表达量低于正常组，处于低水平表达，无分泌中期表达的高峰，也无分泌晚期的降低。众所周知，子宫内膜的接受性和子宫内膜与胚胎发育的同步性是着床的两个重要因素，而其中内膜的接受性又是着床成功的关键。植入窗CD44的异常表达可能会引起内膜的接受性降低，使着床失败而导致不孕。关于CD44在不孕症中的表达及机制，国内外鲜有报道。Nothnick9等对正常子宫内膜及异位内膜CD44的表达作了比较，发现异位内膜CD44表达水平降低。后有学者10发现腹膜异位内膜上皮钙黏素及CD44表达较正常子宫内膜明显降低，并随病情进展而进一步表达减少，认为上皮钙黏素及CD44表达可能与异位病灶的发展有关。可见，CD44介导细胞间的黏附，影响子宫内膜的容受性，在胚泡植入过程中发挥重要作用。CAMs的表达可能受到性甾体激素细胞因子等的调节，在不孕症子宫内膜异位症等妇科疾病中其表达水平的降低可能是引起这些疾病的重要原因之一。有研究发现，不孕症中也有其它一些黏附分子表达水平的异常，如植入窗整合素αvβ3α4β1α1β1α6β1α7β1等的表达6。细胞外基质成份是子宫内膜微环境的重要组成部分，在着床过程中，可观察到它的时相性变化，如分泌期胶原纤维(COL)及FN呈低水平表达而LN表达则明显增加，COL和FN表达低可减少胚泡入侵时的阻力，为胚泡入侵提供有利的微环境，LN表达的增加可为胚泡入侵提供连接作用，而这又是胚泡入侵时摄取营养的重要条件11。由此可见，腺上皮和间质细胞多种黏附分子细胞因子表达的相互协调也是着床成功的重要因素，它可为胚胎着床创造良好的微环境，使内膜具有相适应的接受性，确保着床顺利进行。【参考文献】 1 Li HW,CheungAN,Tsao SW,et al.Expression of E-cadherin and beta-catenin in trophoblastic tissue in normal and pathological pregnanciesJ.Int Society Gynecol Pathol,2003,22(1):63-70. 2 Demir AY,Groothuis PG,Nap AW,et al.Menstrual effluent induces epithelial-mesenchymal transitions in mesothelial cellsJ.Hum Reprod,2004,19(1):21-29. 3 Half ElizabethE,Bresalier RobertS.Clinical management of here-ditary colore-ctal cancer syndromesJ.Current Opinion Gastroenterol，2004,20(1):32-42. 4 John M Kissane.Andersons PathologyM.Volume Two,St.Louis Baltimore Philadel-phia.Toronto, The C.V.Mosby Company,1990： 1 652-1 654. 5 Ohta N,Saito H,Kuzumaki T,et al.Expression of CD44 in human cumulus and mural granulose cells of individual patients in in-vitro-fertilization programmesJ.Mol Hum Reprod,1999,5(1):22-28. 6 Nardo LG,Nikas G,Makrigiannakis A,et al.Synchronous expression of pinopodes and alpha(v)beta3 and alpha4beta1 integrins in the endometrialsurface epithelium of normally menstruating women during the implantation windowJ.Reprod Med,2003,48(5):355-361. 7 国宏莉，杜兴贵，朱润庆等.不明原因不孕症子宫内膜上皮钙黏素的表达J.生殖与避孕，2005，25（2）：122-124. 8 国宏莉，朱润庆，杜兴贵等.细胞黏附分子与不孕症J.国外医学计划生育分册，2004，23(4):211-214. 9 Nothnick WB,Fan F,Iczkowski kA,et al.CD44s expression is reduced in endometriotic lesions compared to eutopic endometrium in women with endometiosisJ.Int J Gynecol Pathol,2001,20(2):140-146. 10 Poncelet C,Leblanc M,Walker-Combrouze F,et al.Expression of cadherins and CD44 isoforms in human endometrium and peritoneal endometriosisJ.Acta Obstet Gynecol Scand,200