人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑瘫痪.doc

www.CRTER.org杨自金，等. 人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪杨自金，郭佳丽，卢思广，高长龙，李红梅，冯 越(连云港市第一人民医院儿内科，江苏省连云港市 222000)引用本文：杨自金，郭佳丽，卢思广，高长龙，李红梅，冯越. 人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪J.中国组织工程研究，2016，20(19):2803-2809.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.19.010 ORCID: 0000-0002-1723-3818(杨自金)文章快速阅读：人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂侧脑室注射治疗脑性瘫痪杨自金，男，1967年生，山东省定陶县人，回族，2006年佳木斯大学毕业，硕士，主任医师，研究生导师，主要从事脑瘫与干细胞研究。中图分类号:R394.2文献标识码:B文章编号:2095-4344(2016)19-02803-07稿件接受：2016-03-14http:/WWW.脐血间充质干细胞联合神经节苷脂脑性瘫痪模型SD大鼠验证：神经节苷脂能够提高脐血间充质干细胞在大鼠脑内存活及分化结局：(1)联合治疗后握持时间延长、足错误次数减少，优于单纯细胞移植疗法(2)移植后14 d，联合移植组BrdU、GFAP阳性细胞数明显高于单纯脐血间充质干细胞移植组，移植28 d时阳性细胞均明显减少 文题释义：脐血间充质干细胞：脐血是胎儿出生时脐带内及近胎盘侧血管内血液，是胎儿血液循环的一部分。研究表明，脐血间充质干细胞含量丰富，约占有核细胞的0.98%，该细胞为较原始细胞，有分化为造血细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、神经细胞等潜能。目前实验研究证明，脐血间充质干细胞移植能治疗血液病、心脏疾病、脑损伤、脊髓损伤等疾病。目前也有报道脐血间充质干细胞经侧脑室注射治疗脑性瘫痪的实验研究。神经节苷酯：是含唾液酸的糖神经鞘脂，是神经细胞膜的组成成分，在神经发生、生长、分化过程中起必不可少的作用，包括促进神经再生、促进神经轴突生长和突触形成、恢复神经支配功能、改善神经传导、促进脑电活动及其他神经电生理指标的恢复、保护细胞膜、促进细胞膜各种酶活性恢复等作用。摘要背景：最近研究证实神经节苷脂在体外能促进脐血间充质干细胞存活及分化。目的：观察侧脑室注射人脐血间充质干细胞及神经节苷脂对脑性瘫痪大鼠神经功能恢复的影响。方法：受孕17 d大鼠腹腔注射脂多糖2 d，放回笼中饲养，孕鼠分娩出脑性瘫痪乳鼠60只，随机分5组：模型组10只，假移植组10只，脐血间充质干细胞移植组18只，神经节苷脂组10只，联合移植组12只。在立体定位仪下，将脐血间充质干细胞或神经节苷脂注入左侧侧脑室，假移植组注入同样体积的PBS。在移植后7，14，21，28 d分别处死2只脐血间充质干细胞移植组大鼠，移植后14 d处死2只联合移植组大鼠，进行脑组织免疫荧光染色。移植后28 d进行神经功能评估。结果与结论：脐血间充质干细胞能存活、迁移、分化，主要分布在侧脑室、海马、皮质。移植后14 d，联合移植组BrdU、GFAP阳性细胞数明显高于脐血间充质干细胞移植组，差异有显著性意义(P 0.05)；神经功能评估：与模型组比较，脐血间充质干细胞移植组、神经节苷脂组、联合移植组的握持时间延长、足错误次数减少，差异有显著性意义(P 0.05)。联合移植组优于脐血间充质干细胞移植组及神经节苷脂组，差异有显著性意义(P 0.05)；结果表明，脐血间充质干细胞及神经节苷脂均能改善脑性瘫痪大鼠神经功能，神经节苷脂能够提高脐血间充质干细胞在大鼠脑内存活及分化，联合应用效果更好。关键词：干细胞；移植；脑性瘫痪；脐血间充质干细胞；神经节苷脂；细胞移植；神经功能主题词：脑性瘫痪；神经节苷脂类；脐血干细胞移植；组织工程基金资助：江苏省连云港市科技局重点科室建设(SH1117)3 P.O.Box 1200,Shenyang 110004 Human umbilical blood cord mesenchymal stem cell transplantation combined with injection of ganglioside for cerebral palsyYang Zi-jin, Guo Jia-li, Lu Si-guang, Gao Chang-long, Li Hong-mei, Feng Yue (Department of Pediatrics, First Peoples Hospital of Lianyungang, Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China)AbstractBACKGROUND: In recent years, some studies have demonstrated that ganglioside can promote survival and differentiation of umbilical blood cord mesenchymal stem cells in vitro.OBJECTIVE: To observe the effect of injection of human umbilical blood cord mesenchymal stem cells and ganglioside into rat lateral ventricles on neurological functional recovery from cerebral palsy. METHODS: Totally 60 cerebral palsy neonatal rats were delivered from pregnant rats which were modes were given intraperitoneal injection of lipopolysaccharide for 2 successive days on day 17 of gestation. Then those neonatal rats were randomly divided into five groups, including model group (n=10), sham transplantation group (n=10), stem cell transplantation group (n=18), ganglioside group (n=10) and combination group (n=12). Under stereotaxic instrument, umbilical blood cord mesenchymal stem cells or ganglioside were injected into left lateral ventricles of the rat brain, respectively, and the sham transplantation group was given the same volume of phosphate buffered saline. Two rats from the stem cell transplantation group were put to death for immunofluorescence staining at 7, 14, 21 and 28 days after transplantation, respectively, and two rats in the combination group were killed for immunofluorescence staining at 14 days. Besides, all rats were underwent neurologic evaluation at 28 days after transplantation. RESULTS AND CONCLUSION: The umbilical blood cord mesenchymal stem cells could survive, migrate and differentiate, which mainly distributed in the lateral ventricle, hippocampus and cortex. At 14 days after transplantation, positive expressions of BrdU and glial fibrillary acidic protein in the combination group were significantly higher than those in the stem cell transplantation group (P 0.05). In addition, compared with the model group, the holding time significantly prolonged and foot error times significantly decreased in the latter three groups (P 0.05), as well as in the combination group compared with the stem cell transplantation and ganglioside groups (P 0.05). These results indicate that umbilical blood cord mesenchymal stem cells and ganglioside can both improve neurological function of rats with cerebral palsy. Given that ganglioside can promote survival and differentiation of umbilical blood cord mesenchymal stem cells in vivo, the combined transplantation is preferred.Subject headings: Cerebral Palsy; Gangliosides; Cord Blood Stem Cell Transplantation; Tissue EngineeringFunding: the Key Department Construction Project of Lianyungang Municipal Science and Technology Bureau in Jiangsu, No. SH1117Cite this article: Yang ZJ, Guo JL, Lu SG, Gao CL, Li HM, Feng Y. Human umbilical blood cord mesenchymal stem cell transplantation combined with injection of ganglioside for cerebral palsy. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(19):2803-2809.Yang Zi-jin, Master, Chief physician, Masters supervisor, Department of Pediatrics, First Peoples Hospital of Lianyungang, Lianyungang 222000, Jiangsu Province, China2807ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH0 引言 Introduction脑性瘫痪(以下简称脑瘫)是指出生前到生后1个月内由各种原因所致的非进行性脑损伤，临床主要表现中枢性运动障碍和姿势异常1，常合并其他功能障碍，如智力低下、语言障碍、视力障碍、小头畸形、癫痫等，是一个严重影响患儿身心健康的疾病，给社会和家庭带来沉重的负担，目前主要的治疗方法是功能训练、手术矫正肢体畸形及应用营养脑细胞药物等，这些方法虽然能部分改善患儿的肢体功能，但不能修复损伤的脑细胞，彻底改善肢体运动功能及智力，达到根本治疗的目的。脐血间充质干细胞的发现给脑瘫的治疗带来新的希望，它有充足的来源、免疫原性弱、移植物抗宿主病发生率低、扩增能力更强等优点2-3，有研究证实脐血间充质干细胞能够在一定条件下分化为神经细胞4-6，目前已有间充质干细胞移植治疗脑损伤的实验报道7，但单纯脐血间充质干细胞移植效果欠佳，移植后细胞存活、分化的细胞数偏少，影响移植效果。神经节苷酯能促进脐血间充质干细胞存活及分化，实验采用神经节苷脂配合人脐血间充质干细胞移植，探讨治疗脑瘫更好的方法。1 材料和方法 Materials and methods 1.1 设计 随机对照动物实验。1.2 时间及地点 于2013年2月至2014年2月在连云港市第一人民医院中心实验室完成。1.3 材料 清洁级成年SD大鼠40只，雌性30只，雄性10只，体质量200-300 g，由徐州医学院动物所提供，人脐血间充质干细胞由江苏省博雅干细胞库馈赠。人脐血间充质干细胞移植联合神经节苷脂注射治疗脑性瘫痪所用主要试剂和仪器：试剂及仪器来源MesencultTM细胞培养液，5-溴脱氧嘧啶尿苷SigmaFITC标记大鼠抗BrdU抗体、兔抗人神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase，NSE)抗体AbcamPE标记小鼠抗人胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体、PE标记羊抗兔IgG-Cy3(二抗)Millipore单唾液酸四己糖神经节苷脂钠齐鲁制药有限公司，批号：H20046213小鼠抗人直标CD34、CD44、CD29、CD105、CD45eBioscience立体定向仪瑞沃德公司超净工作台广州市科望达实验室设备有限公司细胞培养箱上海三腾仪器有限公司倒置相差显微镜Olympus流式细胞仪BD公司EUROSTAR IIIPLUS型荧光显微镜欧蒙医学诊断(中国)有限公司1.4 实验方法1.4.1 脐血间充质干细胞的培养、鉴定和标记3 将获赠的第2代人脐血间充质干细胞接种于MesencultTM培养基(调整其pH值呈偏酸性)进行贴壁培养，置37 、体积分数为5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。1周后更换培养基，弃掉未贴壁细胞，以后每3 d换液1次，细胞长到80%融合时，用11的 2.5 g/L胰蛋白酶和0.2 g/L EDTA混合消化，以8.0103/cm2的细胞密度接种于传代培养瓶(T25)中进行扩增培养，移植前72 h加入20 mol/L BrdU进行标记。移植前用0.3%锥虫蓝检测细胞活力，调整细胞浓度至51010 L-1备用，用于细胞移植。取第3代脐血间充质干细胞，去掉培养液，PBS洗2遍，用11的2.5 g/L胰蛋白酶和0.2 g/L EDTA混合液消化，用含20 g/L BSA的PBS洗涤后制成细胞浓度为1109 L-1的单细胞悬液，每个Eppendoff管加50 L细胞悬液，并分别加入小鼠抗人直标CD34、CD44、CD29、CD105、CD45各10 L，阴性对照管加FITC标记的兔抗鼠IgG及PE标记的兔抗鼠IgG各10 L，4 孵育30 min，PBS洗涤后用流式细胞仪分析。1.4.2 脑瘫大鼠模型制作及鉴定 受孕17 d孕鼠腹腔注射脂多糖0.4 mg/(kgd)，连续注射2 d，放回笼中饲养，孕鼠自体分娩，生下乳鼠同笼饲养，生后4周，进行神经行为学功能评估8，鉴定为脑瘫大鼠，神经行为学检查中随意运动障碍、姿势异常、肌张力异常，倾斜板实验必须有一项是阳性。筛选脑瘫模型动物60只。1.4.3 动物分组 取足月产同龄大鼠10只，做正常对照组；造模成功后当天，取脑瘫模型大鼠60只，随机分为5组：模型组：脑瘫模型大鼠10只。假移植组：脑瘫模型大鼠10只，侧脑室注射10 L PBS。脐血间充质干细胞移植组：脑瘫模型大鼠18只，侧脑室移植10 L (51010 L-1)脐血间充质干细胞，其中10只进行功能检测，8只进行脑组织病理检查。神经节苷脂组：脑瘫模型大鼠10只，侧脑室注射10 L神经节苷脂液体 (0.4 g/g)。联合移植组：脑瘫模型大鼠12只，侧脑室注射5 L(51010 L-1)脐血间充质干细胞及5 L神经节苷脂液体(0.4 g/g)，移植后第14天取2只进行脑组织病理检查，移植后第28天取10只进行功能检测，功能检测后取2只作脑组织病理检查。1.4.4 侧脑室移植及注射7 脑瘫大鼠模型鉴定成功后当天将幼鼠用乙醚麻醉，固定于立体定位仪上，头部常规备皮消毒，无菌操做下作头皮矢状切口、钻孔。注射部位为左侧侧脑室：前囟后3.5 mm，中缝左侧3 mm，硬脑膜下4 mm。通过微量注射器，每个位点注射10 L脐血间充质干细胞(细胞数约5105)，均匀缓慢注入，退针前停针5 min，同样将10 L神经节苷脂经侧脑室注入神经节苷脂组大鼠；将5 L脐血间充质干细胞及5 L神经节苷脂注入联合移植组；假移植组注入10 L PBS。1.4.5 神经功能检测8 移植后28 d大鼠进行神经功能评分，包括握持牵引实验及足错误实验，具体方法：握持牵引实验：大鼠用前爪抓住离地面45 cm水平放置的直径0.6 cm的空心塑料管悬挂，记录其悬挂时间(最大值为60 s，超过60 s按60 s计算)。足错误实验：记录大鼠在水平放置的网格上(50 cm40 cm，每格3 cm 3 cm) 2 min内前、后肢或爪子掉下来的次数，为排除不同大鼠活动度差别的影响，只将左右侧错误次数的差值进行统计分析。1.4.6 免疫荧光染色分析 脐血间充质干细胞移植组在7，14，21，28 d时间点各取2只大鼠，联合移植组在14 d取2只大鼠，给予腹腔注射10%水合氯醛麻醉后，用体积分数为10%甲醛溶液心脏灌注，取脑。标本按常规给予固定、浸泡、脱水、浸蜡、包埋，制作石蜡切片，采用冠状切片，切片厚度为5 m，每5张切片中取同一切面中连续的2张切片，用直接免疫荧光方法进行组织学染色鉴定BrdU及GFAP阳性细胞：FITC标记大鼠抗BrdU抗体(1400)，PE标记小鼠抗人胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体(1400)，荧光显微镜下计数，随机计算10个视野(200)，计算平均数；用间接免疫荧光方法鉴定NSE阳性细胞：兔抗人神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体(1400)，PE标记羊抗兔IgG-Cy3(150)。1.5 主要观察指标 脐血间充质干细胞培养、鉴定及标记。脑实质BrdU阳性细胞迁移、分布、分化情况。神经行为学功能。脐血间充质干细胞移植组及联合移植组脑实质BrdU、GFAP、NSE阳性细胞对比。1.6 统计学分析 应用SPSS 11.5软件分析数据，数据均以s表示，采用配对t 检验。2 结果 Results 2.1 脐血间充质干细胞的培养及鉴定 复苏后细胞生长旺盛，呈形态及大小均一的小长梭形细胞(图1A)，折光性强，倍增时间为5-9 d，约1周融合。细胞传3代后，应用流式细胞仪进行脐血间充质干细胞表面标志性抗原检测，结果显示脐血间充质干细胞高表达CD29(68.2%)、CD44(52.2%)和CD105(65.7%)表面标志, 低表达CD34(3.6%)和CD45(1.0%)表面标志，符合间充质干细胞特征。2.2 培养细胞免疫荧光结果 BrdU标记脐血间充质干细胞72 h，细胞爬片后，应用直接免疫荧光法检测BrdU阳性细胞率，大部分细胞核被染成鲜绿色(图1B)，标记率为93%，说明培养的脐血间充质干细胞标记成功。2.3 脑瘫模型制作结果 对生后4周的幼鼠进行行为学检测，模型成功率约85%，随机选出符合脑瘫标准的大鼠60只。2.4 神经行为学功能评定 2.4.1 握持牵引实验时间比较 与模型组比较，正常组握持时间明显延长，二者相比差异有显著性意义(P 0.05)，表明PBS及注射本身对脑瘫鼠无明显影响；脐血间充质干细胞移植组、神经节苷脂组、联合移植组握持时间均高于模型组，差异有显著性意义(P 0.05)，同时联合移植组握持时间高于脐血间充质干细胞移植组，二者相比差异有显著性意义(P 0.05)，表明脐血间充质干细胞移植及神经节苷脂均可改善脑瘫大鼠的握持能力，联合移植改善程度优于脐血间充质干细胞移植组，脐血间充质干细胞与神经节苷脂有一定协调作用，见表1。2.4.2 足错误实验 模型组较正常组错误次数明显增多，且差异有显著性意义(P 0.05)，说明脑瘫模型制作成功，模型组大鼠造成了脑部损伤以致肢体运动协调能力发生障碍；假移植组及模型组二者无明显差异，说明移植手术本身对模型无明显影响。脐血间充质干细胞移植组、联合移植组、神经节苷脂组分别与模型组相比，差异有显著性意义(P 0.05)，表明脐血间充质干细胞移植可提高脑瘫大鼠的肢体运动协调能力，且联合移植组优于脐血间充质干细胞组，差异有显著性意义(P 0.05)，表明脐血间充质干细胞及神经节苷脂二者有部分协调作用，能改善脑瘫大鼠部分功能，见表1。2.5 脑实质BrdU阳性细胞迁移、分布、分化情况 应用免疫荧光单标染色，在荧光显微镜下，可见FITC标记的BrdU阳性细胞。人脐血间充质干细胞移植后大鼠脑实质BrdU阳性细胞主要分布在大脑皮质区、海马、脑室周围，有局部聚集现象，白质区、基底节、丘脑区可见少量BrdU阳性细胞。脐血间充质干细胞组移植后第7天大鼠脑组织内可见较多BrdU阳性细胞(28.3 6.2)，主要聚集在大脑皮质、侧脑室及嗅球，左侧(移植侧)多于右侧；第14天BrdU阳性细胞(20.63.6)、第21天BrdU阳性细胞(13.73.8)逐渐减少，主要分布在海马、侧脑室旁、基底节(图2)，第28天仅见少量BrdU阳性细胞(6.22.1)存活。因GFAP抗体及NSE抗体一抗均为抗人抗体，GFAP、NSE分别存在于星形胶质细胞、神经元细胞中，故GFAP、NSE阳性细胞可视为移植细胞分化的星形胶质细胞、神经元细胞。移植14，28 d均可见到GFAP、NSE阳性细胞，但28 d时明显减少。2.6 脐血间充质干细胞移植组及联合移植组脑实质阳性细胞对比 人脐血间充质干细胞移植第14天，联合移植组BrdU阳性细胞为(30.102.23)个/视野，高于脐血间充质干细胞移植组(20.002.79)个/视野，差异有显著性意义(t=10.28，P 0.05)；移植第14天，联合移植组GFAP阳性细胞为(17.901.52)个/视野，高于脐血间充质干细胞移植组(10.201.55)个/视野，差异有显著性意义(t=9.75，P 0.05)，见图3。移植28 d，两组BrdU、GFAP、NSE阳性细胞均明显减少，差异无显著性意义。 A B B A图2 脑实质BrdU阳性细胞分布情况(200)Figure 2 Distribution of BrdU positive cells in the brain parenchyma of rats (200)图注：图中A为移植第14天，联合移植组BrdU阳性细胞，细胞核呈绿色；B为移植第14天，脐血间充质干细胞移植组BrdU阳性细胞胞核呈绿色。图1 脐血间充质干细胞的形态及标记效果Figure 1 Morphology and labeling effect of human umbilical blood cord mesenchymal stem cells图注：图中A为第3代脐血间充质干细胞，呈梭形(200)；B为培养的脐血间充质干细胞，经BrdU标记后细胞核被染成绿色(400)。表1 各组幼鼠握持牵引实验及足错误实验比较 (s，n=10)Table 1 Comparisons of holding traction test and foot error test among groups表注：与正常组比较，aP 0.05；与模型组比较，bP 0.05；与脐血间充质干细胞移植组比较，cP 0.05。组别握持时间(s)足错误次数(次)正常组54.504.650.300.48 模型组20.802.57a3.000.82a假移植组21.02.163.301.06脐血间充质干细胞移植组28.702.31b1.800.79b神经节苷脂组25.101.66b2.100.88b联合移植组34.401.35bc0.900.57bc B A图3 脑实质移植细胞分化后分布情况(200)Figure 3 Distribution of transplanted cells after differentiation in the brain parenchyma of rats (200)图注：图中A为移植第14天，脐血间充质干细胞移植组GFAP阳性细胞，细胞呈红色；B为移植第14天，脐血间充质干细胞移植组NSE阳性细胞，细胞被染成红色。3 讨论 Discussion实验将BrdU标记的脐血间充质干细胞移植到脑瘫模型大鼠侧脑室内，移植28 d后进行神经行为功能评估，与模型组大鼠比较，脐血间充质干细胞移植组神经功能恢复有显著提高，免疫荧光染色发现，BrdU阳性细胞主要分布于大脑皮质、侧脑室、基底节、海马等位置，并可迁移至对侧，部分表达星形胶质细胞及神经元标志，表明脐血间充质干细胞可在脑瘫大鼠脑内存活、迁移、分化，移植后对脑瘫大鼠的神经功能恢复有良好的促进作用，与其他文献报道基本一致9-16。Park等17将脐血间充质干细胞移植到缺血缺氧性脑损伤大鼠脑内，发现能明显促进脑损伤大鼠的功能恢复，并推测可能机制为间充质干细胞移植后通过分泌血小板反应蛋白1、穿透素蛋白3及内皮细胞生长因子发挥作用；Koh等18在体外将脐带间充质干细胞诱导分化为神经样细胞，神经元标志物阳性，并能分泌粒细胞刺激因子、血管内皮细胞生长因子、胶质细胞源性营养因子、脑源性神经营养因子等，但细胞间未检测到电生理活动，然后将培养细胞移植到脑梗死大鼠脑内，3周后发现移植细胞能聚集在脑损伤组织中，并能表达nestin蛋白阳性，主要聚集在海马部位，移植组脑损伤面积较对照组减少，脑功能检测较对照组显著提高，推测间充质干细胞移植后通过分泌细胞因子发挥作用。Cui等19将脐血间充质干细胞移植到脊髓损伤大鼠脊髓内，2周后检测功能恢复较对照组明显提高。脐血间充质干细胞如何通过血脑屏障并进行迁移并发挥作用，目前详细机制尚不明确，推测机制可能为：脑损伤后血脑屏障破坏，脐血间充质干细胞得以通过；脑损伤后分泌一些趋化因子，有利于向损伤部位迁移；移植细胞部分代替损伤细胞；移植细胞通过分泌细胞营养因子，促进损伤细胞恢复；刺激脑内原有神经干细胞分化等20-27。实验将神经节苷脂注射联合脐血间充质干细胞移植脑瘫大鼠侧脑室内，移植28 d后通过神经行为功能评估，发现联合移植组大鼠较脐血间充质干细胞移植组神经功能改善明显，移植14 d进行脑组织免疫荧光染色，BrdU阳性细胞数及GFAP阳性细胞数均高于脐血间充质干细胞移植组，提示神经节苷脂注射联合脐血间充质干细胞移植脑瘫大鼠有一定协同效应，神经节苷脂可提高移植脐血间充质干细胞存活，并提高脐血间充质干细胞分化为神经胶质细胞数量，可能为神经功能提高的原因之一28，但两组NSE阳性细胞无显著差异。随着时间推移，BrdU阳性细胞、GFAP阳性细胞、NSE阳性细胞均明显减少，可能移植细胞也存在死亡及凋亡情况。Nan等29研究发现神经节苷脂能诱导体外培养的脐血间充质干细胞向神经样细胞分化；Zhang等30研究发现脐血间充质干细胞经尾静脉注射到缺血缺氧性脑病模型鼠体内，3 d后移植细胞聚集在脑组织损伤部位，并分化成神经元样细胞，而联合神经节苷脂注射，能进一步提高移植效果，促进大鼠脑功能恢复。脐血间充质干细胞具有低免疫原性，不易被HLA不相容受体识别，故脐血间充质干细胞可应用于异源性或异种移植治疗，为神经系统损伤或发育缺陷疾病提供了广阔的治疗前景31-33，极大的推动了神经系统的细胞治疗，开辟了神经系统治疗的新领域，具有重要的临床应用价值和前景，值得进行更进一步深入的研究和探讨，与此同时，也面临很多难题，如宿主对移植细胞分化后是否存在排斥反应、移植细胞是否有致瘤性、具体作用机制、长期疗效如何等，有待于进一步研究。致谢：感谢江苏省博雅干细胞库。作者贡献：实验设计为杨自金，实验实施为杨自金、郭佳丽，实验评估为卢思广、高长龙，资料收集为李红梅、冯越。利益冲突：所有作者共同认可文章内容不涉及相关利益冲突。伦理问题：实验过程中对动物的处置符合2009 年Ethicalissues in animal experimentation相关动物伦理学标准的条例。文章查重：文章出版前已经过CNKI反剽窃文献检测系统进行3次查重。文章外审：文章经国内小同行外审专家双盲外审，符合本刊发稿宗旨。作者声明：第一作者对研究和撰写的论文中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据(包括计算机数据库)记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁，可接受核查。文章版权：文章出版前杂志已与全体作者授权人签署了版权相关协议。4 参考文献 References1 沈晓明,王卫平,常立文,等.儿科学M.7版.北京:人民卫生出版社,2008:408-409.2 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