啮齿类实验动物垫料的选择和消毒.doc

啮齿类实验动物垫料的选择和消毒动物科学与动物医学2004年12月第21卷第12期(总第114期)口齿齿类实验动物垫料的选择和消毒张志王晖(广东医学院实验动物中心,广东湛江524023)垫料的主要作用是为了使实验动物生活在舒适环境中并维持笼内的清洁.实验动物垫料直接与机体接触,对实验动物的微环境有重大影响,并进而影响实验动物的质量和动物实验的结果.使用标准化的垫料以及垫料的消毒灭菌处理是饲养合格标准实验动物的关键因素之一.实验动物的垫料就像一张床垫铺垫在实验动物身体下,因而它要能吸附水分,使笼内保持干燥;可吸附动物排泄物,从而维持笼具和动物身体的清洁卫生.动物粪,尿等排泄物所产生的污染物种类很多,如氨,硫化氢,甲基硫醇,三甲胺,乙醛等.其中氨是最严重的一种,翁忠辉等发现,适当增加垫料在一定时间内可降低笼内水汽含量,使氨浓度增高减缓.垫料尚有保温作用,动物可据其需要在其中做窝营造清洁舒适卫生的微环境,而大大有利于动物的健康和繁育后代.垫料可防止或减轻笼内恶臭,减少蚊蝇孳生2.周淑佩等发现被污染的垫料可成为鼠螨的传播媒介,其感染几率虽小,但也可引起大群感染.此外,垫料的材质一般较柔软,且不被动物所食,这样能够减少动物腿病的发生和加快生长发育4.啮齿类实验动物垫料选择的原则主要有以下几方面:有较强的吸湿性,但不能过强以免造成初生动物脱水;具有不可食用,柔软,不易产生粉尘等特性;不能含有病原微生物,杀虫剂及其它有毒物质;不得含有野生动物排泄物,昆虫及其排泄物;不可含有会影响动物体各种酶系统的天然挥发性物质.在实际生产中,我们选择垫料前必须遵循以上原则,同时结合当地情况及经济效益,选用合适的垫料,从而有利于提高实验动物的质量.1垫料的种类1.1常用垫料1.1.1木花木花又称木刨花,它质地松软,吸水性好,较少污染和发霉,是首选的垫料原料.但由于木材刨花来源不固定,材质不均一,质量难以控制,而且随着木材加工工业的发展,刨花的供应也日趋紧张,所以使用上有一定限制.1.1.2锯末,木屑锯末,木屑具有保温性能好,单位体积吸水能力最强.不被粪尿腐败和动物不吃等优点,它的舒适性较好,有实验研究报道用白杨木作垫料时能使实验动物得到很好的休息,也能避免雄性鼠相互打斗.但此类垫料遇水易成团且含杂物较多,如土粒,碎纸,铁钉等,还有它包装储存不便,在运输和储存过程中易造成污染和霉烂.此外,使用木屑时要严格控制木材的种类,避免使用各种芳香性软质木料,如红松,白松,黄花松和红杉等,这类材料所释放的挥发性碳氢化合物会促进肝脏微粒体酶类的活性并且还能产生其它收稿日期:20041014囊O8等93彗(2o04)110037-03毒性作用,从而直接或间接的影响实验结果.另外还发现此类木屑可提高呼吸系统感染率,降低繁殖力,甚至还可能有致癌作用.1.1.3电刨屑电刨屑虽然在舒适及保温性能方面比较差,经常会因粪,尿等脏物污染而腐败,但它的吸湿性很好,垫料更换的时间间隔长,更换量较少,而且动物不会吞吃,所以在生产中经常使用.1.1.4稻草稻草我国南方地区盛产水稻,因而来源比较广阔.稻草的舒适性,吸湿性,保温性都较好.但稻草也容易被动物的粪尿所污染而腐坏,它的表面附着的尘埃较多,动物也会经常啃食,所以作为实验动物垫料时会受到限制.1.1.5玉米秸玉米秸来源充足稳定,松软舒适,很适合繁殖鼠使用.蔡月花等报道,玉米秸作为大鼠垫料,大鼠的繁殖性能稳定.仔鼠发育整齐,离乳率最高,繁殖胎次最多,胎次间隔比刨花短.1.1.6玉米芯玉米芯吸水性好,污染少,使用方便,便于储存.它的一般状态比传统使用的木屑有很大改善.保证了清洁,无杂物,无化学性有害物质并呈松软的小颗粒.它的吸水性优于木屑垫料,如间隔相同的时间更换垫料,则使用玉米芯垫料比使用木屑垫料干净的多.所以,可达到减少更换次数,节约垫料的目的【7.但玉米体积太小,而实验动物有磨牙的习性,所以很容易会被动物吃下.此外,用玉米芯作垫料时,它的生产成本比一般原料要高.有人对松木,麦秸,玉米秸,玉米芯和国外商品垫料5种垫料物质的细胞毒性作用进行了比较,发现玉米芯的的细胞毒性是最低的,与国外所报道的相一致.1.1.7谷壳谷壳垫料具有保温性能,动物适应性好等优点,但其比重较大,容易生虫和长霉,难以保存,而且谷壳容易粘附在动物皮毛上,造成动物外表不美观9.1.2新型垫料1.2.1蒲草蒲草表面光洁,质地柔软,通气组织蓬松.蒲草的吸湿能力强,它的吸水性优于刨花和玉米棒芯,且存放一年后其吸水性能不受影响.此外,蒲草吸收有害气体氨和保温的性能都优于玉米棒芯;动物适应性好,采用蒲草作垫料可使鼠体清洁,铺成的小窝柔软温暖,有利于小鼠的产仔,哺乳;蒲草还具有资源丰富,生产成本低,极少公害,污染较少,加工,消毒方法简便,采用辐射灭菌法可大批量生产等优点.陈洪岩等对蒲草垫料水浸出物,醇浸出物,醚浸出物进行了急性毒性试验和小鼠饥饿试验,发现蒲草垫料的三种浸出物均无毒,而且小鼠也只是在极端饥饿状态下啃食少量蒲草垫料但不引起中毒,经实验研究还发现蒲草作为垫料既不影响小鼠的繁殖机能,也不影响小鼠的生长发育,是一种优质的新型实验动物垫料.电子邮件:Aniilia1Science&VeterinaryMediCineVo1.21No.12(TotalNo.114)1.2.2芦苇芦苇吸水性强,与玉米棒芯相当,但低于泡桐刨花.资源丰富,价廉易得,毒性低.动物用芦苇铺成的小窝柔软,温暖,有利于产仔,哺乳.以芦苇作垫料,鼠体光洁,未见小鼠皮肤,粘膜创伤也未见小鼠变态反应.小鼠虽有撕咬垫料的行为,但不采食.湿垫料不附着笼具,更换容易,每7天更换的垫料中未见鼠粪尿腐败.1.2.3泡桐刨花泡桐刨花吸水性与椴木刨花相当,但优于玉米棒芯.不同年龄的小鼠对泡桐刨花垫料的适应性均较好,生长发育和繁殖良好.以泡桐刨花作垫料,饲养的KM小鼠在6个月和12个月时,活体骨髓多染性红细胞微核率均在正常范围之内,表明泡桐刨花垫料没有致癌作用_甘蔗甘蔗来源比较广阔,但甘蔗中的糖份不能彻底去掉,容易粘附在动物身上和笼具上,从而滋生蚊,蝇,所以不便推广使用.1.2.5纤维纸纤维纸吸湿性好,能较好控制氨气的气味,但不同纸的特性不一样,有些可能会含有有害物质,影响实验结果.国外研究发现,利用果酱和造纸厂产生的木质纤维废弃物DPS作为动物的垫料,不会使动物血清和骨骼中的铝和铜含量增加,动物的健康状况也与用普通垫料时的没有显着区别Il6.在国际上,日本常使用电刨花及锯木丝,美国则使用玉米芯粉碎物,在欧洲多用45mm的锯屑片作为实验动物的垫料,并已实行商品化的生产.目前我国较多采用的是混合木屑作为垫料,这种垫料来源不清楚,所含杂质也较多,因而对我国的实验动物标准化有一定影响.近年来,我国已开始了适合国情的低毒性标准垫料的研究,且垫料生产还比较零散,尚未形成商品化生产.2垫料的消毒根据医学实验动物管理实施细则的要求,实验动物的垫料应消毒后才能使用.实验动物垫料的消毒灭菌处理与实验动物的微生物,寄生虫携带情况密切相关.欧美地区发达国家所使用的实验动物垫料已经标准化和商品化,清洁级实验动物所用垫料可不经消毒直接使用.而我国幅员辽阔,各地情况差别较大,对实验动物垫料的选材很不一致,所以其中的微生物,寄生虫携带情况比较复杂.正因为如此,垫料的消毒灭菌处理就显得非常重要了.2.1垫料的消毒方法2.1.1高压灭菌法此种方法除具有普通流通蒸汽消毒的优点外,还因有高压作用而使消毒室内的蒸汽温度升高至121oC一132oC,也使蒸汽的穿透力增强,大大缩短了消毒时间,而且消毒效果非常可靠,消毒后的物品易于干燥.但高压灭菌法所需设备复杂,操作烦琐,影响消毒效果的因素也较多,同时高压灭菌会破坏垫料组织,导致有少量水蒸气吸附致使垫料吸水能力下降.2.1.2射线辐照法辐射分为非电离辐射和电离辐射两种,前者包括紫外线,红外线等,后者包括r射线和X射线.由于紫外线的穿透力非常弱,可见光不能穿透的它也不能穿透,所以一般只用做空气消毒,而不用于物品的消毒.而r射线,消毒均匀彻底,在一定剂量条件下能杀死各种微生物(包括病毒);价格便宜,节约能源;可在常温下消毒;速度快,操作简便;穿透力强.有研究报道,使用60Co消毒动物的饲料和垫料,不会引起其中物质的变化,是一种较安全的消毒方法.生产时,在辐射钴源周围全部装满垫料,辐射剂量以最远处剂量达到0.5Mrad以上为准.这样可充分利用钴源的辐射能力,有效降低成本.2.1-3化学熏蒸法化学熏蒸法优点是杀菌谱广,杀菌力强,对物品无损害或损害轻微;但它对人有一定的毒性,腐蚀性,杀菌所需时间也较长.常用的方法有甲醛熏蒸消毒和过氧乙酸熏蒸消毒.甲醛熏蒸可以达到良好的灭菌效果,操作也比较简便,成本低廉,是实验动物优先选择的方法之一,而过氧乙酸的穿透性比甲醛要差,用它熏蒸垫料后,气味挥发比较困难,并且过氧乙酸的腐蚀性比较强,不管是对垫料还是对生产设施都将产生不利影响.因此过氧乙酸不适用于实验动物垫料的消毒.2.1.4微波灭菌法微波是一种波长大于1mm的电磁波,特点是频率高(8902225兆赫),穿透力强(能穿过玻璃,陶瓷,塑料薄膜,唯独不能穿过金属表面),作用快,灭菌时间短,操作简便以及对通气组织破坏较少;缺点是基本建设费用高,需专门技术人员管理,而且微波对人体有一定的损伤一2.1.5干烤灭菌法干烤灭菌法即将垫料放入80烤箱内连续烘烤.经试验,在80的烤箱内,15min干烤即可杀灭各种沙门氏菌和石膏样毛藓菌,而小鼠体表的活螨经1530min烘烤后可全部杀死一.综观以上几种消毒灭菌方法,高压蒸汽,r射线,甲醛熏蒸三种方法是比较适用于实验动物垫料的消毒灭菌的.繁殖和使用大批量清洁极以上的实验动物,垫料商品化是解决的有效途径.要进行垫料商品化生产,那么筛选适合商品化生产的垫料消毒灭菌方法就显得非常重要了.实验动物标准化的实现,垫料的标准化是一个重要环节.我们首先要根据筛选垫料的原则认真地选择好垫料原料,同时,要大力开发新型的实验动物垫料.另外,在选定垫料后,要对垫料进行彻底的消毒灭菌才能使用.垫料的选择和消毒灭菌是饲养合格实验动物的关键之一,我们必须认真选择和使用.参考文献1刘忠华,魏社林.啮齿类实验动物的垫料和笼具J.上海实验动物科学,2003,23(3)182-185.2陈主初,吴端生.实验动物学M.长沙湖南科学技术出版社,2001.3周淑佩,马坤绵.垫料在鼠螨传播中影响的探讨J.上海实验动物科学,1999,19(1):62.4蔡有余,等.实验动物技术及管理D.中国实验动物人才培训中心,1993.5EskolaS,KalisteKE.AspenwoodwoolispreferredasarestingplacebutdoesnotaffectintracagefightingofmaleBALB/candC57BL/6JmiceJ.LabAnim,1999,33(2):108121.6蔡月花,刘军须,等玉米秸作为大鼠垫料对其生长发育及繁殖性能的影响J.中国比较医学杂志,2003,13(5):282283.7郭健,郑振辉.应用玉米芯为原料的清洁实验动物垫料饲养动物实验报告J.北京实验动物科学,1992,9(3):2829.8刘福英,王春梅,等.5种垫料物质的细胞毒性研究J.中国比较医学杂志,2003,13(6):351352.(下转第67页)电话:010628356576283842762839395传真:O1062831侣2动物科学与动物医学整体健康水平面,增强机体抗病能力.改善圈舍温度(保持在2025),加强通风,疏散猪群和环境卫生.同时,对PRRS的防制应采取相应的综合防制措施.3.1加强饲养管理合理规划养殖场布局,隔离饲养.规模集约化养猪场内生产区,管理区和生活区要严格分开.种猪舍要和其他猪舍隔开,应设在养猪场的上风处;产房要远离育肥猪舍及粪便处理场所,兽医室,病猪隔离舍,病死猪剖检及尸体无害处理设施都应建在生产区外的下风处;养猪场四周应筑高围墙,以防止无关人员和野生动物自由进入.搞好猪舍消毒灭源工作,合理安排猪群密度.种猪场或规模集约化养猪场应严格执行综合防制措施及消毒制度,防止来访人员随意入场,养殖场工作人员入场前应消毒洗手,更衣换鞋,进出场的车辆用具均应消毒.生产区处应设立消毒池(房),要经常更换消毒液,保持有效浓度.猪舍,饲槽要定期打扫,清洗,消毒,特别是产房应由专人管理,严格清洗消毒.该病毒对热,干燥敏感,过氧乙酸,各种有机酸和表面活性剂对病毒均有效,在消毒时应注意.严格实行全进全出的饲养管理方式.哺乳猪应尽量提早断奶,不同日龄的仔猪要分别饲养于不同的场区,每批猪进出前后,猪舍都要彻底清洗消毒.严格执行引进的后备猪在隔离舍的检疫程序.严禁从疫区引进猪只,种猪场或规模集约化养猪场从场外进猪时,必须先进行流行病学调查,并把引进猪隔离观察1个月,同时采用ELISA进行血清学检查,只有呈阴性反应的猪方可人群.调整日粮结构.提高维生素(VE,生物素)和矿物质(Fe,Ca,I,Se,Mn等)含量,维持氨基酸的平衡,以提高猪只机体的抗感染能力.慎用疫苗.原种猪场和规模集约化养猪场在未查清病因前,不能使用疫苗,以免干扰诊断和检疫.3.2免疫接种在非疫区PRRS阴性场原则上不必接种疫苗,但就我国PRRS的流行现状,使用PRRS灭活苗预防是最可靠的方法.2004年12月第21卷第12期(总第114期)免疫方法:全场母猪,公猪用PRRS灭活苗进行两次肌注基础免疫,间隔21d,每次每头4ml.以后每隔5个月免疫1次,每头4ml.其它猪不用PRRS疫苗免疫.疫区PRRS阴性场全场公母猪免疫与非疫区一样,但在疫区PRRS阴性场由于随时都会受到PRRSV感染,所以保育猪和育肥猪都要进行PRRS弱毒苗免疫(接种PRRS弱毒苗应与猪瘟的免疫间隔2周以上),方法为3周龄仔猪接种1次,每头1ml;10周龄再接种1次,每头2m1.暴发和流行PRRS的猪场,应立即使用PRRS灭活苗对全部母猪和公猪进行免疫,方法为基础免疫进行两次肌注,间隔21d,每次每头48ml.以后每隔5个月免疫1次,每头4ml.对310周龄猪肌注接种弱毒疫苗1次,每头12ml;10周龄以上的肌注接种弱毒疫苗24ml.实际上,在紧急接种时,可根据情况适当增加剂量.3.3药物防治母猪临产前混饲阿司匹林,间隔3d再给1次,可降低发病率并减少流产.当发生PRRS时,应及时确诊,隔离和紧急接种,加强全场消毒,同时使用药物(补充电解质以防脱水,应用广谱抗生素预防二次感染)对全场猪只进行预防和治疗,防止继发感染其他传染病,尤其是呼吸道传染病参考文献1宣长和,等.猪病学M.北京:中国农业科学技术出版社,2003.7075.2蔡宝祥,主编.家畜传染病学M.北京:中国农业出版社,2001.211213.3谭学诗,主编.动物疾病诊疗M.太原:山西科学技术出版社,1999.502503.4谢英.猪繁殖与呼吸综合征研究进展J.中国兽医杂志,2001,(1):2932.5赵德明.猪繁殖与呼吸综合征J.中国兽医杂志,1996,(4):5455.6蒋雨,林保忠.猪繁殖与呼吸综合症的防制J.河北畜牧兽医,2003,(2):3233.7孙淑清,王剑.断奶仔猪蓝耳病的诊治J.中国兽医科技,2003,(11):6162.(上接第38页)9RasT,VenM,PattersonEG,eta1.Ratspreferencesforcoinversuswood_basedbeddingandnestingmaterialJ.LabAnim,2o02,36(4):110112.