沙门菌属检验.doc

元谋县人民医院检验科微生物室沙门菌属检验标准操作规程文件编号：生效日期：2011-11-01文件版本：第一版文件页码：3/31概述沙门菌属是一类分布广泛、血清型较多、抗原复杂的肠道病原菌，分为6个亚属、2200种以上的血清型。伤寒沙门菌属亚属I，多价O抗血清D群，是临床上最为重要的沙门菌。 2. 标本类型 粪便、血液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色 革兰阴性杆菌，菌体细长。有周鞭毛。 3.2 培养特性 在麦康凯琼脂平板上35培养1824小时，形成无色、透明的菌落。SS琼脂平板上呈无色、透明菌落，但大部分菌落中央呈黑色（产H2S）。3.3 生化反应 氧化酶试验阴性，发酵葡萄糖，不发酵乳糖，三糖铁琼脂（TSI）为K/A，动力、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性，大多数菌株H2S试验阳性，IMViC-+-或-+-+。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征 选择SS平板上无色透明、半透明或中心黑色的菌落，TSI为K/A，H2S阳性或阴性，动力试验阳性，IMViC-+-或-+-+，氧化酶、脲酶试验阴性。符合上述特征者，可通过血清凝集试验作出诊断。 3.4.2 与志贺菌属的鉴别 少数伤寒沙门菌在TSI上H2S阴性，动力不明显，易与志贺菌属相混淆，可用血清凝集试验相鉴别。 3.5 操作步骤 3.5.1 观察菌落特征，挑取可疑菌落，做TSI试验。参见三糖铁试验标准操作规程。 3.5.2 血清学鉴定 参见沙门菌血清学检测标准操作规程。 3.5.3 鉴定 从SS琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见药物敏感性试验标准操作规程。5. 质量控制参见质量管理程序。6. 检验结果解释与分析沙门菌属的鉴定应依赖于传统或商品化系统生化反应和血清学两种方法。若生化反应符合沙门菌，但A-F多价血清不凝集，首先考虑是否存在表面抗原（Vi抗原），因为Vi抗原能阻断O抗原与相应抗体发生凝集，加热可将其破坏。应将细菌制成菌悬液，放入沸水中加热15-30分钟，冷却后再次做凝集试验。若去除Vi抗原后仍不凝集，此时应考虑是否为A-F以外菌群，应送专业实验室进行鉴定。7. 临床意义 沙门菌主要通过污染的食品和水源经口感染，引起人类和动物的沙门菌病，出现相应的临床症状或亚临床感染，主要有胃肠炎、菌血症、肠热症等。 8. 鉴定流程血液、骨髓分离培养（BAP、SS、EMB/MAC）初步鉴定：TSI，KIA/MIU，IMViC菌落观察：SS平板上呈无色、透明菌落，中央呈黑色多价血清（A-F）分群粪便、尿、残余食物增菌培养（血培养肉汤）增菌培养（亚硝酸盐、GN肉汤）沙门菌属最后鉴定仪器或手工细菌鉴定参考文献1 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.20082 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，20073 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，20064 Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,20075 ISO 15189：20