病毒感染的检查方法与防治原则.ppt

病毒感染的检查方法与防治原则 病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类 如逆转录酶 电镜直接观察光镜检查包含体分离培养 一 标本的采集与送检 原则基本与细菌相似 但应注意 1 标本用 双抗 或两性霉素B处理2 低温保存 尽快送检3 血清学诊断采双份血清 二 病毒的分离与鉴定 一 病毒的分离培养细胞培养 cellculture 鸡胚接种 egginoculation 动物接种 animalinoculation 二 病毒的分离与鉴定 一般程序 标本 无菌处理 动物接种鸡胚培养细胞培养 指标阳性指标阴性 病毒鉴定 盲传2 3代 指标阴性 病毒阴性 一 病毒的分离培养1 细胞培养单层细胞培养 monolayercellculture 分类悬浮细胞培养 suspendedcellculture 原代细胞 primarycell 细胞种类二倍体细胞 diploidcell 传代细胞系 continuouscellline 病毒的细胞培养 细胞培养瓶 单层细胞 1 细胞培养 1 原代和次代细胞培养 组织组织块分散的单个细胞单层细胞 剪碎培养基 原代细胞 单层细胞 次代细胞 传代培养 蛋白酶 特点 对多种病毒敏感 生长能力有限 获取成本高 可携带潜伏病毒 1 细胞培养 1 原代和次代细胞培养 2 二倍体细胞培养体外分裂50 100代仍保持二倍体染色体数目 可用于病毒分离和疫苗生产 特点 对多种病毒敏感 不带异种蛋白 人源性 不带病毒 无致瘤潜能 可传50代左右 1 细胞培养 3 传代细胞培养 特点 对多种病毒敏感性高 繁殖能力高 传代时间长 有致癌危险 不能用于疫苗生产 1 细胞培养 2 鸡胚培养采用孵化9 14天的鸡胚绒毛尿囊膜 allantocherion 痘苗病毒 人类疱疹病毒尿囊腔 allantoiccavity 接种部位流感病毒 腮腺炎病毒羊膜腔 amnioticcavity 流感病毒的初次分离卵黄囊 yolksac 嗜神经病毒 2 鸡胚培养 优点 易管理 不带微生物 成本较低缺点 操作程序复杂 3 动物接种应用 尚无敏感细胞的病毒培养动物 兔 鼠 黑猩猩 猴等优点 结果易观察 可建立动物模型缺点 有饲养条件要求 费用高 动物体内常带有潜伏病毒 1 病毒增殖鉴定 1 细胞病变效应 cytopathiceffect CPE 细胞变圆 聚集 坏死 溶解或脱落等 多数病毒 形成多核巨细胞或称融合细胞 麻疹病毒 巨细胞病毒 呼吸道合胞病毒等 在培养细胞中形成包涵体 狂犬病病毒 麻疹病毒等 二 病毒的鉴定 细胞变圆 聚集 坏死 溶解或脱落 1 细胞病变效应 cytopathiceffect CPE 麻疹病毒感染细胞 呼吸道合胞病毒感染细胞 形成多核巨细胞或称融合细胞 1 细胞病变效应 cytopathiceffect CPE 形成包涵体 inclusionbody 1 细胞病变效应 cytopathiceffect CPE 腮腺炎病毒感染细胞 2 红细胞吸附 hemadsorption 病毒囊膜表面血凝素 HA 红细胞表面HA受体 3 干扰现象 interference 风疹病毒 胚肾细胞病毒增殖 CPE 埃可病毒 人胚肾细胞病毒增殖 CPE 人胚肾细胞 风疹病毒 埃可病毒 CPE 风疹病毒 埃可病毒 CPE 风疹病毒 埃可病毒 4 细胞代谢改变细胞代谢变慢pH变化减慢 2 病毒形态学鉴定 电子显微镜 设备 操作复杂 应用受限光学显微镜 可见大病毒 痘类病毒 对一般病毒检测意义不大 3 病毒血清学鉴定 鉴定病毒种 型 亚型 1 血凝抑制试验 hemagglutinationinhibitiontest 正粘病毒型与亚型鉴定病毒 鸡红细胞 凝集 血凝试验 病毒 特异性抗体 鸡红细胞 不凝集 血凝抑制试验 2 免疫标记法 FIA EIA RIA 多种病毒鉴定 3 凝胶免疫扩散试验 gelimmuno diffusiontest 多种病毒鉴定 3 病毒血清学鉴定 4 病毒分子生物学鉴定 抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序 三 病毒数量与感染性测定 1 血凝试验 病毒总量 活病毒 死病毒 2 蚀斑形成试验 plaqueformationtest 3 50 组织细胞感染量 50 tissuecultureinfectiousdose TCID50 感染性病毒量 四 新病毒的鉴定 核酸类型的测定理化性状的检测形态学鉴定血清学鉴定基因测序和生物对比 三 病毒感染的血清学诊断 应用 采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等 1 中和试验 neutralizingtest 病毒 中和抗体病毒失去感染性特点 特异性高 抗体维持时间长应用 人群免疫情况的调查临床诊断少用 2 补体结合试验 complementfixationtest 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体特点 特异性低 抗体出现早 消失快应用 近期感染指标 四 病毒感染的快速诊断 数小时内出结果病毒颗粒病毒成分 抗原或核酸 早期抗体检测 IgM 一 形态学检查 电镜和免疫电镜检查普通光学显微镜检查包涵体 二 病毒成分检测 1 病毒蛋白抗原检测免疫标记技术2 病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术基因测序 三 早期抗体检测 可诊断急性感染特异性IgM抗体 孕妇感染风疹病毒EBV早期抗原抗体EAV核心抗原抗体早期抗原的抗体EAV衣壳抗原抗体 病毒感染的特异性预防 微生物及其代谢产物生物制品动物免疫血清 biologicalproducts 免疫细胞细胞因子防治和诊断感染性疾病 灭活疫苗 inactivatedvaccine 活疫苗 livingvaccine 重组载体疫苗 recombinantcarriervaccine 亚单位疫苗 subunitvaccine 化学提取或人工合成疫苗重组疫苗 recombinantvaccine 核酸疫苗 nucleicacidvaccine 一 人工主动免疫常用生物制品 二 人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白血清丙种球蛋白细胞免疫制剂IFN 细胞因子IL 2 IL 6 IL 12TNF CSF淋巴因子激活的杀伤细胞 LAK细胞 病毒感染的治疗 核苷类药物非核苷类反转录酶抑制剂蛋白酶抑