天然药物质量监控技术.doc

本科生课程论文论文题目火炭母提取浸膏药品质量标准起草研究实验工作实施方案课程名称天然药物质量监控技术学生姓名 李秋婵所在专业制药工程所在班级1092指导教师杜建喜职称教授日期2012年 5月 30日火炭母提取浸膏药品质量标准起草研究实验工作实施方案1、概述火炭母具有清热解毒，利湿消滞，凉血止痒，明目退翳等功能。用于痢疾，肠炎，消化不良，肝炎，感冒，扁桃体炎，咽喉炎，白喉，百日咳，角膜云翳，霉菌性阴道炎，白带，乳腺炎，疖肿，小儿脓疱疮，湿疹，毒蛇咬伤。将火炭母经过浸泡、加入溶剂等，采用水提醇沉淀法提取工艺制成浸膏， 为完成对火炭母提取浸膏药品质量稳定可控，做出对其性状、处方、提取工艺、控制项目等的标准检测。2、情况分析2、1 植物来源火炭母为廖科植物火炭母草的地上部分,生于山谷、水边、湿地,分布于浙江、江西、福建、台湾等地,常夏、秋间采收,鲜用或晒干。2、2 形态特征:藤浅红色，节膨大，红色。叶互生，椭圆形，叶脉紫红色，叶面有人字形暗紫色斑纹，叶柄浅红色。花小，白色或粉红色，集成头状花序。果熟时浅蓝色，半透明，汁多，味酸，可食。2、3 主要化学成分：从火炭母全草乙醇提取物中共分离获得l2个化合物(1-12)【1】，分别确定为丁香酸(syringic acid，1)、芹菜素(apigenin，2)、3,3一二甲基鞣花酸(3，3diOmethylellagic acid，3)、没食子酸(gallic acid，4)、原儿茶酸(protocatechuic acid，5)、异鼠李素(isorhamnetin，6)、咖啡酸(cafeic acid，7)、槲皮素(quercetin，8)、木犀草素(1uteolin，9)、没食子酸甲酯(gallicin，10)、广寄生苷(avicularin，11)和3,4，8，9，1 0一pentahydroxy-dibenzob，dpyran一6一one，12)。di benzo b ,d pyran262o ne.2、4 与产品相关成分及现代研究情况中药剂型目前大致分三类：即浸膏膏剂、浸膏+生药粉末剂及生药粉末制剂。其中中药全浸膏制剂是现代中药制剂的主要形式，此制剂既可确保汤剂中所有的有效成分，又符合中药固体制剂化的要求，故是一种常用剂型。以下为中药浸膏制剂提取技术的研究进展情况：首先，本次产品采用的水提醇沉法：本法指用水作溶媒经提取获得中药提取液再用不同浓度的乙醇沉淀，保留既溶入水又溶于醇的生物碱盐、苷类、有机酸等，经醇处理后的中药浸膏，特别是通过、多糖、蛋白质、氨基酸、无机盐类等亲水性成分，可有效地防止吸湿。另外，高速离心法、沉降分离法、冷冻水沉法、膜分离技术、大孔吸附树脂分离技术、絮凝沉淀法以及为解决中药浸膏制剂有吸潮、软化、结块现象的包衣技术等现代研究手段都日益成熟。2、5 产品形式或剂型情况 将火炭母经过提取与分离技术，得到提取浸膏的有效成分，再将这些成分与合适的辅料和药材结合，通过合适的工艺制成火炭母提取浸膏。火炭母样品采自广东连县(2003年秋)，经王永刚鉴定为蓼科植物火炭的全草。取火炭母药材粉末300 g，水煎煮两次(每次3L、1 h)，过滤，合并滤液并浓缩至1L，首先经过AB-8型大孑L树脂层析，利用乙醇一水梯度洗脱，以聚酰胺薄膜色谱作为检测手段，合并30 70 乙醇,水洗脱部分。该部分分别利用乙酸乙酯、乙醇、乙酸乙酯、石油醚系统进行硅胶柱层析。乙酸乙酯一乙醇(9：1)部分进行反复的Sephadex LH-20柱层析，得到化合物I(约11 mg)和化合物(约7 mg)；乙酸乙酯-石油醚(3：1)部分进行反复的Sephadex LH -20柱层析，得到化合物(约6 mg)。使用仪器x 4型显微熔点仪(温度计未校正)；LCQ DECAXP液相色谱质谱仪(美国Thermo Finnigan公司)；Unity Inova500核磁共振仪(美国Varian公司)；Equinox 55傅里叶变换红外光谱仪(美国Bruker公司)；TU1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。AB-8型大孑L树脂(规格D )为广州市艺能色谱材料厂产品；柱层析硅胶(100200目)为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品，鉴定所得化合物为槲皮苷、异槲皮苷、柚皮素。2、6 质量标准控制项目的设定 根据提取浸膏的成分、制剂类型，以及其生产工艺，提出对成品以下几点的质量标准控制项目：气味、颜色、干燥失重、有效成分含量、微生物限量、浸出物、总灰度等项目因素。3、 质量标准项目的研究方案 3、1性状与鉴定 3、1、1 性状鉴别火炭母茎扁圆柱形,有分枝,长30100cm ,节稍膨大,下部节上有须根； 表面淡绿色或紫褐色,无毛, 有细棱；质脆,易折断,断面灰黄色,多中空。叶互生,多卷缩、破碎,叶片展平后呈卵状长圆形,长510cm ,宽24. 5cm ,先端短尖,基部截形或稍圆,全缘,上表面暗绿色,下表面色较浅,两面近无毛；托叶鞘筒状,膜质,先端偏斜。气微,味酸、微涩【2】。3、1、2 理化鉴定（1）取火炭母粗粉约5g ,加乙醇50mL ,置水浴上回流30min ,稍冷,加活性炭少量,滤过,滤液浓缩至约5mL 。取滤液2mL ,加镁粉少量与盐酸5 滴,置水浴中加热3min ,显橙色或橙红色。(2) 取上述滤液点于滤纸上,干后,置紫外光下观察,显黄色荧光,再喷以1 %三氯化铝的乙醇溶液,荧光加强。3、1、3薄层鉴别【3】取火炭母粉末2g ,加50 %甲醇30mL ,盐酸1mL ,加热回流1h ,趁热滤过,滤液放冷,用乙酸乙酯振摇提取2 次,每次20mL ,合并乙酸乙酯提取液,浓缩至约1mL ,作为供试品溶液。另取槲皮素对照品,加乙酸乙酯制成每1mL 含0. 5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录B)试验,吸取上述两种溶液各10L ,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂含0. 5 %氢氧化钠的硅胶G薄层板上,以甲苯(水饱和)2甲酸乙酯2甲酸(5 41) 为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5 %三氯化铝乙醇溶液,置紫外光灯(365nm) 下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。3、2 定量控制 3、2、1 测定火炭母中槲皮苷的含量。采用HPLC(Dionex高效液相色谱仪,美国戴安公司)法，色谱柱为Diarnonsil RP_18e(250 ITIITtX 40 mm。5m)；流动相为乙腈一四氢呋喃磷酸水溶液(四氢呋喃：磷酸水溶液 5：95，vv，pH 30)=37：163；柱温：35 ；检测波长：365 rim。结果：以峰面积积分值A 为纵坐标，进样量C( g)为横坐标，得回归方程，再利用回归方程求出所需数据【4】。3、2、2 测定不同产地火炭母药材总鞣质的含量【5】采用仪器：UV2550紫外分光光度计(日本岛津公司)；B2200ST型超声仪(上海必能信超声有限公司)；BT224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；单道微量可调移液枪(芬兰Thermo Finnpipette)；试剂：没食子酸对照品(批号：110831-200302)，购自中国药品生物制品检定所；其余试剂均为分析纯；样品：l0种火炭母药材(均秋季采收)采于广西、广东、福建、浙江、云南等省，云南产药材为蓼科植物粗毛火炭母(Polygonum chinenseLvathispidum Hookf)，其余均为火炭母(Polygonum chinense L)的干燥全草。以上述条件为基础，采用紫外分光光度法，以没食子酸为对照品，测定火炭母总鞣质的含量。3、2、3 RP-HPLC法测定火炭母药材中鞣花酸的质量分数采用色谱柱为Welch Materials XB-C18柱(46 mm x 250 mm，3 Ixm)，流动相为 醇：积分数为0 2 酸水溶液=45：55，流速为08 mLmin，柱温为30 ，检测波长为357 nm, 用于火炭母药材中鞣花酸的含量测定。3、3检查项目3、3、1总灰分 测定不同来源的样品，总灰分平均，得鉴于该品含草酸钙结晶，对照药典检查其总灰分限度。3、3、2 浸出物测定批次不同来源样品的乙醇浸出物多份数据，得平均值，对照药典测定该品醇溶性浸出物限度。3、3、3 微生物限度 照微生物限度检查法（附录 G）检查，应符合规定。3、3、4 干燥失重 取本品，在105摄氏度干燥至恒重，减失重量不得过3.7%（附录IX G）4、 总结通过对火炭母的来源、性质、作用等的了解，结合现代药物分析、质量监控等，用科学可靠的方法将火炭母其中的有效成分槲皮苷、异槲皮苷、柚皮素等与正确适当的辅助剂制成火炭母提取浸膏。根据相关的制作手段与剂型特点，制定一系列的质量标准控制项目、相对应的检测手段。4、1 药品药理稳定性的后续监测4、1、1 抗菌作用火炭母醇提取液及水提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、肺炎杆菌和痢疾杆菌等有较强抗菌作用【6】。4、1、2 中枢抑制作用给小鼠腹腔注射火炭母水醇提取物109(鲜生药)kg有中枢抑制作用，表现为运动失调，并能延长环巴比妥钠的催眠时间。4、1、3 抗氧化及清除自由基活性火炭母药材80甲醇提取液，用改良的ABTS法测定其抗氧化活性，用水溶性维生素E标定其活性，结果表明，其抗氧化活性相当于水溶性维生素E的575【7】。火炭母药材用80甲醇提取，采用去氧核糖的方法测定其清除羟基自由基的活性，用抗氧化剂BHT(二丁基羟基甲苯)做阳性对照，结果表明其清除羟基自由基能力相当于BHT能力的216【8】。4、1、4 抗炎活性火炭母根用甲醇提取后，采用抑制肥大细胞超氧化阴离子的方法测定其抗炎活性，结果表明有较好的抗炎活性【9】。4、2 药品毒理的后续监测毒性研究：火炭母水醇提取物59(鲜生药)kg静脉注射，可使小鼠中枢抑制，运动失调，呼吸加深加快，头部轻度震颤，24h后5只中有1只死亡。腹腔注射煎剂lg(生药)只，24h内小鼠全部死亡。石咏军【10】等在临床上发现，患者在治疗糖尿病过程中，口服火炭母草煎剂可导致急性肾衰竭。据分析，可能与火炭母中抗癌成分的肾毒性有关。参考文献：1 谢贤强，吴萍，林立东等.火炭母化学成分的研究J.热带亚热带植物学报，2007，15(5)：450-4542 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草(第2 册) M .上海:上海科学技术出版社,1999 :6483 广东省中药材标准编委会. 广东省中药材标准(第一册) M . 广州:广东科技出版社,2004 :55256 4 林焕泽，吴秀荣.高效液相色谱法测定火炭母中槲皮苷的含量 J .科学简报，2006,26（8）:1032-10335 赖飞蛾，高雅，张可峰. 不同产地火炭母总鞣质的含量测定J. 安徽农业科学,2009,37(28):3596-35996 中国医学科学院药用植物资源开发研究所等中药志(第四册) M第一版北京：人民卫生出版社，1988：2057 Wu-Yang Huang,Yi-Zhong Cai，Jie Xing，et a1Comparative Analysis of Bioactivities of Four Polygonum StmciesJPlanta Medica，2008,74：43-49 8 WuYang Huang，Yi-Zhong Cai，Jie Xin，et a1A Potemial Antioxidant Resource：Endophytic Fungi from Medi