疫苗注册检验及质控方法要点.ppt

1 疫苗注册检验及质控方法要点 李长贵中国食品药品检定研究院2013 9 25 吉林长春 注册检验的内容及流程 2 生产工艺审查 制造及检定规程 是否符合基本要求生产及检定记录 是否符合制造及检定规程的描述制品原液 半成品 成品的检验项目 方法 结果是否符合国家药品标准及企业标准的规定制品包装 标签 使用说明书是否符合相关规定 国产疫苗注册 注册检验类型 新产品注册工艺变更核对新工艺 对应检测方法和指标 质量标准变化其它变更 规格 包装材料一般不涉及标准和方法的变化再注册 进口制品 工艺 方法 标准无变化时 只进行核档标准提高 3 原液抽样检测原则 作为成品检测的补充 1 在成品中不检测裂解剂等工艺中间步骤 灭活 纯化疫苗等 制品的纯度 定性等 重组蛋白等 2 在成品中无法检测 联合疫苗 多价疫苗 佐剂疫苗 残余DNA 内毒素 宿主蛋白等 根据以上原则 可以进行部分项目的检测 4 5 检定项目的设置及其意义 检定的意义在于保证制品的 安全性 制品自身 如减毒活疫苗的神经毒力 工艺引进 流感疫苗的裂解剂 抗生素 工艺残留 制品残留 外部污染 后期添加 防腐剂 稳定剂有效性 制品的确认 鉴别试验 重组蛋白分子结构 含量的测定 效力试验 稳定性或一致性 上述检测结果的分析 正确的指标 如活性比 各级 项检测标准的区间 6 生物制品生产中检定项目的设置 包括 1 起始原材料 毒种 细胞 佐剂 其它添加物质2 生产过程 收获 纯化 提取 裂解等重要工艺过程3 关键节点 原液 半成品 成品紧紧围绕着制品本身的属性 类型 使用途径及目的 控制节点 达到保证制品的质量的目的 7 以流感疫苗生产为例 鸡胚 9 11日龄 流感病毒工作种子批 病毒接种鸡胚尿囊腔 培养48 72小时 病毒收获 尿囊液 单型病毒收获液合并 病毒灭活 病毒超滤浓缩 鉴别 病毒滴度 血凝滴度 无菌 支原体 内毒素 血凝滴度 病毒灭活验证 8 以流感疫苗生产为例 病毒液层析纯化 病毒裂解 超滤再纯化 除菌过滤 单价病毒原液 三价半成品 成品 硫柳汞 血凝素含量 无菌 鉴别 裂解剂残留 无菌 鉴别 血凝素 无菌 pH装量 硫柳汞 卵清蛋白 内毒素 残留甲醛 总蛋白异常毒性 外观 9 检测方法的类型 效力试验鉴别试验安全性测定1 异常毒性 无菌2 理化测定 灭活 纯化 裂解剂等3 宿主残留 蛋白 DNA BSA 4 工艺污染 内毒素装量 pH 外观 渗透压等一般项目 10 疫苗的类型与效力试验考虑要点 减毒活疫苗 OPV MMR JE VZV等计算病毒数量 CFU PFU CCID50 其效力可以预期临床使用效果 前提 蛋白或多糖 提取 重组类 疫苗 HBV HPV 流脑多糖抗原性 免疫原性 定性明确 结构稳定体内试验 或由体内向体外方法过渡 灭活病毒疫苗 包括裂解 纯化 体内方法 狂犬疫苗 保护性抗原不明确 体外方法 流感疫苗 保护性抗原明确 11 体内攻击模型法 体内功能性抗体检测 体外免疫学方法检测 体外分析 理化 方法 与临床效果的相关性 一致性更加明显 各类效力试验方法的意义比较 12 以HPV疫苗效力试验为例 Merck疫苗 体外方法夹心ELISA方法测定抗原含量 其中第二个抗体针对中和表位GSK疫苗 简化的体内方法疫苗及参考品稀释后 采用单一剂量免疫小鼠 以间接ELISA法测定抗体滴度 计算疫苗和参考品的比值国产疫苗 体内方法疫苗系列稀释后免疫小鼠 每组10只鼠 采血测定假病毒中和抗体 计算半数感染剂量 ED50法 13 体内方法和体外方法的比较 14 体内效力试验的局限性 不同动物种属 品系 免疫应答不同 采用攻击模型难以预期保护效果商业化疫苗的质量保证 GMP 经过验证的生产工艺 中间过程控制和放行检测批签发中的效力试验用于 确认生产过程的一致性 确保商业化的批次与临床试验批次无差异 后者经过临床试验证明其安全性及有效性 15 效力试验的策略 在制品的研发阶段 采用体内和体外两种方法 建立疫苗抗原性和稳定性的数据 建立体内和体外方法的相关性 确认体外方法监测疫苗稳定性的适用性上市后的效力试验常规放行检测 采用体外方法常规稳定性监测 若可行 前期验证 采用体外方法 经常进行体内方法以保持技术熟练验证工艺的重大变更 采用体内和体外两种方法 16 流感疫苗血凝素检测方法 单向免疫扩散 SRID 依赖于WHO提供的 抗原参考品抗血清参考品根据每年流行毒株的变化制备相应的参考品问题 在流感疫苗的检定中 为何采用这样一个古老的方法 17 体内效力试验 选择合适的免疫程序 免疫针次 优选单剂次免疫 多剂次免疫应有足够的理由疫苗的剂量 免疫应答应当落在剂量 效应范围内剂量 效应曲线 应当通过多次试验确认证明检测的敏感性 应能够发现制品的降解及效力下降 重要 如某个制品 免疫动物后测定阳转率 不同剂量同一标准 18 多价疫苗中的剂量效应曲线 对所有抗原的剂量效应范围为0 1 g 0 5 g 19 效力试验标准 效期内下降值 生产时目标 疫苗注册中发现的问题举例 国产联苗注册麻疹风疹腮 水痘四联苗 在水痘滴定中 采用人二倍体细胞 但麻疹 风疹及腮腺炎病毒均可以在人二倍体细胞上生长 应当有方法学验证 证明无干扰国产HPV疫苗效力试验 采用ED50方法 建立了标准 例如ED50小于0 1 g 但没有参考疫苗 方法无法准确评估进口HPV疫苗变更注册提出变更申请 将体内方法变为体外方法 提供了验证资料 但该佐剂疫苗无明显的解吸附过程 样品及参考疫苗解吸附不充分 建议维持原体内法 20 疫苗注册中发现的问题 三批制品的定义 从原材料开始 还是仅为配制阶段制品的均一性 小量生产 均一性BSA检测 鉴别试验原液送样过程中污染菌毒种来源是否合法 前期合同检验 规程描述不清楚 省略关键环节 21 22 参考品 参考品是检测方法 尤其是疫苗中的效力试验的重要组成部分参考品作用 1 建立每次试验是否有效的标准 内控 如减毒活疫苗的参考品 每次检测在标识值 2SD范围内 试验有效 样品测定结果准确 2 用于校正疫苗中活性单位如流感疫苗的血凝素含量参考品 以单向免疫扩散试验 建立标准曲线 测定疫苗样品中抗原含量 23 参考品的建立 需要考虑的因素1 用途 方法评价 质控 一般试验 效力试验2 使用范围 一个单位 全国 国际3 标定方法 根据用途 使用范围而定4 溯源 制备要求1 与样品关系2 分装与保存3 标定 是否协作研究 参考品的制备需要全面考虑上述因素 制订合理的策略该简单的就简单 该复杂的就复杂 24 举例1 卵清蛋白标准品的建立 25 主要用途和思路 二 制备策略1 以国外试剂盒进行标定 从而与以往结果一致2 对卵清蛋白进行筛选3 制备不同浓度系列 方便使用4 对保护剂进行筛选和考核5 以国外试剂盒进行协作标定不需要申报国家参考品 液体分装 不需要分装精密性 不需要长期稳定性考核 一 用途 用于评价国产卵清蛋白试剂盒 以取代国外试剂盒 26 原材料初筛结果 27 28 卵清蛋白国家定量参考品协作标定结果 29 标定结论 经标定 系列参考品标示量分别为 S1 17 96ng ml 95 CI 16 96 18 96 S2 12 25ng ml 95 CI 10 74 13 76 S3 6 79ng ml 95 CI 5 65 7 93 S4 3 11ng ml 95 CI 2 80 3 42 30 对天坛试剂验证结果 单位 ng ml 31 对天坛试剂热稳定性验证结果 单位 ng ml 32 对科兴试剂验证结果 单位 ng ml 33 对科兴试剂热稳定性验证结果 单位 ng ml 应用效果 2010 2012年流感疫苗卵清含量明显下降 检测结果为ng ml 药典标准500ng ml 35 举例2 麻疹减毒活疫苗参考品的建立 36 减毒活疫苗参考品的意义 参考品是病毒滴定系统中的重要组成部分 能够控制不同滴度试验间的变异 是病毒滴度测定中不可或缺的部分 使用国家参考品能够为相关产品提供统一的参照标准 使生产企业 质控部门更好的控制产品质量 37 参考品的制备 标定方案 选取国内生产用毒株 沪191 BRD 制备参考品 为了增加参考品的均一性和稳定性 在参考品的制备过程中提高对保护剂成份 分装精度 残余水分含量的要求 协作标定包括所有相关疫苗生产企业 以保证协作标定结果的代表性 将协作标定分两个阶段 预标定和正式标定 以保证协作标定准确性 与国际参考品同时进行标定 保证国家参考品的溯源性 稳定性考核包括热稳定性和实时稳定性 选择毒株 生产制备 正式标定 稳定性考核 预标定 不含国际参考品 修订检测方法 含国际参考品 按照统一方法 38 协作标定流程图 发放调查表 含标定SOP 获得反馈结果修改SOP 发送候选参考品和国际参考品 候选参考品预标定 预标定结果汇总及分析 正式标定 候选参考品国际参考品 正式标定结果汇总及分析 39 标定方案示意图 4支待标定参考品 0 5ml 支 稀释1 稀释2 稀释3 稀释4 1支国际参考品 1ml NO1 N