250升系统操作规程.doc

250升系统操作规程一、 空气过滤器的灭菌1. 确定空气总过滤器已灭菌，蒸汽压力经减压后不超过0.3Mpa。2. 关闭空气阀门，打开空气过滤器下端排气阀，彻底排尽空气过滤器中的空气。缓慢打开蒸汽阀，使过滤器充分预热。待冷凝水排尽，调整进气阀和排气阀，使压力缓慢上升至0.14Mpa并维持住。由近及远依次打开相应阀门，保证相关管道中有蒸汽流动，最终使蒸汽过滤器压力维持在0.12Mpa，维持30分钟。3. 灭菌结束后，由远及近依次关闭蒸汽阀门，注意空气过滤器压力不可过高。之后，将蒸汽迅速切换成空气，打开各排气阀，吹干各排气口和空气过滤器后，关闭各排气阀，使空气过滤器压力维持在0.200.30Mpa。二、 罐的空消1. 空消前的准备工作确保发酵罐及管路的严密，检查溶氧电极和PH电极是否取下，打开夹层排水阀、回水阀，排空夹层中冷凝水。蒸汽管路压力维持在0.200.30Mpa。2. 升温打开罐的排气阀、蒸汽阀，向罐内直接进蒸汽，250L发酵罐和25L发酵罐要事先将通风管道内切换为蒸汽。250L发酵罐从通风管、取样管、排料管三处进汽，25L发酵罐从通风管、取样管两处进汽。待罐温升至105、罐压表读数明显上升时，关小排气阀，升压升温，使罐压达到0.120.15Mpa，罐温达到121126，维持30分钟。在保温过程中，由近及远依次打开相关阀门，微排气。3. 冷却30分钟后，由远及近依次关闭各排气阀，关闭进汽阀。待罐温降到95以下时，压出罐内冷凝水，把排气阀开至最大，空消结束。（250L发酵罐和25L发酵罐在关闭蒸汽阀后，应迅速将通风管道内切换成空气，保证通风管道内处于正压力。同时应将与通风管道有关的侧排打开，待空气将通风管道内冷凝水吹干，再关闭侧排）三、 罐的实消1. 进料在进料前可根据需要安装PH电极和溶氧电极。往培养基内加水，充分搅匀，开启搅拌，从进料口往罐内加培养基和水，注意使物料总体积保持在灌的容积的60%左右，封闭罐口。2. 升温先从加层进蒸汽,无夹层的罐可直接向罐内进蒸汽。加热至90左右，关闭夹层进汽。往罐内进蒸汽升温过程同空消一样，灭菌温度和时间可根据发酵需要来控制，一般控制在121，维持30分钟。此过程需注意：1 升温、升压过程中，注意将罐内冷空气排尽（升温至105，待压力表读数明显上升时）。进汽不可过快、过迅速，避免泡沫过大而染菌。如果泡沫过大，应间歇升压，关小排汽阀。2 维持阶段，尽量使进汽、排汽达到平衡状态，保证罐压稳定。3 相应管道的侧排阀要打开，避免出现灭菌死角。3. 降温保温灭菌30分钟后，由远及近依次关闭所有排汽阀和进汽阀，迅速通入无菌空气（250L发酵罐和25L发酵罐要迅速将通风管内蒸汽切换成空气），维持罐压在0.1Mpa左右。从夹层进水冷却罐温，夹层压力要小于0.1Mpa。降温过程中应避免罐压迅速下降甚至跌零，造成染菌。待罐温下降至额定温度时，应停止夹层进水，保压备用。四、接种用酒精绵球擦洗接种口，并在接种口周围放置几枚酒精绵球。关闭进气阀，迅速打开排气阀 ，待罐压降零后再迅速关闭排气阀。点燃酒精绵球，迅速拧开取样口，轻微进气，往罐内移入菌种，立即封闭取样口，吹灭酒精绵球，调整进气流量和排气流量，使罐压稳定在发酵条件下的额定罐压。五、取样 保证蒸汽压力在0.15Mpa，打开蒸汽阀门、取样口阀门，待冷凝水排尽后，再打开小侧排阀，使蒸汽流动15分钟达到灭菌效果后，方可取样。取样时，先关闭各排汽阀，再关闭蒸汽阀，拧开取样阀