层析技术在生物制药产业上的应用.doc

芜湖职业技术学院毕业设计报告书层析技术在生物制药产业上的应用 生物工程 系 制药技术 专业 08制药 班 学生 贺行涛 系主任 杨靖东 指导教师曹侃2010 年 12 月 1 日芜湖职业技术学院毕业设计任务书20082011学年生物工程系制药技术专业编号批准日期学生贺行涛 系主任设计题目：层析技术在生物制药产业上的应用原始资料：1 梁荣梯. 层析技术介绍J. 动物学杂志, 1983, (01) 2 焦今召. 几种层析液分离色素的效果比较J. 生物学教学, 2000, (06) 3 张守本. 电阻率层析技术的一些新进展J. 世界核地质科学, 1998, (01) 4 张善法. 桩基检测中跨孔电磁层析技术的应用J. 地球物理学进展, 2005, (01) 5 江玉姬, 邓优锦, 刘新锐, 胡方平, 谢宝贵, 刘福阳, 黎志银. JS018菌有机磷农药降解酶的纯化J. 江西农业大学学报, 2006, (03) 6 江玉姬, 邓优锦, 刘新锐, 胡方平, 谢宝贵, 刘福阳, 黎志银. Roseomonas JS018有机磷农药降解酶的纯化J. 福建农林大学学报(自然科学版), 2006, (04) 7 贾敏. 对比讨论常用三种静校正方法的优劣J. 知识经济, 2010, (14) 8 高友红. 层析液的配制J. 生物学通报, 1998, (08) 9 齐翔林, 汪云九. 生物组织X光照片圆层析合成法的研究、优化断层片的数学方法J. 生物物理学报, 1990, (04) 10 韩亮, 刘淑玲, 赵丽欣, 张秀霞, 杨桂云, 张志, 曾国华. 抗基因工程干扰素单克隆抗体的纯化J. 中国生物制品学杂志, 1993, (02)11 刘程. 层析技术成为生物制药得力工具N. 中国医药报, 2007, (2007-04-26) 12 本报记者 邢佰英俞叶峰. 安科生物 争做生物制药先锋N. 中国证券报, 2009, (2009-09-23) 13 记者 卢志民特约通讯员 李波. 投资6亿打造一流生物制药基地N. 湛江日报, 2009, (2009-12-30) 14 本报记者 熊光明. 生物制药,打开医药产业新天地N. 中国医药报, 2010, (2010-04-15) 15 九鼎德盛. 生物制药 多重利多因素提升市场机会N. 证券日报, 2010, (2010-11-13) 16 姜小莉. 现代“找药人”N. 常州日报, 2009, (2009-11-23) 17 记者 杨俊坚. 民企发力生物制药N. 医药经济报, 2010, (2010-05-10) 18 本报记者 陈术培. 奋力抢占全国生物制药“制高点”N. 成都日报, 2010, (2010-01-20) 19 本报记者 黄捷文. 生物制药前景广阔N. 韶关日报, 2010, (2010-11-11) 20 王丹红. 冰岛著名生物制药公司申请破产保护N. 科学时报, 2009, (2009-12-02) 目录摘要4关键词4正文6201.层析定义与原理62.分析工作范围63.平面层析74.薄层层析75.气相色谱86.高效薄层层析97.吸附层析法108.定制个性化层析129.层析柱装填自动化1210.膜层析应用优势明显1311.层析技术在生物中的应用实例1412.国外生物制药现状1613.国内生物制药现状1714.我国生物制药产业的发展19层析的简单定义为:层析是一种差速迁移过程, 样品组分在其固定相与流动相间的分取决于组分对其中一相或二相的亲和力, 迁移的速率从零至流动相速度而不同刀。流动相可以是液体或气体；固定相可以是固体或是一些吸附于适当支持介质上与流动相不相混合的其它相。液相层析(lc)指除气相层析(GC)以外的各种层析技术,包括纸层析(PC)、柱层析(CC)、薄层和高效薄层层析(TLC和HPTLC)以及高效液相层析(HPLC)。层析过程是基于样品组分在互不相溶的两“相”溶剂之间的分配系数之差( 分配层析),组分对吸附剂吸附能力不同(吸附层析),和寓子交换, 分子的大小( 排阻层析) 而分离。层析技术是功能最强大的纯化工具之一，广泛应用于多种行业。尤其在生物制药工业领域，不断改进完善的层析技术正在帮助制药厂家应对不断出现的产能挑战。近年来，为了满足对无杂质的蛋白质、病毒、核酸、酶和酶抑制物不断增长的需求，生产厂家不断增加层析技术在药物纯化方面的应用，随着应用的增加，层析工艺技术也出现了很多新的趋势。在药物的开发、配方、销售和药物代谢动力学的评价中, 分析工作的范围包括如下几方面:1 药物生产原料的鉴定和纯度测定;2 药物的鉴定和纯度检查;3药物中微量杂质的分离和鉴定;4药物的降解率和降解产物的测定;5制剂中药物的鉴定及其含量测定;6制剂中降解产物的测定, 分离供毒性试验的物质;7对小剂量处方中药物, 检测含量的均匀性;8分析药物及其制剂中的其它物质(如水份, 残留溶剂,重金属, 防腐剂和特异的杂质);9 测定体液中药物和代谢物的浓度, 以便确定药物在体内的吸收, 生物利用度和消除。许多方法都可用来获得上述信息。包括颜色反应、熔点测定、分光光度法(UV,IR,NMR和MS)旋光度折射率和微生物学测定.在一特定时间内, 层析法一般是能提供最多信息的技术。在某些情况下, 亦可将一种非专一一性的定量测定法(如分光光度法)与一种简单的定性层析试验(如TLC) 联用, 由于TLC可表明干扰杂质不存在, 因而这二种方法的联用可以提供GC或HPLC 分析同样多的信息, 而且较有经济效益1、平面层析(planar chromatography)平面或平板层一析包括纸层析(pc) 和薄层层析(tlc)技术。1、1薄层层析（TLC） 薄层层析是一种简便、快速、微量的层析方法。一般将柱层析用的吸附剂撒布到平面如玻璃片上, 形成一薄层进行层析时一即称薄层层析。其原理与柱层析基本相似。由于TLC具有较高的分辨率和能出现更多致密的色斑, 可用肉眼看出低浓度杂质的存在, 因而在各国药典中,TLC已逐渐取代PC.TLC 的主要优点是经济和简便, 主要缺点则是, 尽管足以胜任许多限量试验的要求, 但由目测测量不免带有很高的主观性而且这种方法至多不过是半定量。在药典的不同标题项下(例如有关化合物分解产物,有关物质,外来物质等)均列有使用TLC的限量试验。限量试验中, 使用TLC的最常用方法是以物质的二种浓度水平进行检测。较稀的溶液代表允许杂质的最大浓度, 因而, 不需要参照样品。在显色后, 较稀溶液的层析图谱中应仅出现主要组分的一个斑点。Fairbroth(1984)综述了TLC在药学中的应用技术和应用范围, 后者包括药物鉴别, 杂质检查, 药物稳定性, 制剂分析, 体液中的药物,抗生素, 天然产物, 表面活化剂, 化妆品, 类脂物和添加剂等。毒物中或无标记白色片剂的活性成分的未知药物鉴别, 在无整套标准对照品存在下是完全不可能的。但是, 尽管由于实验条件不同, 实一验室间Rf 值有差异, 而TLC确实能提供一种简便和快速的鉴别方法。Dhont报道了一种简单校正Rf值的方法以沟通实验室间的相互关系。对特定实验条件仅使用二个参考物质(高Rf 值和低Rf值), 就可计算出校正因素数。因此, 这种方法可用于与其它实验室(例如文献报道值)的实验结果进行比较。该法与Moffatt等由8个TLC 系统794个药物所得出的HRF值一起, 可用以抗组织胺类、局部麻醉剂、中枢神经兴奋剂、磺胺类和苯二氮杂覃等类药物的鉴定1、2高效薄层层析（HPTLC）高效薄层层析定量分析可能比HPLC昂贵, 然而却有许多优点, 包括操作简便和样品通过速度快, 从而使得分析每个样品非常经济有效1985 年的国际会议指出, 就方法的准确度、多功能性、精密性和灵敏度方面,TLC 和HPTLC 都相当于或超过GC和HPLC例如用TLC和HPTLC作沙丁胺醇的药代动力学研究, 可以测至1ug/ml 水平,而且测定比GC/MS快。一种用于控制抗生素生产发酵过程的单一半自动TLC系统可提供相当于8个HPLC系统所得等量的数据。用定量HPTLC分析体液中的药物和代谢产物已由Ritter综述。用液一液提取和tlc相结合的方法已用于药物制剂和生物体中药物的快速鉴别。柱层析在法定分析中, 常规的柱层析(用玻璃柱)常用在另一种分析方法(如分光光度法)之前作为一种纯化预处理操作。对痕量污染物的检测和测定, GC和HPLC往往优于其它方法, 但如果这些化合物不能从柱上洗脱, 则GC和HPLC显然不如TLC。因此GC或HPLC的选择取决于分析化合物的理化性质,样品的种类以及所要求的检测浓度。对药物分析的应用, 一般采用HPLC多于GC, 这是因为:1,HPLC的大多数分离都在室温进行,不易发生热分解;2与GC分析所用的固定相相比HPLC仅需较少的层析柱就可进行一系列的分离;3,HPLC 通常无需进行衍化操作 , 混合基质（如油膏、霜剂万栓剂）中的药物, 毋需进行预提取步骤, 而可溶于适当溶剂中直接进样。另一方面, GC则不存在HPLC的溶剂浪费间题。因此, 对每件检样的总耗费较低, 而且GC尤以毛细管柱对复杂组分(如挥发油类)的分辨率较HPLC好。1、3气相层析 在药物分析中,GC 的应用研究有三个主要方面? 原料测定 不同处方中药物的含量测定 药物中存在的杂质和溶剂的测定。多数的分析, 尤在法定分析中,是利用1-3米长的填充柱, 并用火焰离子化检测器检测分离的化合物。该法已应用于许多药物, 包括抗组胺类, 抗惊厥药, 镇痛药, 三环类抗抑制剂, 苯二氮草类, 中枢神经兴奋剂, 抗肿瘤剂, 抗生素和利尿剂等的定性和定量分析。GC与作为检测器的质谱联用, 又可获得用其它技术所未能取得的定性和定量信息。热解气相层析(PGC) 是将被分离物质先进热分解成更易挥发的成分然后再通过层析柱的一种气相层析法。此法主要应用于常规GC不能达到足够挥发性以进行分析的物质的检测。PGC在药物领域的应用很有意义且广泛,现已应用于微生物和真菌的鉴别、临床分析(对某些代谢失调, PGC/MS可提供一特有的线索)、毒物和药物分析(如巴比士酸盐类、吗啡、吩唾嗓类、磺胺类,青霉素和头抱菌素类等)。1、4高效液相层析 HPLC是在药物分析中应用最为广泛的分析方法。该技术本身有助于自动化。最佳系列型号仪器包括自动进样器、三元或四元梯度溶剂系统, 柱转换装置和二极管阵列或快扫描UV检测器, 全部电子计算机化,对特殊的测定用数据处理设备计算结果并打印报告。目前, 正在设计更为精密的和专门适用于药品质量控制的HPLC仪器HPLC 中的傅里叶变换红外检测器的开发和合适的数据库联用, 又可提供一种非常强有力的分析工具。HPLC的许多应用虽无需对样品作进一步的纯化, 但却需要除去由于物理体积和化学行为(如蛋白质和类脂物)而损坏层析柱的杂质。简单的溶液(如注射剂)可直接进样或稀释至浓度适应于检测器的检测范围后注样。糖浆剂亦需稀释, 而片剂和胶囊则需置超声浴中处理并滤过以除去异常物质。尽管霜剂和软膏在用保护柱时可直接进样, 但最好预先分离亲脂性物质例：层析技术携手蛋白质类药据药物技术报道，随着对蛋白质类药物需求的增加，美国Pall 公司开发出了新型混合式层析吸附剂BioSepra PPA 和HEA HyperCel，可使蛋白质净化过程的速度更快、成本更低。与传统的吸附剂HIC 相比，这些新型吸附剂更具有价格竞争力，成本比许多亲和性介质要低得多。在生物制药领域，色层分析法应用于上游生产过程中，可提高高浓度蛋白质的产量。目前，蛋白质组的应用正推动着层析技术市场的发展，而应用层析技术则可以解决吸附剂下游生产的瓶颈，推动蛋白质类药物的生产发展。BioSepra PPA 和HEA HyperCel 吸附剂可以区分那些具有类似等电离点的蛋白质，且不需要液向性或其他盐添加剂，因此，不太会受到那些可能导致蛋白质聚集及稳定性改变的有害处理条件的限制。而且，BioSepra PPA 和HEA HyperCel 可以加速原料或者中间体的黏合，同时避免对盐添加剂进行循环使用（这种用法费用昂贵并且污染环境），相应地节约了成本，运行费用也会大大降低。此外，由于这种新型吸附剂能够调节针对不同蛋白质的选择性，因此可应用于各种不同的领域，包括单克隆抗体（MAbs）、酶、疫苗、重组蛋白质和血浆分离等等。1、5吸附层析法吸附剂、溶剂与被分离物性质的关系:液- 固吸附层析是运用较多的一种方法,特别适用于很多中等分子量的样品(分子量小于1,000的低挥发性样品)的分离,尤其是脂溶性成分一一般不适用于高分子量样品如蛋白质、多糖或离子型亲水住化合物等的分离。吸附层析的分离效果,决定于吸附剂、溶剂和被分离化合物的性质这三个因素。龄前吸附剂: 常用的吸附剂有硅胶、氧化铝、活性炭、硅酸镁、聚酰胺、硅藻土等。硅胶: 层析用硅胶为一多孔性物质, 分子中具有硅氧烷的交链结构, 同时在颗粒表面又有很多硅醇基。硅胶吸附作用的强弱与硅醇基的含量多少有关。硅醇基能够通过氢键的形成而吸附水分, 因此硅胶的吸附力随吸着的水分增加而降低。若吸水量超过1 7 , 吸附力极弱不能用作为吸附剂, 但可作为分配层析中的支持剂。对硅胶的活化, 当硅胶加热至100110时, 硅胶表面因氢键所吸附的水分即能被除去。当温度升高至5 0 0 时, 硅胶表面的硅醇基也能脱水缩台转变为硅氧烷键, 从而丧失了因氢键吸附水分的活往, 就不再有吸附剂的性质,虽用水处理亦不能恢复其吸附活性。所以硅胶的活化不宜在较高温度进行。硅胶是一种酸性吸附剂, 适用于中性或酸性成分的层析。同时硅胶又是一种弱酸性阳离子交换剂, 其表面上的硅醇基能释放弱酸性的氢离子, 当遇到较强的碱注化台物, 则可因离子交换反应而吸附碱性化合物。 氧化铝: 氧化铝可能带有碱性( 因其中可混有碳酸钠等成分) , 对于分离一些碱性中草药成分, 如生物碱类的分离颇为理想。但是碱性氧化铝不宜用于醛、酮、醋、内酯等类型的化合物分离。因为有时碱性氧化铝可与上述成分发生次级反应。除去氧化铝中绚碱性杂质可用水洗至中性, 称为中性氧化铝。中性氧化铝仍属于碱性吸附剂的范畴, 本适用于酸性成分的分离。用稀硝酸或稀盐酸处理氧化铝, 不仅可中和氧化铝中含有的碱性杂质, 并可使氧化铝颗粒表面带有N O 3 - 或C I - 的阴离子, 从而具有离于交换剂的性质, 适合于酸性成分的层析, 这种氧化铝称为酸性氧化铝。供层析用的氧化铝, 用于拄层析的, 其粒度要求在100160 目之间。粒度大子100 目,分离效果差: 小于1 6 0 目, 溶浓流速大慢, 易使谱带扩散。样品与氧化铝的用量比, 一般在1:(2050)之间层析柱的内径与柱长比例在1:(10-20)之向。在用溶剂冲洗柱时, 流速不宜过快, 洗脱液的流速一般以每半1 小时内流出液体的毫升数与所用吸附剂的重量( 克) 相等为合适。 活性炭: 是使用较多的一种非极性吸附剂。一般需要先用稀盐酸洗涤, 其次用乙醇洗,再以水洗净,于80干燥后即可供层析用。层析用的活性炭,最好选用颗粒活注炭,若为活性炭细粉,则需加入适量硅藻土作为助滤剂一并装柱,以免流速太慢。活性炭主要且于分离水溶性成分,如氨基酸、糖类及某些甙。活性炭的有为吸附作用,在水溶液中最强,在有机溶剂中则较低弱。故水的洗脱能力最弱,而有机溶剂则较强。例如以醇- 水进行洗脱时,则随乙醇浓度的递增而洗脱力增加。活性炭对芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物,对大分子化合物的吸附力大于小分子化合物.利用这些吸附性的差别,可将水溶性芳香族物质与脂肪族物质分开,单糖与多糖分开,氨基酸与多肽分开。溶剂: 层析过程中溶剂的选择, 对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂( 单一剂或混合溶剂) 习惯上称洗脱剂, 用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择, 须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时, 当被分离物质为弱极性物质, 一般选用弱极性溶剂为洗脱剂; 被分离物质为强极性成分, 则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂( 如以硅藻土或滑石粉代替硅胶) , 则洗脱剂的极性亦须相应降低。在柱层操作时, 被分离样品在加样时可采用于法, 亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的, 以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。被分离物质的性质: 被分离的物质与吸附剂, 洗脱剂共同构成吸附层析中的三个要素, 彼此紧密相连。在指定的吸附剂与洗脱剂的条件下, 各个成分的分离情况,直接与被分离物质的结构与性质有关。对极性吸附剂而言, 成分的极性大, 吸附住强。当然, 中草药成分的整体分子观是重要的, 例如极性基团的数目愈多, 被吸附的住能就会更大些, 在同系物中碳原子数目少些, 被吸附也会强些。（一）定制个性化层析目前有大量不同来源的基于重组细胞的治疗方法，包括哺乳动物和非哺乳动物细胞、转基因牛奶，以及玉米和烟草类植物。原料的多样性要求层析工艺的个性化，以达到最高的效能。在某些情况下，药物纯化过程可能包含多达 6 个独立的层析步骤。庆幸的是，层析工程技术能帮助生产厂家根据具体应用定制适合的解决方案。对重组细胞治疗性药物的生产厂家而言，柱层析是下游生产过程中最常用、也是功能最强大的纯化方法，可采用包括亲和、离子交换、疏水作用以及金属螯合和凝胶过滤等在内的多种方法。随着要求高剂量和长期监管的药物数量不断增加，要以更快的速度增加产量以满足需求，这已为厂商带来巨大压力。通过扩大柱层析设备实现产能增加，目前生产中所使用的最大层析柱直径超过两米，而且在某些生产设备中可能还需要更大的层析柱。（二）层析柱装填自动化近年来，柱层析方法进行了许多方面的创新，尤其表现在自动化和过程控制领域中。用于流体传送和数据采集的新式精确控制器以及先进的处理系统都提高了柱层析的可靠性和重现性。自动化促进柱层析科学发展的一个领域是装填工序。将介质装填到层析柱中曾经被认为是一项需要熟练技巧、劳动强度大的生产活动，需要大量的操作培训才能保证一致性。但是，事实上，再纯熟的人工操作也会导致不定因素出现，并可能破坏批次生产的重复性。对药品的研发而言，重复性是非常关键的，若层析柱装填没有达到标准，产品纯度和产率就会受影响。最严重的结果是，该批生产会遭到破坏，导致成本大幅超支和生产停工。 层析柱装填的创新突破在于采用自动原位装填技术，即在装填过程中，通过独立的装填工作站，重悬介质并泵入组装好的柱内。原位装填有利于介质均匀装填到柱内，带来更好的分辨率和产率。它还确保了填充床更稳定，从而提高了批次间的一致性。 自动原位装填的另一优点是使整个过程更加符合卫生要求，因为操作员使用的是全封闭系统。所有装填和在位清洁工序无需拆卸柱头，消除了生产过程中的污染风险，并且在某些情况下还可防止操作员在处理生物危险性物品时受到伤害。目前，全球有超过 70%的新型柱层析操作设备采用原位装填系统。 柱层析最重要的发展之一是采用超声波技术监测柱内填料床的密度。尽管仍处于发展阶段，但以超声波辅助层析柱装填的应用迟早会商业化。其性能直接决定了它具有很大的潜力，可以为操作员判断层析柱的装填情况提供精确的工具。 超声波检测器对层析柱中的柱床压缩、流动组成和可溶成分的存在非常敏感。超声波可检测层析柱使用之前所记录和验证的实时组成数据，与来自装填工作站的动态反馈控制，能帮助确保在使用之前装填的一致性和准确性。（三）膜层析应用优势明显在许多应用中，膜层析在速度和工艺经济性方面表现出显著的优势。这项技术是采用多孔膜并在膜表面键合活性化学基团。膜层析具有一种孔结构，该结构可通过化学修饰键合带电的亲水聚合物。与常规的层析填料相比，开放的孔结构能为生物分子结合提供更多可供使用的表面积。对流孔促使物质传递快速而且有效，因为流体流动直接穿过膜孔，没有扩散流限制。 目前，膜层析已成功应用于生产规模中 DNA、蛋白质和病毒的捕获和去除。抛弃型装填好的层析膜柱，其去除杂质的速度是柱层析的 100倍。在柱层析中可供结合的表面积大多位于填料孔结构中，只有通过扩散力才能达到。大分子和病毒无法扩散到这些孔隙中，仅与填料外表面位点结合。与柱层析相比，无扩散流限制的膜层析在去除 DNA、病毒、质粒等方面高出 10100 倍。膜层析同样可以线性放大，这是生产厂家把产品从实验室规模放大到生产规模需要考虑的关键因素。 在捕获大分子方面，膜层析比柱层析更加有效，这在需要捕获小型质粒 DNA 或病毒的大规模生产中特别有优势。在基因治疗载体的纯化方面，膜层析日益被认为是一项可行性技术。带正电荷的 Q膜可有效结合大小为 23kb的质粒 DNA，同时膜层析的快速处理可以有效分离不稳定的大分子质粒。 膜层析可有效地去除模型病毒，比如猪细小病毒、甲型肝炎病毒、鼠白血病病毒和伪狂犬病病毒，去除效率为 104和 107。 在具有代表性的案例中，膜层析作为纯化后期精纯步骤获得了成功的实施。美国食品药品管理局（FDA）和欧盟药品委员会（EMEA）批准了采用膜层析来纯化 Aldurazyme，后者是美国生物制药公司 BioMarin 生产的一种酶替代治疗药物。当与基于膜的分子排阻超滤过程一起使用时，膜层析按 FDA 和 EMEA 规定，提供病毒去除的正交法。这使 BioMarin 公司免于进行 DNA分批检测，成为蛋白质药物生产中的一个里程碑。而且，除了每批生产平均节省 2000 美金以外，BioMarin 公司已经大大减少了生产批次失败的可能性，而失败的代价是极其高昂的。通过广泛采用与此类似的工艺，生物制药公司在单克隆抗体类和重组蛋白药物的生产中可节省数千万美元。 膜层析可做成抛弃型或重复使用型。它们的应用非常灵活，能经常作为精纯步骤添加到现有的生产环节中。由于膜层析可以一次性使用，不存在清洁或清洁检验的问题，大大加快了生产速度并且减少了劳动力和缓冲液成本。生物制药是以基因工程为基础的现代生物工程，即利用现代生物技术对DNA进行切割、连接、改造，生产出传统制药技术难以获得的生物药品。而现代生物技术是以基因为源头，基因工程和基因组工程为主导技术，与其他高技术相互交叉、渗透的高新技术。层析技术在生物中的应用实例例如：层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。在环境分析测试中，有时用纸层析法分离试样组分，它用于一些精度不高的分析，如3，4-苯并芘。但不如GC、HPLC应用普遍。 1.1 作用 洗去浮色。 1.2 原理 苏丹是弱酸性染料，易溶于体积分数为50%酒精。 1.3 应用 脂肪的鉴定实验。在该实验中，用苏丹对花生子叶薄片染色后，在薄片上滴12滴体积分数为50%的酒精溶液，可以洗去被染玻片标本上的苏丹染液浮色。 2 体积分数为95%的酒精 2.1 作用 解离； 析出提取含杂质较少的DNA。 2.2 原理 解离原理：用质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精11混合，能使组织中的细胞相互分离开来； 析出提取含杂质较少的DNA的原理：DNA不溶于酒精，尤其是体积分数为95%的冷冻酒精，而细胞中的某些物质可以溶解于酒精。 2.3 应用 观察植物细胞的有丝分裂； DNA的粗提取与鉴定。 3 体积分数为75%的酒精（一）国外生物制药现状目前正在临床开发中的创新生物技术产品：Genentech公司的抗血管内生长因子（VEGF），用于结肠和非小细胞肺癌（皿期临床试验）；Dendreon公司的树状细胞免疫制剂，用于前列腺癌m期临床试验）；GenvZme公司的树状细胞免疫制剂，用于乳场（1期临床试验）和黑色素瘤（二周期临床试验）；nxx纳一兰伯特公司的 ONYX015肿瘤抑制剂基因治疗，用于头颈癌（I期临床试验）；Genetech诺华Tanox Blosystems公司的抗 IgE人源化单克隆抗体，用于气喘（完成皿期临床试验）；Progenics公司的PRO542，用于HIV；罗氏公司的聚乙二醇化干扰素Pegasre，用于丙型肝炎mM临床试验）；NPS制药公司的重组人甲状旁腺激素，用于骨质疏松（II期临床试验）；CeltriX制药公司的免疫系统增强药Somatokine，用于严重烧伤（完成11期临床试验）；onnetics公司的弛缓素蛋白onxn，用于硬度病（Im期临床试验）11 Ah6g6nix公司的抗体ABXILB，用于牛皮癣（liP临床试验）PhRMA1988年第一次生物技术调查时仅有幻个临床试验中产品，而今年2月份进行调查时，已有76个生物技术产品被FDA批准。“美国生物技术产品的销售额1991年为58亿美元，1996年为101亿美元，2000年则达到5000亿美元。目前仅在美国从事生物技术开发研究的公司就有1140多家，西欧800多家，日本也有800多家。欧洲和日本也是生物技术产业发展较快的地区，其中日本生物技术产品的销售额，1991年仅为2648亿日元，1996年为6552亿日元，1998年则达到 10433亿日元。（二）国内生物制药现状治疗用粘质沙雷氏菌菌苗（商品名：雷舒宁）、外用重组人碱性成纤维细胞生长因子（商品名：扶济复）（2种，不同申请单位和不同规格）、外用冻干重组人表皮生长因子、口服重组B亚单位瘤体霍乱菌苗（肠溶胶囊）。徽安科公司：该公司是专门从事基因工程药物研制、开发和生产的高新技术企业，相继开发了“人a一干扰素单克隆抗体亲和层析胶”、“重组人干扰素db”、“重组人生长激素”等具有国际先进水平的生物高科技产品，填补了我国多项空白，井成功地实现了产业化，产生了很大的经济效益。目前公司正在研制的国家一类新药“基因重组葡激酶”已完成了全部新药研制工作，即将进人临床试验。山东东阿阿胶集团：从1995年开始进行生物药品研究，于1998年出色完成了属世界高精度技术产品的基因工程药物用于肾性贫血及多种贫血替代输血治疗的重组人红细胞生成素（简称EPO）。有关专家和权威人士一致认为，东阿阿胶集团公司研制的EPO在产品内在质量、生产技术等方面处国内领先地位，细胞表达量在国际上也名列前茅。随后公司以EPO为起点，先后投巨资开发了升高血小板的白介素一fi等3个基因工程药物新产品，从而在企业形成了一个高科技产品群。预计三年以 该公司将发展成为山东省规模最大的基因工程制药基地，届时至少有6个基因工程药物产品上市。云南大学生物技术有限公司：该公司运用单克隆生物技术生产的系列产品“安全期”避孕试纸、优生试纸、女性不孕检测试纸已正式大批量投放市场。并已有昆明高新技术产业开发区内投资建设了一条国内一流、日产8万条试纸的生产线。杭州生物制药：目前杭州市具有现代生物医药开发能力的医药企业已达15家，先后开发引进了20余项高科技产品，直接创造经济效益近10亿元。其中部分成果在国内处于领先水平。据有关人士介绍，今年杭州市还将有10多个新产品投人生产，预计可带来近10亿元的产值。深圳科兴生物制品有限公司：该公司投资7亿元在深圳兴建亚洲最大的生物工程产业化基地“北大生物谷”。“北大生物谷”是深圳市政府、北京大学、香港科技大学联合建立的产学研基地，主要项目有基因工程干扰素、基因工程胰岛素等。里湖科技股份有限公司：该公司主要投资基因芯片，公司将出资25亿元设立上海博星基因芯片有限责任公司。据悉，博星公司将充分利用现有的基因芯片技术和资源，进行基因表达港芯片、商品检测芯片、疾病诊断芯片、芯片实验室系统等基因芯片产品的生产、经营和技术开发、服务。浙江青荷生化股份有限公司：投资136亿元兴建“青荷生化”生物工程项目一利他乐肝宝囊、苦瓜系列产品开发。该项目属新建高科技生物工程，其产品可作为熊胆替代品进行系列开发。吉林东升药业有限公司：该公司建成投产后，主要生产生物制品、免疫制品、生化制品等。预计年销售额可实现12亿元，利税5000万元。与此同时，该公司还将陆续生产代表国际先进水平、填补国内空白的特异性抗轮状病毒免疫球蛋白