[自然科学]第一章制片方法及准备工作.ppt

植物显微技术计划学时 48讲课16实验32主要参考书 1 王灶安主编 植物显微技术 2 曾小鲁主编 实用生物学制片技术 3 郑国錩主编 生物显微技术 4 黄承芬 杜桂森编著 生物显微制片技术 5 郑若玄编著 实用细胞学技术 6 李和平主编 植物显微技术 内容简介植物制片的方法及准备工作石蜡法制作原理与方法其他制片方法植物显微化学制片半薄切片和超薄切片显微镜的主要光学部件及性能各类显微镜简介几种显微技术的应用显微摄影技术 研究论文题目 几种常绿植物 海桐 洋玉兰 冬青卫矛 桂花 黄杨等 叶片解剖结构研究几种药用植物 地黄 黄精 丹参 乌头 麦冬等 肉质根解剖结构特征及其增粗生长机理研究变态器官萝卜 胡萝卜 生姜 莲藕等解剖结构研究松属植物 雪松 白皮松 油松 华山松等 表皮特征及叶片解剖结构研究蔷薇科李属植物 日本樱花 晚樱 红叶李 碧桃 腺体结构特征研究 第一章植物制片的方法及准备工作植物制片的方法切片法用切片刀或刀片将各种组织切成薄片制成玻片标本的方法 1 徒手切片法2 石蜡切片法 切片厚度8 10 m 3 火棉胶切片法4 冰冻切片法5 滑走切片法6 半薄切片法 切片厚度1 2 m 7 超薄切片法 切片厚度50 60nm 非切片法将小形植物体或较大植物体的一部分或其组织 不用刀切成薄片而制成玻片标本的方法 1 整体装片法2 涂片法3 压片法4 平铺法5 离析法6 扫描电镜样品制备 制片前的准备工作制片用的主要设备1 显微镜 2 石蜡包埋工具恒温箱用于浸蜡 烤片及染色加温等 包埋箱 熔蜡箱 用于浸蜡 包埋 温度调节在60 3 切片工具旋转切片机滑走切片机冰冻切片机超薄切片机 1 旋转切片机 2 滑走切片机 2 滑走切片机 4 冰冻切片机 5 超薄切片机 6 切片刀及其附件 7 自动磨刀机 8 染色工具染色缸 立式染色缸 卧式染色缸 染色皿 9 载玻片和盖玻片载玻片的规格76 26mm 厚度 1 1 2mm 盖玻片的规格方形 18 18mm 20 20mm 22 22mm 24 24mm 长盖玻片 50 24mm或60 24mm 厚度 0 13 0 17mm 盖玻片规格 小型真空泵 10 真空泵用于抽出材料中的气体 11 电热温台 常用溶液的配制各级酒精浓度的配制 低浓度溶液的配制1 番红水溶液的配制 1g番红溶于100ml蒸馏水中 0 1 固绿酒精溶液的配制 0 1g固绿溶于100ml95 的酒精溶液中 第二章石蜡法制片原理与方法材料的选择 采集与分割取样前应注意的问题1 研究正常结构时 应选择健全而具有代表性的部位取材 采取病理材料时 除取其病变的部位外 还应从病变的中央部分向四周 连同正常组织一起采取 以利观察分析 2 采取标本前 要根据制片的要求 选择并配制固定液 取材后应立即投入固定液 以防组织自溶和腐败 3 切取材料时 刀必须锐利 动作要快但要仔细 切割时切勿拉锯式的来回切取 镊取时须轻夹轻放 尽量不损伤材料 4 材料尽可能新鲜 并切成所需的大小 这样有利于固定液的透入 5 取材时要详细记录日期 采集地点 标本名称 时期 取材部位 断面和固定液等 样品采集与分割1 叶 取样部位 取样部位 玉米叶 2 根 主根 侧根 不定根 一级侧根 二级侧根 根尖分区 根的初生构造 有丝分裂 核型分析 3 茎 4 花 花药的发育 孢原细胞 胚囊的发育 单核胚囊 第一次有丝分裂 二核胚囊 第二次有丝分裂 四核胚囊 八核胚囊 植物材料的分割 材料的固定固定的目的和作用1 防止组织自溶和腐败2 使细胞内的蛋白质 糖 脂肪等各种成分沉淀保存下来 从而保存细胞的各种组成成分 形态和结构 3 使细胞内不同的成分产生不同的折光率 造成光学上的差异 使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见 4 有的固定剂有助染作用 如醋酸 苦味酸 从而使细胞各部分易于染色 5 固定剂还兼有硬化作用 使柔软组织硬化而不易变形 有利于操作 固定液的选择选择固定液时 必须符合下列条件 1 能迅速杀死细胞 使细胞内的成分凝固或沉淀 从而使细胞的形态 结构和成分不发生变化 2 必须具有快的渗透速度 使组织内 外迅速固定 3 对组织细胞尽可能不发生收缩或膨胀现象 以及不产生人为的产物 4 能增加细胞内各结构的折光率 易于鉴别 5 能使组织变硬 适于切片 但又不致使材料变得太硬而松脆 6 是良好的保存剂 便于材料的保存 固定时的注意事项1 固定的材料越新鲜越好 2 材料与固定液的比例以1 20为准 3 根据材料的性质和制片的目的选择固定液 固定液一