动物组织中五氯酚残留量测定的标准操作程序气相色谱质谱法.docx

十、动物组织中五氯酚残留量测定的标准操作程序气相色谱质谱法1 适用范围及检出限本方法规定了猪肉、鸡肉等动物组织中五氯酚的气相色谱质谱仪测定。本方法适用于猪肉、鸡肉等动物组织中五氯酚含量的测定。当动物肌肉取5.0g，最终定容0.5mL 时,本方法五氯酚定量限为1.0g/kg，检出限为0.3g/kg。2 原理猪肉、鸡肉等动物组织加入内标后，经5%三氯乙酸沉淀，正己烷-乙酸乙酯溶液提取，SLC 柱净化，乙酸酐-吡啶溶液衍生成五氯苯乙酸酯，气相色谱-质谱法测定，内标法定量。3 试剂3.1 SLC 固相萃取柱：500mg/6mL（杭州福裕科技服务有限公司）。3.2 正己烷：色谱纯。3.3 乙酸乙酯：色谱纯。3.4 乙酸酐：分析纯。3.5 吡啶：分析纯。3.6 丙酮：色谱纯。3.7 无水硫酸钠：分析纯。3.8 五氯酚标准储备液（100g/mL，甲醇）：购自农业部环境保护科研监测所，编号GSB05-1850-2008，0-4冰箱放置，有效期1 年。3.9 五氯酚标准使用液（1.0g/mL）：取0.25mL 标准储备液用色谱纯丙酮稀释25mL，得到1.0g/mL 使用液，放置4冰箱。3.10 2，4-二溴酚内标液(10.0g/mL)： 称取2，4-二溴酚标准品0.05g，用色谱纯丙酮溶解定容到50mL，得到1.0mg/mL 内标储备液，经丙酮逐级稀释至浓度10.0g/mL，放置4冰箱。3.11 提取液:乙酸乙酯：正己烷=1：1（V:V）。3.12 衍生提取液: 乙酸乙酯：正己烷=1：4（V:V）。3.13 衍生化试剂:乙酸酐：吡啶=1：1（V:V）现配现用。3.14 0.2mol/L 碳酸钾溶液:称取2.76g 碳酸钾溶于重蒸水,并定容于100mL。4 仪器与耗材4.1 气相色谱质谱仪。4.2 匀浆机（IKA）。4.3 氮吹仪。4.4 10 mL 具塞玻璃刻度试管、离心管。4.5 固相萃取仪。4.6 冷冻离心机：最大转速12000rpm 以上。5 色质谱条件5.1 DB-5MS 毛细管色谱柱：30 m0.25 mm（内径）0.25 m（膜厚）。5.2 进样口温度：230。5.3 柱温：初温80，保持2 min，以10min 升至250，290后运行4min。5.4 载气：氦气，纯度99.999，流速为1.0 mL/min。5.5 进样量：1L。5.6 电离方式：EI 源，70eV。5.7 离子源温度：230。5.8 进样方式：不分流进样。5.9 五氯苯乙酸酯标准保留时间及监测离子见附录表1，总离子流图见图1。6 样品处理6.1 样品采集和保存采集猪肉、鸡肉等动物组织样品（肥瘦各半），用绞肉机绞碎后装塑料瓶内后-20冻藏，检测前解冻。6.2 提取称取5.00g 样品入离心管内，加入30 l 10.0g/mL 2，4-二溴酚内标液、20 mL 5%三氯乙酸溶液，匀浆1 min,再加入10 mL 提取液，斡旋提取2 min，然后012000 rpm 离心4 min，吸出上层有机相入具塞试管内，在60水浴内氮气吹干，加入2mL 乙腈超声溶解，3000 rpm 离心4 min，乙腈相待净化。6.3 净化取SLC 柱（500 mg/6 mL），加0.2 g 无水硫酸钠,用4 mL 乙腈淋洗活化柱子，然后将上述乙腈相加到柱子上，并收集，再用4 mL 乙腈洗脱收集，洗脱液60氮气吹干, 残余物待衍生。6.4 衍生上述残余物中加1.0 mL 衍生提取液溶解，再加衍生液0.1 mL，密封，于60水浴反应15 min，取出冷却，加碳酸钾溶液2.0mL，充分混匀，静置分层，取有机相，供气相色谱质谱测定。7 计算取10L、25L、50L、100L、200L 1.0mg/L1.0g/mL 五氯酚标准使用液，分别加入30 l 10.0 g/mL 2，4-二溴酚内标液、1.0 mL 衍生提取液、0.1 mL 衍生液，密封，同样品一起衍生，获得10g/L - 200g/L 五氯酚标准曲线。根据标准曲线计算样品中五氯酚的含量C。样品中五氯酚含量按如下公式计算，结果保留三位有效数字。X=C *1/m式中：X 实际样品中五氯酚含量，g/kg；转化成五氯酚钠乘以系数1.08；C 仪器测定样品中五氯酚含量，g/L；m 取样量，g8 数据处理根据五氯苯乙酸酯保留时间及碎片离子进行定性、定量分析。图2 五氯苯乙酸酯质量色谱图9 分析方法质量控制9.1 质谱定性按照欧盟规定，定量离子和定性离子比例在要求范围