DNA的粗提取和分离.ppt

讨论2 真核生物的遗传物质存在于哪里 讨论3 怎样才能将真核细胞内的遗传物质分离来 讨论1 构成生物体的遗传物质是什么 专题5DNA和蛋白质技术 课题1DNA的粗提取与鉴定 课题目标 1 尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取 2 了解DNA的物理化学性质3 理解DNA粗提取以及DNA鉴定的原理 课题重点与难点 课题重点 DNA的粗提取与鉴定方法课题难点 DNA的粗提取与鉴定方法 一 基础知识 基本思路 用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 1 DNA的溶解性 1 DNA在氯化钠溶液中的溶解性随着氯化钠的浓度的变化如何改变的 提取生物大分子的方法 DNA的性质 1 DNA在0 14mol L的氯化钠溶液中的溶解度最低 利用这一原理 可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出 2 DNA不溶于酒精 细胞中某些蛋白质则溶于酒精 DNA的性质 1 DNA的溶解性 2 对酶 高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质 但对DNA没有影响 大多数蛋白质不能忍受60 80度的高温 而DNA在80度以上才会变性 洗涤剂能够瓦解细胞膜 但对DNA没有影响 3 DNA分子的鉴定 沸水浴条件下 加入二苯胺试剂 用玻棒搅拌使DNA溶解 溶液出现浅蓝色 二 实验设计 一 实验材料的选取 用什么材料提取DNA 为什么 教材P55提供的材料 提示 1 材料要容易得到2 材料中DNA含量必须丰富方法 预实验材料对比 一 实验材料的选取 鸡血细胞做实验材料 原因 1 鸡血细胞核DNA含量丰富 材料易得2 鸡血细胞极易吸水胀破3 植物细胞外有细胞壁 其他动物细胞制取DNA有时需匀浆和离心 对设备要求较高 操作繁琐 历时较长 二 破碎细胞 获取含DNA的滤液 1 若是动物细胞 如何获取DNA滤液 旁栏思考 1 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂 答 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体 水分可以大量进入血细胞内 使血细胞胀裂 再加上搅拌的机械作用 就加速了鸡血细胞的破裂 细胞膜和核膜的破裂 从而释放出DNA 2 若是植物细胞 如何获取DNA滤液 旁栏思考 2 加入洗涤剂和食盐的作用分别是 3 如果研磨不充分 会对实验结果产生什么影响 洗涤剂是一些离子去污剂 能溶解细胞膜 有利于DNA释放 食盐有利于DNA溶解 会使细胞核内DNA释放不完全 提取DNA量变少 影响实验结果 导致看不到丝状沉淀物 用二苯胺鉴定不显示蓝色等 三 去除滤液中的杂质 滤液中的杂质可能有哪些细胞成分 可能有核蛋白 多糖和RNA等杂质 用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质 用低盐浓度使DNA析出 能除去在低盐溶液中的杂质 因此 反复溶解与析出DNA 就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质 为什么反复地溶解与析出DNA 能够除去杂质 注意 两种食盐溶液的浓度和作用 四 DNA的析出与鉴定 析出 滤液 同体积95 冷却酒精白色丝状物鉴定 如何鉴定 对比反应是为了证明什么 原理 三 操作提示 1 以血液为实验材料 每100ml加入3g柠檬酸钠 作为抗凝剂 2 加入酒精和用玻璃棒搅拌时 动作要轻缓 以免加剧DNA分子的断裂 导致DNA分子不能形成絮状沉淀 3 二苯胺试剂要现配现用 否则会影响鉴定的效果 加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 加速血细胞破裂 溶解DNA 使2mol L的NaCl溶液稀释至0 14mol L使得DNA最大限度地析出 使含DNA的黏稠物被留在纱布上 使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 除去含DNA的滤液中的杂质 提取DNA A出现蓝色B无变化 答 整个实验共 两次蒸馏水 三次过滤 两次析出 两次蒸馏水 第一次 细胞吸水胀破第一步第二次 使DNA黏稠物析出第三步 此实验过程中有几次使用蒸馏水 几次过滤 几次析出 分别在哪一步 讨论 过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关 第二次要用其滤出的黏稠物有关 所以要使用多层纱布 第一次和第三次均要用其滤液 使用的纱布为1 2层 三次过滤 第一次 DNA存在于滤液里第一步第二次 DNA被留在纱布上第四步第三次 DNA存在于滤液里第六步 两次析出 第一次 用0 14mol L的NaCI溶液 第三步 第二次 用冷却的95 的酒精 第七步 2 实验中NaCl的物质的量浓度为2mol L和0 14mol L对DNA有何影响 1 在DNA的粗提取实验过程中 两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是 A 稀释血液 冲洗样品B 使血细胞破裂 降低NaCl浓度使DNA析出C 使血细胞破裂 增大DNA溶解量D 使血细胞破裂 提取含杂质较少的DNA 答 B 答 前者是溶解DNA 后者是使DNA析出 3 DNA遇二苯胺 沸水浴 会染成 A 砖红色