分光光度法测定多巴胺-王怀友(精).doc

分光光度法测定多巴胺王怀友 X , 孙 悦 , 唐 波(山东师范大学化学系 , 济南 250014摘 要 :根据多巴胺与亚硝酸钠在 pH 5. 90时的反应产物在 300nm 处有最大吸 收 , 建立了测定多巴胺注射液中多巴胺浓度的分光光度法 。 多巴胺质量浓度在 010L g P mL 范围内与吸光度之间遵从朗伯比尔定律 , 表观摩尔吸光系数为 1. 85 104L #mol -1#cm -1, 检测限为 0. 1L g P mL 。 试验了 pH 、 放置时间 、 加热时间 、 干 扰离子等对测定的影响 。 本法可用于注射液中多巴胺含量的测定 , 与药典规定 方法对照 , 结果吻合 。关键词 :分光光度法 ; 多巴胺 ; 亚硝酸钠 ; 多巴胺注射液中图分类号 :O657132文献标识码 :A 文章编号 :1000-0720(2003 01-0045-03多巴胺是一种神经传递物质 , 在体内是合成去 甲肾上腺素的直接前体 , 具有重要的生理作用。作 为药物 , 能增强心肌收缩力 , 对内脏血管有扩张作 用 , 增加血流量 , 有利于改善休克时重要脏器的血 液供应 , 适用于感染性、 心源性、 失血性休克以及心 脏停搏时起搏升压。显然 , 建立灵敏简便的测定方 法 , 具有十分重要的意义。现已报道的测定方法有 荧光 光 度 法 1, 色 谱 分 析 法 2和 电 化 学 分析 方 法 3。龙云等 4研究了多巴胺与四氯苯醌之间的 荷移反应 , 用分光光度法 测定针剂中的多巴 胺 , E 值仅为 1. 63103; 文献 5从甜马铃薯中提取多酚 氧化酶 , 将多巴胺氧化为相应多巴胺色素 , 建立了 测定药剂中多巴胺的分光光度法 , 但操作繁杂。本 研究依据多巴胺与亚硝酸钠在水介质中即可生成 有较高吸光度产物的反应 , 建立了测定多巴胺注射 液中多巴胺含量的分光光度法。该法操作简便 , 灵 敏迅速 , 有宽的线性范围 , 与英国药典规定的高效 液相色谱法 6对照 , 结果吻合。1实验部分1. 1仪器UV -265紫外可见分光光度计 (日本岛津 ; pHS -3C 型酸度计 (上海雷磁仪器厂 。多巴胺标准储备液 100L g P mL(化学对照品 , 中 国药品生物 制品检定 所 , 准 确称 取 0. 01g 多 巴 胺 , 用二次水稀释至 100mL, 4e 储存 , 用时稀释为 40L g P m L 的工 作液。 Na NO 2(10g P L 水溶液 , 避光 保存。 HAc -Na Ac 缓冲 溶液 (pH 5. 90 , 0. 1mol P L HAc 和 0. 1mol P L NaAc 以 1B 16的体积比混合。 所用试剂均为分析纯 , 实验用水均为二次水。 1. 2实验方法准确移取 40L g P mL 的多 巴胺标准液 2mL 于 10m L 比色管中 , 加 Na NO 2溶液 2mL, HAc -Na Ac 缓 冲溶液 5mL, 摇匀 , 置于沸水浴中加热 3. 5min 。取 出用流水冷却至室温 , 用水稀释至刻度 , 摇匀。以 试剂空白为参比 , 用 1cm 比色皿在 300nm 处测量 其吸光度。2结果与讨论2. 1吸收光谱按实验方法配制溶液后 , 在分光光度计上 , 以 试剂空白为参比扫描溶液的吸光度 , 得到吸收光谱 如图 1所示。由图 可见 , 反应 产物 K max =300nm 。 NaNO 2的 K max 为 356nm; 多巴胺的 K max 为 279nm 。 2. 2反应影响因素研究2. 2. 1加热时间影响 按实验方法 , 测定 6L g P mLX 收稿日期 :2001-12-20; 修订日期 :2002-01-09基金项目 :国家自 然科学基金 (29975016 及山东自然科学基金 (Z2000B03 作者简介 :王怀友 (1952- , 男 , 副教授多巴胺在加热不同时间后的吸光度 , 结果表明加热 时间为 34min 时 , 吸光度最大。所以选择加热 时间为 3. 5min 。2. 2. 2 pH 的影响 按实验方法测量不同 pH 值时 溶液的吸光度 , 结果如图 2所示。 图 1 吸收曲线 Fig . 1 Absorptioncurve 图 2 p H 影响 Fig . 2 Effect of pH (Q 多 巴胺 =2L g P mL由图可见 , pH 5. 9时 , 溶液的吸光度最大。所 以选择 pH 5. 9的 HAc -Na Ac 缓冲溶液 , 但要严格控 制 pH 值 , 每次加入缓冲溶液 510mL 。2. 2. 3 试剂用量影响 按照实验方法 , 保持多巴 胺浓度不变 , 逐步增大 NaNO 2(10g P L 的加入量 , 测 定溶液的吸光度。结果发现 , 随着 NaNO 2加入量 的增大 , 溶液的吸光 度逐渐增大 ; 当加入量 1. 5mL 时 , 溶液的吸光度基本不变 , 所以确定最佳加入 量为 2mL 。2. 2. 4 试剂加入顺序影响 按照实验方法 , 依照 不同顺序加入试剂 , 测量溶液的吸光度 , 结果表明 试剂加入的最佳顺序为先加 Na NO 2后加 HAc -NaAc 缓冲溶液。2. 2. 5 产物的稳定性 按照实验方法 , 测定放置 不同时间后溶液的吸光度 , 结果表明 , 放置时间在 90min 之内溶液的 吸光度基本 不变 , 产物比较 稳 定。2. 3 选择性按照实验方法 , 研究 4L g P mL 多巴胺水溶液中 各种外来常见离子对体系的影响 , 控制测定误差在 ? 5%以内 , 下列离子的允许存在量 (L g P m L 为 :K+(30、 Mg 2+(25 、 Cu 2+(25 、 Pb 2+(10 、 Cl -(60 、 Ca 2+(10 、 Zn 2+(100 、 HPO 42-(10 、 PO 43-(6 、 SO 42-(300 。2. 4 方法特性2. 4. 1 标准曲线 按实验方法配制多巴胺的标准 系列 , 分别测定其吸光度 , 实验表明多巴胺的浓度 在 010L g P mL 范围内与吸光度呈线性关系 , 线性 回归方程为 :A =010436c +0100591, r =0. 9978。 2. 4. 2 检测限 平行测定试剂空白的吸光度 , 按照空白加 3倍标准偏差所对应的浓度 7, 检测限 为 0. 1L g P mL 。2. 4. 3 精密度 按照实验方法将同一 样品测定 10次 , 多巴胺的平均质量浓度为 2. 0L g P mL, 相对 标准偏差为 5. 3%。2. 5 样品分析2. 5. 1 多巴胺注射液样品分析 多巴胺的注射液用二次水稀释至不 同浓度 , 作 为样品溶液进 行检 测。结果见表 1。从表可看出 , 用分光光度法测定所得结果与用 HPLC 法相符 , 在置信度等于 95%, 用 Cochran 8检验两种方法间不存在显著性差异。表 1 样品的测定Tab . 1 Analysis results of dopamine in dopam ine injection 样品编号本 法测定值 Q (多巴 胺 P (mg P mL药典法测定值 Q (多巴胺 P (mg P mL10. 1030. 10820. 4480. 43430. 8680. 8422. 5. 2 回收率 按实验方法 , 测定多巴胺注射液 的回收率 , 结果如表 2所示。表 2回收率的测定 Tab . 2Recovery of dopamine样品 样品质量浓度Q (多巴胺 P (L g P mL加入标准量Q (多巴胺 P (L g P mL测得值Q (多巴胺 P (L g P m L回收率 P %12. 374. 006. 1193. 3 21. 032. 003. 24110. 5 34. 482. 006. 4196. 53结论本文建立了用分光光度法测定多巴胺注射液 中多巴胺的方法 , 该法操作简单 , 检出限低 , 线性范 围较宽。参考文献1汪 丛莹 , 庞 志功 , 汪 宝 琪等 . 分 析 化学 , 1999, 27(1 : 1012Ragab G H, Nohta H, Zaitsu K. Anal Chi m Acta, 2000, 403:155.3Hua L, Tan S N. Anal Chim Acta, 2000, 403:179 4龙 云 , 李东辉 , 冯建章 . 分析化学 , 1997, 25(8 :916 5Vieira I C da, Fatibello -Filho O. T alanta. 1998, 46:559 6Bri tish Pharmacopoeia Commission. Vol. 1The British Phar -macopoeia. London, HMSO, 1993. 19117ACS Committee on Environ mental improvement, D MDougall and etc. Anal. chem. 1980, 52:2242.8郑用熙 . 分析化学中 的数理 统计方 法 . 北 京 :科学出 版社 , 1986. 122Spectrophotometric determination of dopamine W ANG Huai -you , SU N Yue and TANG Bo (Department of Chemistry, Shangdong Normal University, Jinan 250014 , Fenxi Shiyanshi, 2003, 22(1 :4547 Abstract :A spectrophotometric method was developed for the determination of dopamine. The method was based on the reaction of dopamine with sodium nitrite in aqueous medium, and the product had a maximum ab -sorption at 300nm, with E 300=1. 85104l #mol -1# cm -1. Effec ts of pH, heating time, standing time and foreign ions were tested. The absorbance for dopamine from 0to 10L g P mL obeyed Beer c s law. The linear re -gression equation of the calibration graph was A = 010436c +0100591, with a correlation coefficient of 019978. The detection limit of t