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婴幼儿食品和乳品中维生素B1的测定Determination of vitaminB1 in foods for infants and young children凌笑琼（赣南师范学院，赣州）Xiaoqiong Ling(GanNan Normal University ,GanZhou, China)摘要：建立了快速测定婴幼儿配方奶粉中维生素B1的高效液相色谱测定法。采用C18(5m，250 mm 4.6 mm)反相色谱柱，以浓度为005molL乙酸钠水溶液与甲醇比为65：35(体积比，调pH值为45)为流动相，流速为10mLmin，进样量20L 。本方法中维生素B1线性范围为010.0gmL。加标回收率101.4-115.6，相对标准偏差为0.28。该方法简便、快速、灵敏度高，结果与国家标准测定方法比较无显著性差异。关键字：维生素B1,婴幼儿配方食品和乳粉Abstract：A method for determination of vitaminB1 in milk powder and formula foods for infant and young children by HPLC was reported。In this method Vitamin B1 was separated by the column of C18（5 mm，250 mm 4.6 mm i.d）using 0.05molL acetic sodium ：methnaol (65：35，VV，pH45) as mobile phaseAnd the flow is 1.0mLmin , the injection volume is 20L，The linear range of vitamin B1 was 010.0gmLOverall recoveries were between 101.4% and 115.6and the relative standard deviation was 028The method was proved to be sensitive，accurate, convenient and quickThe results were obtained checked very well with that by standard method Keywords：HPLC；Vitamin B1；Milk powder and formula foods for infant and young children.1.引言1.1概述（概述中还应包含B1的性质等，并且要有相关的文献说明，格式参照发给你的论文）维生素B1是人体不可缺少的营养元素之一，它能够增强肠胃的蠕动，进食物的消化吸收；并且有“大脑维生素”之称，对脑神经的传递有重要作用。维生素B1主要存在于种子的外皮和胚芽中，如米糠和麸皮中含量很丰富，在酵母菌中含量也极丰富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也较丰富。所用的维生素B1都是化学合成的产品。在体内，维生素B1以辅酶形式参与糖的分解代谢，有保护神经系统的作用；还具有重要的生理作用和营养保健功能，如促进成长；帮助消化，特别是碳水化合物的消化；改善精神状况；维持神经组织、肌肉、心脏活动的正常；减轻晕机、晕船；可缓解有关牙科手术后的痛苦；晚间入睡前服用1至2片，有驱蚊作用；有助于对带状疱疹（herpes zoster）的治疗。维生素B1缺乏常由于摄入不足，需要量增高和吸收利用障碍。肝损害、饮酒也可引起。长期透析的肾病者、完全胃肠外营养的病人以及长期慢性发热病人都可发生。初期症状，有疲乏、淡漠、食欲差、恶心、忧郁、急躁、沮丧、腿麻林和心电图异常。可引起多种神经炎症，如脚气病。维生素B1缺乏所引起的多发性神经炎，患者的周围神经末梢有发炎和退化现象，并伴有四肢麻木、肌肉萎缩、心力衰竭、下肢水肿等症状。1819世纪脚气病在中国、日本，尤其在东南亚一带广为流行，当时每年约有几十万人死于脚气病。中国古代医书中早有治疗脚气病的记载，中国名医孙思邈已知用谷皮治疗脚气病。在现代医学上，维生素B1制剂治疗脚气病和多种神经炎症有显著疗效。1.2食品中维生素B1的不同测定方法的比较与选用1.2.1 食品前处理方法的比较和选用（前处理的目的？可以有那些方法？优缺点？并要有相关文献说明）婴儿配方奶粉中维生素B1的国标测定方法 (GBT541311-2010)中样品需要在稀盐酸环境水解 ，酶解过夜 ，费时 ，回收率偏低。婴幼儿食品和乳品中维生素B6的国标测定方法(GBT541313-2010)中的样品处理方法经热水水解后，调节PH 沉淀蛋白质得到处理液。此法处理方便简单，效果能比上国标处理。本研究采用热水水解，再调节PH来得到前处理液。1.2.2食品中维生素B1测定方法的比较和选用（每一种测定方法的优缺点？多查文献！）关于维生素B1的测定，婴幼儿食品中维生素的测定国标法（GBT5413112010）只规定了荧光分析法，目前测定维生素B1的方法还有分光光度法1、化学发光法2、电化学法3、薄层色谱法4，然而这些方法只能测定简单的样品，对于复杂的干扰比较多的样品无法准确测定。高相液相色谱法测定维生素B1，是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离，分离过程是一个分配平衡过程。高效液相法因其样品前处理简单、样品用量少、分离速度快、可一次性分析多种水溶性维生素而逐渐成为检测维生素B1的常用分析方法，具有简便、快速、分辨率高、检测限低的特点。本研究选用最新高效，分辨率高，检出限低的高相液相色谱法（HPLC）。 1.3本论文工作目的和意义从国内外的研究资料可见，维生素B1具有重要的生理作用和营养保健功能。人体自身无法合成维生素B1，必须通过食物或药物来摄取必须的维生素，一旦缺乏就会造成多种不良后果，因此对制剂或食物中维生素B1的含量测定具有重要意义。本文建立了快速可靠测定婴幼儿食品和乳品中维生素B1含量的方法，通过检测食品中维生素B1含量，对食品中维生素B1含量的检测提供方法参考，为食品营养质量提供指导，具有一定现实意义。2.实验部分2. 1 仪器与试剂（还有很多辅助仪器？试剂？）高效液相色谱仪Agilent 1200，配在线脱气机、四员泵、自动进样器、柱温箱。培养箱、离心机。C18反相色谱柱（5m,250mm4.6mm）。甲醇为色谱纯，其余试剂除特殊指明外均为分析纯。2. 2 标准溶液标准储备液（500g/mL）：称取相当于50mg（精确至0.1mg）的维生素B1的标准品，用0.01mol/L盐酸溶解并定容至100mL。置于04冰箱中保存。标准工作液：用标准储备液稀释成标准系列，浓度分别为0g/mL、.05g/mL、0.10g/mL、0.2g/mL、0.5g/mL、1.0g/mL。2. 2实验方法2.2.13 样品处理含淀粉的试样称取混合均匀固体试样约1.6g（精确至0.0001 g，如有必要，将试样放入捣碎机中捣碎；试样中含维生素B1 5g以上），加入约25 mL 45 50 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g（精确至0.0001 g）于150 mL锥形瓶中。加入约0.2g淀粉酶，混匀后向锥形瓶中充氮，盖上瓶塞，置50 60 培养箱内约30 min。取出冷却至室温。 不含淀粉的试样称取混合均匀固体试样约5.0 g（精确至0.0001 g），加入约25 mL 45 50 的水，或称取混合均匀液体试样约20.0 g（精确至0.0001 g）于150 mL 锥形瓶中。混匀并充分溶解，静置5 min10 min，冷却至室温。蛋白质沉淀：用盐酸溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）调节试样溶液的pH值至1.7 0.1，放置约1 min。再用氢氧化钠溶液（5.0 mol/L，0.1 mol/L）调节试样溶液的pH值至4.5 0.1。 定容：将试样溶液转移至100 mL容量瓶中，用水冲洗锥形瓶。洗液合并于100mL容量瓶中，用水定容至100 mL。提取：把上述容量瓶放入超声波振荡器中，超声振荡约10 min。 过滤：另取50 mL三角瓶，上面放入三角漏斗和滤纸，把超声波振荡的试样溶液倒入其中，自然过滤。收集滤液备用。试液衍生化 ：取上述滤液 10.00 mL于 25 mL具塞比色管中，加入5 mL 碱性铁氰化钾（将5 mL铁氰化钾溶液（20 g/L）与200 mL氢氧化钠溶液（100 g/L）混合），充分混匀后，加 10.00 mL 正丁醇（或异丁醇），强烈振荡后静置约10 min，充分分层，吸取正丁醇（或异丁醇）相（上层）于4000转/分钟6000转/分钟离心5 min，供进样用。 2. 2.24 样品测定色谱条件C18反相色谱柱（粒径 5m，250 mm 4.6 mm），检测波长：激发波长 375 nm，发射波长 435 nm。 以0.05 mol/L 乙酸钠溶液甲醇= 65+35为流动相，流速为1.00 mL/min，进样量为20L.2.2.35 分析结果的表述维生素B1含量按计算：X=式中：X试样中维生素A的含量，单位为微克每克（g/ g）；Cs 从标准曲线得到的维生素A 待测液的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V试样稀释的体积，单位为毫升（ml）；m试样的质量，单位为克（g）。3 结果与讨论（先写条件实验的比较和结果！）3. 1 线性范围用标准储备液配置一系列浓度标液，将各种浓度的溶液分别取20 L注入，液相色谱仪中分析，记录色谱图，以溶液浓度为x，以峰面积为Y，进行线性回归，得线性回归方程为Y=97.826x+5.2552相关系数R=0.9997。结果表明，维生素B。在0.0010.00gmL的浓度范围内，溶液浓度与峰面积呈良好的线性关系。理论浓度峰面积1.00ug/ml105.02. 00ug/ml207.25. 00 ug/ml491.710. 00ug/ml平头峰3. 2标回收率实验使用某初生婴儿配方奶粉做加标回收，按比例约1:1添加标准储备液，都为5mL，进行3次测定。样品中加标回收率为101.4%115.6%,平均相对偏差为2.62%（n=3）。事项样品1样品2标加1标加2称样量1.64561.65501.62101.6213标加量（20ug/ml）-5ml5ml峰面积63.564.8142.7137.8浓度(ug/ml)0.45180.46101.01240.9777含量(ug/g)27.4627.8662.4560.30回收率-115.61%108.66%3. 3 精密度试验溶液20 L，注入液相色谱中，平行测定6次，记录色谱图，结果对照品峰面积的RSD为0.28，(n=6)，表明仪器精密度良好。3. 4重复性试验取同一供试品，按照上述供试品溶液制备方法处理6份，分别进样测定，得峰面积的RSD为0.28(n-6)。表明方法的重复性良好。次数123456峰面积105.9105.7106.1106.2105.4106.03. 5稳定性试验取同一供试品溶液，分别与0，1，2，3，4，5，6，7h述方法进行测定，结果维生素B。的峰面积的RSD为0.78(n=7)。表明供试品溶液在7h内稳定。事项0h0.5h1h2h3h4h5h6h7h峰面积104.1104.5104.4105.0105.7106.1105.9105.9106.13. 6 样品的测定（这部分是方法内容！）取盐酸硫胺素和样品按照2. 3中的方法对样品进行处理，按照2. 4中的色谱条件进样测定，得谱图： 维生素B1标准 维生素B1样品还有样品检测结果！4结论本研究采用高效液相色谱(high performance liquid chromatographic,HPLC) 是以液 体作为流动相,并采用颗粒极细的高效固定相的柱色谱分离技术。其特点是分析 速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单。高效液相色谱对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的限制,因而弥补了气相色谱法的不足。参考文献1刘红河，黎源倩，等CCD一二极管阵列分光光度法同时测定食品中的维生素B1和维生素B2 J中国食品卫生杂志，2003，15(6)：5085102汪敬武，谢志鹏，杨伟平，等流动注射化学发光法测定维生素B1J药物分析杂志，2005，25(8)：9969983曹志广，丁祥欢，叶建农，等维生素片中水溶性维生素的毛细管电泳一电化学法测定J分析测试学报，1999，18(5)：57594邓尚龙，胡珊梅，张启国，等薄层一紫外法测定再生人胶囊中VitB1的含量叨海峡药学，2001，13(3)：4950.5郭润勤，等复合维生素泛酸钙口服溶液中维生素B和维生素B6的含量测定J中国药师，2009，12(1)：66686潘正斐，李艳，等HPLC法测定维生素B1片含量J