杂质分析、质量标准依据.doc

3.2.P.5.5 杂质分析3.2.P.5.5.1 制剂中的有关物质杂质的化学名称、结构式、来源、控制限度见表3.2.P.5.5.1.1表3.2.P.5.5.1.1 杂质分析情况杂质名称杂质结构杂质来源杂质控制限度是否定入质量标准左氧氟沙星杂质A合成工艺杂质不得过0.3%定入原料质量标准不得过0.3%定入制剂质量标准左氧氟沙星杂质B降解产物（去羧基）无控制限度未定入质量标准左氧氟沙星杂质C降解产物（去氟）无控制限度未定入质量标准左氧氟沙星杂质D合成工艺杂质无控制限度未定入质量标准左氧氟沙星杂质E降解产物（去甲基）不得过0.2%定入原料质量标准不得过0.3%定入制剂质量标准左氧氟沙星杂质F降解产物（氮氧化）无控制限度未定入质量标准氧氟沙星合成工艺杂质不得过1.0%定入原料质量标准无控制限度未定入制剂质量标准3.2.P.5.5.2 制剂特有的有关物质特征左氧氟沙星杂质A、B、C、D、E、F以及氧氟沙星共7个已知杂质，依次分别为去哌嗪环、去羧基、去氟、氟取代位置不同、去甲基以及氮氧化的化合物。其中氧氟沙星杂质A、D为合成工艺产生的杂质，英国药典氧氟沙星原料药采用TLC法控制杂质A，采用HPLC法控制其他已知和未知杂质。中国药典采用杂质A对照，定量控制原料和制剂中的杂质A，杂质控制限度：不得过0.3%。氧氟沙星为左旋异构体与右旋异构体组成的消旋混合物，左氧氟沙星为氧氟沙星的左旋异构体，在其合成过程中必然会产生光学异构体副产物。氧氟沙星的右旋异构体几乎无抑菌作用，且毒性大于左旋异构体，因此多数左氧氟沙星质量标准中均对光学杂质进行了严格控制，左氧氟沙星光学杂质检测采用HPLC法，使用硫酸铜L异亮氨酸溶液等手性试剂与有机相的混合溶液为流动相，十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，中国药典2010年版盐酸左氧氟沙星原料光学杂质的含量控制在10以内。美国药典重点关注了杂质desfluoroofloxacin，日本药局方重点关注了ofloxacin demethyl substance，均与中国药典的杂质E相同，是氧氟沙星的去甲基化合物，该化合物为氧氟沙星的主要降解产物，光照下极易产生。美国药典对照品目录中收载了左氧氟沙星的两个已知杂质左氧氟沙星相关物质A和左氧氟沙星相关物质B的结构，分别为中国药典2010年版盐酸左氧氟沙星中杂质E、A。3.2.P.5.5.3 制剂特有的有关物质的分析有关物质专属性（空白辅料破坏性试验）结果发现：空白辅料在酸(01molL 盐酸)、碱（01molL NaOH)、高温、3的H2O2、光照等条件下均不产生杂质。（结果见表3.2.P.5.3.1.3）（相关图谱见图谱集第1页第14页）有关物质专属性（样品破坏性试验）结果发现：样品在酸(01molL 盐酸)、碱（01molL NaOH)、高温、3的H2O2等条件下均未产生超过0.1%的单一杂质。光照条件下可产生两个明显的降解产物峰保留时间分别为：23.025（0.78%）、25.114（0.20%），保留时间25.114的峰与杂质E对照的保留时间一致，保留时间23.025的峰根据文件报道以及从结构来推测在色谱上的流出顺序应为杂质F，将进一步监控生产和留样过程中这两个杂质情况。（结果见表3.2.P.5.3.1.4）（相关图谱见图谱集第1页第14页）稳定性影响因素试验、稳定性加速试验（6个月）、稳定性长期试验（6个月）数据表明：在已放置的时间内，均未产生超过0.1%的单一杂质，表明本产品经压片、包衣后对盐酸左氧氟沙星的稳定性有明显的改善。3.2.P.5.6 质量标准制定依据本品为仿制药，质量标准参照按中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准制定，质量标准中对有关物质检查项作了修改，其余与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。通过与对照药品的比较研究，进一步确定本品种（盐酸左氧氟沙星片、0.5g/片）各检验项目的方法以及各检验项目的限度。3.2.P.5.6.1 性状本品用白色包衣液包薄膜衣，外观为类白色薄膜衣片；由于制片所用的辅料均为类白色，原料为类白色至淡黄色，故除去包衣后显类白色至淡黄色。表 3.2.P.5.6.1.1 性状 批号项目20110315-120110315-220110315-3江苏恒瑞医药股份（101011）性状类白色薄膜衣片，除去包衣后显类白色。类白色薄膜衣片，除去包衣后显类白色。类白色薄膜衣片，除去包衣后显类白色。类白色薄膜衣片，除去包衣后显类白色。申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.2 鉴别(1)鉴别(1)为化学显色鉴别反应。取本品细粉适量（约相当于左氧氟沙星10mg），置干燥具塞试管中，加丙二酸约10mg与醋酐0.5ml，在水浴中加热510分钟，溶液显红棕色。表 3.2.P.5.6.2.1 鉴别(1) 批号项目20110315-120110315-220110315-3空白辅料鉴别(1)符合规定（显红棕色）符合规定（显红棕色）符合规定（显红棕色）不显红棕色申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.3 鉴别(2) （相关图谱见图谱集第206页第209页）鉴别(2)为HPLC法。色谱柱：phenomenex Luna 5 C18(2) 100A 2504.6mm 5 micron检测器：UV检测器；检测波长：294nm 柱温: 40流动相：硫酸铜D-苯丙氨酸溶液（取D-苯丙氨酸1.32g与硫酸铜1g，加水1000ml溶解后，用氢氧化钠试液调节pH值至3.5）甲醇（82：18）流速:1 ml/min具体试验操作: 取本品细粉适量，用0.1mol/L的盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星0.1mg的溶液，滤过，取续滤液适量，用流动相稀释制成每1ml中含左氧氟沙星0.02mg的溶液，作为供试品溶液；另取氧氟沙星对照品，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含氧氟沙星0.1mg的溶液，精密量取适量，用流动相稀释制成每1ml中含氧氟沙星0.04mg的溶液，作为对照品溶液。取20l注入液相色谱仪，记录色谱图，右氧氟沙星与左氧氟沙星依次流出，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液中左氧氟沙星峰（后）的保留时间一致。表 3.2.P.5.6.3.1 鉴别(2) 批号项目20110315-120110315-220110315-3空白辅料鉴别(2)与对照品溶液中左氧氟沙星峰的保留时间一致。与对照品溶液中左氧氟沙星峰的保留时间一致。与对照品溶液中左氧氟沙星峰的保留时间一致。无左氧氟沙星峰申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.4 鉴别(3)氯化物鉴别反应取本品的细粉适量，加水振摇使盐酸左氧氟沙星溶解，滤过，滤液显氯化物鉴别反应（2010版中国药典二部 附录 III）。表 3.2.P.5.6.4.1 鉴别(3) 批号项目20110315-120110315-220110315-3空白辅料鉴别(3)显氯化物鉴别反应显氯化物鉴别反应显氯化物鉴别反应不显氯化物鉴别反应申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.5 有关物质检查 采用HPLC法进行有关物质检查试验条件:色谱柱：phenomenex Luna 5 C18(2) 100A 2504.6mm 5 micron检测器：UV检测器； 检测波长：294nm； 柱温: 40流动相：醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300 ml使溶解，用磷酸调节pH值至2.2）为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱表 3.2.P.5.6.5.1 有关物质检查梯度洗脱程序（修改）时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）086144086144859.540.56259.540.5638614738614流速：1 ml/min系统适用性：称取左氧氟沙星对照品、环丙沙星对照品和杂质E对照品各适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星6.0mg、环丙沙星和杂质E各30g的混合溶液，取10l注入液相色谱仪，记录色谱图，左氧氟沙星峰的保留时间约为15分钟，左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度应分别大于2.0与2.5。取本品细粉适量，精密称定，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含左氧氟沙星6.0mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，精密量取适量，用0.1mol/L盐酸溶液定量稀释制成每1ml中含12g的溶液，作为对照溶液，另精密称取杂质A对照品约18mg，置100ml容量瓶中，加6mol/L氨溶液与水适量使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为杂质A对照品溶液。取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%-25%，精密量取供试品溶液、对照溶液和杂质A对照品溶液各10l注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，杂质A按外标法以峰面积计算，不得过0.3%。其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（0.3），其它各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3.5倍（0.7）。表 3.2.P.5.6.5.2 有关物质检查 批号项目20110315-120110315-220110315-3江苏恒瑞医药股份（101011）有关物质检查杂质A，%0.000.000.000.00最大单一杂质，%0.020.020.020.04总杂质，%0.050.050.050.07中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片有关物质检查流动相的配制及色谱梯度洗脱条件为：流动相：醋酸铵高氯酸钠溶液（取醋酸铵4.0g和高氯酸钠7.0g，加水1300 ml使溶解，用磷酸调节pH值至2.2）-乙腈（85：15）为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱表 3.2.P.5.6.5.3 有关物质检查梯度洗脱程序（药典）时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）01000181000257030397030401000731000由于按中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片有关物质检查方法条件进行试验无法达到左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度应分别大于2.0与2.5这一系统适用性技术要求，因此对流动相的配制及色谱梯度洗脱条件作了改动，主要表现在：流动相A中不加乙腈，目的：方便流动相的配制。增加水系的比例，由原来的85：15调整为86：14，目的：改善左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度，使系统适用性达到药典的技术要求。等度洗脱的时间由18分钟延长到40分钟，目的：经研究发现，等度洗脱时左氧氟沙星峰与杂质E峰和左氧氟沙星峰与环丙沙星峰间的分离度最好，故等杂质E峰、左氧氟沙星峰、环丙沙星峰流出后再进行梯度洗脱。表 3.2.P.5.6.5.4 有关物质检查放行标准限度与货架期标准限度一览表检查项目放行标准限度货架期标准限度有关物质杂质A，%杂质A：不得过0.2%杂质A：不得过0.3%最大单一杂质，%最大单个杂质峰：不得过0.2%最大单个杂质峰：不得过0.3%总杂质，%杂质峰面积的和：不得过0.5%杂质峰面积的和：不得过0.7%根据稳定性考察的结果最大单一杂质和总杂质在货架期会随时间而增加，故收紧放行标准限度，以保证货架期期间产品的有关物质各指标符合药典2010版要求。3.2.P.5.6.6 溶出度检查采用转篮法、紫外-可见光分光光度法进行溶出度检查试验条件:仪器装置：转篮检测器：UV检测器； 检测波长：294nm 转速: 50转/分钟 溶出介质：纯水、盐酸溶液（91000）、pH 6.8磷酸盐缓冲溶液溶、pH4.5 磷酸缓冲溶液介质体积：900ml取样时间：30分钟取本品，照溶出度测定法（附录X C第一法），以盐酸溶液（91000）900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml，滤过，精密量取续滤液适量，用盐酸溶液（91000）定量稀释制成每1ml约含左氧氟沙星5.5g的溶液，照紫外-可见分光光度法(附录IV A)，在294nm 的波长处测定吸光度，另精密称取左氧氟沙星对照品适量，加盐酸溶液（91000）溶解并定量稀释制成每1ml中约含5.5g的溶液，同法测定，计算每片的溶出量。限度为标示量80%，应符合规定。表 3.2.P.5.6.6.1 溶出度 批号项目20110315-120110315-220110315-3江苏恒瑞医药股份（101011）溶出度（%）100、102、102101、102、102101、103、103103、103、103102、103、103103、103、10394、95、9292、88、88为了保证本产品的溶出度与被仿制药一致，有必要对本产品和被仿制药在各种介质中的溶出行为进行深入研究，结果如下：表 3.2.P.5.6.6.2 对照药品（101011批）溶出曲线 （介质：水）时间min杯号51015203045110 22 35 47 67 84 210 22 35 47 66 84 38 21 32 43 62 83 48 21 32 43 62 83 59 21 35 47 65 85 67 20 32 44 62 85 平均值9 21 33 45 64 84 RSD10.0 3.3 5.2 4.2 3.9 1.2 图 3.2.P.5.6.6.1 对照药品 （101011批）溶出曲线 （介质：水）表 3.2.P.5.6.6.3 20110315-1批溶出曲线 （介质：水） 时间min杯号51015203045115 46 73 93 96 95 215 46 73 93 96 95 317 44 71 95 97 97 417 44 71 95 97 97 515 44 73 93 96 96 617 43 70 95 97 97 平均值16 45 72 94 96 96 RSD8.1 2.3 1.9 1.0 0.6 0.9 图 3.2.P.5.6.6.2 20110315-1批溶出曲线 （介质：水）表 3.2.P.5.6.6.4 20110315-2批溶出曲线 （介质：水）时间min杯号51015203045118 46 72 97 99 98 218 46 72 97 99 98 318 45 72 93 95 95 418 45 72 92 95 97 518 45 71 97 98 98 617 45 72 92 94 95 平均值18 45 72 95 97 97 RSD2.5 1.6 0.3 2.7 2.4 1.7 图 3.2.P.5.6.6.3 20110315-2批溶出曲线 （介质：水）表 3.2.P.5.6.6.5 20110315-3批溶出曲线 （介质：水）时间min杯号51015203045114 42 70 94 96 95 214 42 70 94 96 96 316 44 75 90 95 88 416 44 75 90 96 88 513 43 70 96 95 95 615 43 75 90 95 90 平均值14 43 73 92 95 92 RSD7.3 2.2 4.1 2.9 0.5 3.9 图 3.2.P.5.6.6.4 20110315-3批溶出曲线 （介质：水）表 3.2.P.5.6.6.6三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：水） 时间（min）批号5101520304520110315-116 45 72 94 96 96 20110315-218 45 72 95 97 97 20110315-314 43 73 92 95 92 对照药品（101011）9 21 33 45 64 84 图 3.2.P.5.6.6.5三批样品与对照药品溶出度曲线比较（介质：水）表 3.2.P.5.6.6.7 对照药品（101011批）溶出曲线 （介质：盐酸溶液） 时间min杯号51015203045112 32 49 65 91 95 212 31 49 72 91 96 313 32 49 64 92 98 414 34 52 70 100 97 512 31 50 67 92 99 612 31 50 68 94 99 平均值12 32 50 68 93 97 RSD7.6 3.6 2.9 4.4 3.6 1.7 图 3.2.P.5.6.6.6 对照药品（101011批）溶出曲线 （介质：盐酸溶液）表 3.2.P.5.6.6.8 20110315-1批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）时间min杯号51015203045123 64 97 100 100 100 216 56 91 100 101 102 324 66 96 98 99 99 424 59 94 99 100 99 517 55 87 96 100 101 619 54 88 100 101 101 平均值20 59 92 99 100 100 RSD18.0 8.5 4.5 1.6 0.7 1.1 图 3.2.P.5.6.6.7 20110315-1批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）表 3.2.P.5.6.6.9 20110315-2批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）时间min杯号51015203045116 52 87 101 103 103 212 49 85 102 102 101 320 53 91 101 102 103 418 48 87 101 102 102 513 47 80 100 102 102 615 49 87 102 102 101 平均值16 50 86 101 102 102 RSD17.9 5.2 4.2 0.8 0.2 0.8 图 3.2.P.5.6.6.8 20110315-2批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）表 3.2.P.5.6.6.10 20110315-3批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）时间min杯号51015203045116 47 85 99 99 98 215 54 88 101 101 99 316 53 87 101 101 100 418 52 87 102 100 98 519 56 93 101 101 100 613 46 80 99 100 100 平均值16 51 87 101 100 99 RSD13.9 7.6 5.0 1.0 0.7 0.9 图 3.2.P.5.6.6.9 20110315-3批溶出曲线 （介质：盐酸溶液）表 3.2.P.5.6.6.11 三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：盐酸溶液） 时间（min）批号5101520304520110315-120 59 92 99 100 100 20110315-216 50 86 101 102 102 20110315-316 51 87 101 100 99 对照药品（101011）12 32 50 68 94 97 图 3.2.P.5.6.6.10 三批样品与对照药品溶出度曲线比较（介质：盐酸溶液）表 3.2.P.5.6.6.12 对照药品溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）时间min杯号5101520304517 19 32 42 62 86 27 19 30 40 58 101 35 18 28 39 57 80 47 18 28 38 55 78 55 17 28 39 57 79 67 18 29 38 56 78 平均值6 18 29 39 57 84 RSD13.4 4.7 4.8 3.9 4.0 10.8 图 3.2.P.5.6.6.11 对照药品溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）表 3.2.P.5.6.6.13 20110315-1批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）时间min杯号51015203045115 41 70 96 100 101 215 40 67 91 101 100 311 39 67 93 101 100 417 43 73 98 101 100 511 39 67 93 102 100 614 43 73 98 101 100 平均值14 41 70 95 101 100 RSD17.9 4.0 3.8 3.1 0.7 0.5 图 3.2.P.5.6.6.12 20110315-1批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）表 3.2.P.5.6.6.14 20110315-2批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）时间min杯号51015203045115 42 65 88 100 99 218 44 69 92 99 99 320 47 74 99 101 100 416 44 69 89 100 98 520 47 73 99 100 100 616 43 69 89 100 99 平均值17 45 70 93 100 99 RSD11.4 5.1 4.5 5.6 0.6 0.7 图 3.2.P.5.6.6.13 20110315-2批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）表 3.2.P.5.6.6.15 20110315-3批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）时间min杯号51015203045120 49 76 99 100 99 221 50 80 100 100 99 312 38 68 93 100 100 416 45 74 96 101 100 513 38 67 93 100 99 616 45 73 97 100 99 平均值16 44 73 97 100 99 RSD21.4 12.2 6.9 2.9 0.3 0.3 图 3.2.P.5.6.6.14 20110315-3批溶出曲线（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）表 3.2.P.5.6.6.16三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液） 时间（min）批号5101520304520110315-114 41 70 95 101 100 20110315-218 45 70 93 100 99 20110315-316 44 73 97 100 100 对照药品（101011）6 18 29 40 57 84 图 3.2.P.5.6.6.15三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：pH6.8磷酸盐缓冲盐溶液）表 3.2.P.5.6.6.17 对照药品溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）时间min杯号51015203045110 28 43 56 78 97 210 29 44 57 83 97 311 28 44 57 82 99 411 29 45 56 81 98 511 28 43 58 83 98 611 29 43 56 79 97 平均值11 29 44 57 81 98 RSD5.0 2.7 1.3 1.5 2.4 0.7 图 3.2.P.5.6.6.16 对照药品溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）表 3.2.P.5.6.6.18 20110315-1批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）时间min杯号51015203045114 37 60 86 102 103 215 34 59 84 102 101 315 37 54 86 103 102 414 37 58 84 103 103 515 37 54 86 102 100 614 39 59 89 103 102 平均值14 37 58 86 103 102 RSD2.2 4.1 4.4 2.1 0.3 1.2 图 3.2.P.5.6.6.17 20110315-1批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）表 3.2.P.5.6.6.19 20110315-2批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）时间min杯号51015203045116 48 80 93 100 99 215 46 74 95 100 99 316 47 78 94 102 101 416 46 79 98 102 102 516 47 79 96 103 102 616 47 79 94 102 101 平均值16 47 78 95 102 101 RSD3.4 1.4 2.7 2.0 1.1 1.1 图 3.2.P.5.6.6.18 20110315-2批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）表 3.2.P.5.6.6.20 20110315-3批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）时间min杯号51015203045112 33 56 83 102 101 213 34 53 84 102 102 313 32 58 82 101 101 413 32 56 83 102 100 512 32 53 84 103 102 612 32 56 83 102 101 平均值13 33 55 83 102 101 RSD3.9 1.9 3.2 0.8 0.5 0.9 图 3.2.P.5.6.6.19 20110315-3批溶出曲线（介质：pH4.5 醋酸盐缓冲溶液）表 3.2.P.5.6.6.21三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：pH4.5醋酸盐缓冲盐溶液） 时间（min）批号5101520304520110315-115 37 58 86 103 102 20110315-216 47 78 95 102 101 20110315-313 33 55 83 102 101 对照药品（101011）11 29 44 57 81 98 图 3.2.P.5.6.6.20 三批样品与对照药品溶出度曲线比较表（介质：pH4.5醋酸盐缓冲盐溶液）根据对本产品和对照药品溶出度研究结果，为了保证本产品的溶出度与被仿制药一致，故提高放行标准限度，溶出度放行标准限度与货架期标准限度见下表：表 3.2.P.5.6.6.2 溶出度放行标准限度与货架期标准限度一览表检查项目放行标准限度货架期标准限度溶出度限度为标示量90%限度为标示量80%申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.7 重量差异检查 采用天平称量（天平可读性0.1mg）进行重量差异检查取供试品20片 ,精密称定总重量 ,求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与标示片重比较，超出限度（5.0%）的不得多于2片 ,并不得有 1片超出限度 1倍。表 3.2.P.5.6.7.1 重量差异检查 批号项目20110315-120110315-220110315-3重量差异1.3%1.7%1.6%1.5%1.1%1.5%申报标准与中国药典2010版二部盐酸左氧氟沙星片标准一致。3.2.P.5.6.8 微生物限度检查采用离心沉淀法+薄膜过滤法+中合法+培养基稀释法进行微生物限度检查试验条件: 生化培养箱（型号LRH-250-A 和LRH-250-）；自控卧式压力蒸汽灭菌器（型号YXQ-WY21.600和YXQ.WY.21.600-ZK）；隔膜真空泵（GM-0.33A）；无菌检查薄膜过滤器（STV3型）；低速离心机。在计量器具、检测仪器均已检定合格后，无菌室的环境也符合GMP的要求，各种验证用的容器、器具、试剂等均已达到消毒、灭菌后无菌状态、所用培养基适用性符合要求的前提下，所用的检品按照GMP要求进行抽样。细菌检查 取本品10g，充分研磨，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，使分散均匀。取一定量的供试液以500转/分离心3分钟，取上清液作为1:10的供试液。取1:10供试液1ml，加含0.7%聚山梨酯80的0.1%蛋白胨缓冲液400ml混匀，按薄膜过滤法分量经过滤膜，再用含0.7%聚山梨酯80的0.1%蛋白胨缓冲液冲洗滤膜（约100ml/次，冲洗5次），取滤膜放置含0.01mol/L硫酸锰的平皿中培养，测定细菌数。霉菌及酵母菌检查 取1:10供试液1ml,按平皿法测定霉菌及酵母菌数。控制菌检查 取1:10供试液10ml，加含0.7%聚山梨酯80的0.1%蛋白胨缓冲液400ml混匀，按薄膜过滤法分量经过滤膜，再用含0.7%聚山梨酯80的0.1%蛋白胨缓冲液冲洗滤膜（约100ml/次，冲洗5次），取滤膜放至胆盐乳糖增菌培养基中（400ml/瓶）培养，检查控制菌。 。表 3.2.P.5.6.8.1 微生物限度检查 批号项目20110315-120110315-220110315-3微生物限度检查细菌总数CFU/g101010