组织培养复习.doc

组织培养复习一：名词解释1.胚胎培养：指把原胚或成熟胚、胚乳、胚珠、或子房分离出来，在人工合成的培养基上培养，使其成为正常的植株。2器管培养：指分离茎尖、茎段、根尖、根、叶片、叶原基、子叶、花瓣、花药或花粉，果实等作为外植体，在人工合成的培养基上培养，使其发育成的植株。3.外植体：用于植物组织培养的接种材料，包括植物体的各个器官，组织、细胞和原生质层。4愈伤组织：植物各种器官的外植体在离体的条件下，经细胞脱分化等一系列过程改变它们原有的特征而形成一种能迅速增值的无特征结构和功能的细胞团。5.胚状体（体细胞胚）：是指将离体或活体条件下，体细胞经原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷胚期和子叶期等阶段形成的胚。6.完全培养基：在基本培养基的基础上，根据实验的不同需要，附加一些物质，如植物生长调节物质和其它复杂有机附加物等。7.平板培养技术：将单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合后平铺一层在培养皿底上的培养方法。8.看护培养的含义：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞并使其生长和增值的方法。9初代培养(第一代培养):从植物体上分离下来外植体作第一次培养。10继代培养：第一次培养以后将培养物转移到新的培养基上进行培养。11.固体培养：将外植体接种在加凝固剂的培养基中进行组织培养。12：液体培养：将外植体接种在不加凝固剂的培养基中进行组织培养。13.全能性：指植物的每一个细胞多具有该植物的全部遗传信息和发育完整植株的能力。14.再生性：在植物中很多是靠种子生长来产生完整的植株，但也有不少可通过根、茎、叶等器官再生而成为完整的植株。15.褐变现象：是指外植体的培养过程中，自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。16玻璃化现象：是指在组培中出现有的组培苗的叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿、叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低的现象。17.原生质体融合也叫体细胞杂交：是指原生质体培养技术为基础，借用动物细胞融合方法发展和完善的一门新型生物技术，是以体细胞为材料，通过物理、化学因子的诱导进行融合，得到杂种细胞的过程。18.种质保存：利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中所含有的遗传物质保持其遗传完整性，有高的活力，能通过繁殖将其遗传特性传递下去。19.离体保存：是指将组织和细胞培养中的外植体和试管苗贮存在使其抑制生长、缓慢生长或无生长的条件下，达到长期保存的方法。20.低温保存：在低温条件下培养材料，还可辅以改变培养基成分、控制培养基温度，以减缓材料的生长速度、延缓继代时间，故又称为最小生长法。21.脱分化：将来自己分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞分裂活性。（即形成愈伤组织的过程）22.再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。（由愈伤组织再形成完整植株的过程）23.灭菌：是指用物理或化学的方法，杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体，即把所有生命的物质全部杀死。24.消毒：它指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用。25.污染：是指在组培过程中，由于真菌、细菌等微生物的浸染，在培养容器内滋生大量的菌斑，使培养材料不能正常生长和发育的现象。四、简答题：1试述超净工作台的无菌操作技术。（10分，每一小点1分）答： (1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室，并打开其内紫外灯进行灭菌；(2)在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；(3)接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服，并换穿拖鞋等；(4)上工作台后，用酒精棉球擦拭双手，特别是指甲处。然后擦拭工作台面；(5)先用酒精棉球擦拭接种工具，再将镊子和剪子从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；(6)接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；(7)接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外灯灭菌30min。若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。2植物组织培养中褐变的预防措施有哪些？（7分）答：（1）选择适宜的外植体 外植体应选择分生能力较强的材料。如采用实生苗茎尖、枝条顶芽、幼胚等材料培养褐变程度比较轻。对较易褐变的外植体材料进行预处理可以减轻酚类物质的毒害作用。（2分）（2）采用适宜的培养基和光温条件 培养基的无机盐成分、蔗糖浓度、激素水平、温度适宜及在黑暗条件下培养，或在取外植体之前对母株进行遮光处理20d40d，可以显著减轻材料的褐变。（2分）（3）在培养基中加活性炭、抗氧化剂和其他抑制剂 在培养基中加入0.1%0.5%的活性炭对吸附酚类氧化物的效果很明显。（2分）（4）缩短转瓶周期 这是组培中控制褐变常用且有效的方法。（1分）3在植物组培中降低成本、提高效益的措施有哪些？（7分，每小点1分）答：在植物组培中降低成本、提高效益的措施有以下几种：（1） 提高操作的熟练程度及劳动生产率，节约开支。（2） 正确使用仪器设备，延长使用寿命，减少维修费。（3） 降低器皿的消耗，使用廉价的代用品。（4） 节省水电开支，充分利用培养室空间等。（5） 降低污染率，提高繁殖系数、生根率、移栽成活率。（6） 以绵白糖代替蔗糖，自来水代替蒸馏水。（7） 在培养过程中，始终进行散射。既降低了成本，又锻炼了小苗，提高苗的成活率。4你对组培工厂的经济效益是怎样分析的？答：我认为组培工厂要提高经济效益至少应该从以下几个因素去考虑。（8分，每小点2分）（1） 成本是影响经济效益的主要因素。成本高低虽受许多因素的影响，但主要取决于设备条件、经营者的管理水平及操作工人的熟练程度。在实际生产中，应根据自身条件最大限度地降低成本。（2） 市场是实现商品化的关键因素。生产品种新、质量好、市场畅销的品种，可减少成本投入，提高经济效益。因此，要根据市场需求，以销定产，才能实现良好的经济效益。（3） 生产规模对经济效益也有重大影响。在一定生产水平条件下，生产规模大，纯利润越高。但组培规模的大小要视当地的条件、市场情况而定，不能不顾客观条件一味地追求扩大规模，否则会造成严重的经济损失。（4） 利用组培技术繁殖名优花卉的利润比繁殖大众花卉的利润高。不论是名优花卉还是大众花卉，组培繁殖程序和生产成本基本相同，而名优花卉售价却远远高于大众花卉，因此，快速繁殖适销对路的名优花卉，可带来丰厚利润。5.请写出一般植株外植体表面灭菌的程序6.培养基制备程序示意7.防治外植体带菌的措施外植体预先培养 用茎尖作为外植体时，可以在室内（如温室）或无菌条件下对枝条进行预先培养。一般采取的方法是先将外植体用清水洗干净，水培使其抽枝，然后以新抽的枝条作为外植体。这是十分有效的降低外植体带菌的方法。另一个方法是，将从室外采集的外植体在无菌的条件下暗培养，待有黄化枝条长出后，取其作为外植体，经常规体表灭菌，可以明显减少培养过程中的污染。避免阴雨天在田间采取外植体 一般在晴天下午采集要比在早晨采集污染少，这可能因为植物体表经过日晒后，大部分的细菌和真菌被杀死。对外植体内部有污染的材料，要取材料的深层组织（一般是内部的分生组织）可以有效地减少污染。8.机械法和酶解法分离单细胞各有什么特点？机械法：细胞不受到酶的伤害；不用质壁分离(有利于进行生理和系列化研究。)；细胞产量低；细胞易破。酶解法：细胞受到酶的伤害；要质壁分离；细胞产量高；细胞不易破。9.引起材料死亡的原因主要有以下几方面。外植体灭菌过度。灭菌的目的是杀死微生物，而使外植体受到的损伤最小，一旦外植体太小、太嫩，灭菌药剂的用量过大或时间太长，就会使材料受损严重，甚至导致死亡。污染，被真菌或细菌浸染并大量繁殖，会导致培养物死亡。培养基不适宜或配制有问题，主要表现在激素的种类和浓度、各种营养成分的配比上，培养基引起的死亡在无生长点的材料及愈伤组织培养中更容易发生。 培养环境条件恶化，温度过高、透气不良、培养物过于密集、久不转移，有害气体积累等因素都会使培养的植物材料死亡。 在生产中可以通过下面的措施来减轻和避免材料死亡。选用比较温和的灭菌剂，降低药剂浓度，减少消毒时间，选用其他部位，最好在生长季节取芽。注意环境及个人卫生，严格按规程进行操作。认真配制各种激素、母液、培养基，选用盐含量较低的培养基，也可试用1/2或1/4培养基，并调整各种激素的配比和用量，在培养基中适当添加抗生素、活性炭及必需的有机营养。改善培养环境，及时转移和分瓶。 加强组培苗的过渡管理。10.对组培苗瘦弱的原因分析如下：细胞分裂素浓度过高，产生了过多的不定芽，这些密集的芽若 不及时进行转移和分切，很快就开始变成瘦弱苗。 温度过高，高温有利于苗的生长，多数品种适宜的温度是25左右，在过高的温度条件下，苗木的节间伸长速度快。光照不足，组培苗会变黄、变弱、变细并加速生长，使苗在短时间内变得更瘦弱。 培养基水分过多，在琼脂含量不足，培养基较稀时，除了引起玻璃化的发生外，还会引起植株徒