玫瑰SRAP 亲缘关系 遗传多样性 品种分类 指纹图谱论文.doc

玫瑰论文：玫瑰遗传多样性的SRAP分析与品种指纹图谱构建【中文摘要】玫瑰(Rosa rugosa)是蔷薇属重要的观赏灌木,具有重要的观赏价值和经济价值,也是蔷薇属植物育种的重要亲本。本研究以4份野生玫瑰种质、46个玫瑰品种、2个月季品种、2个蔷薇品种和2个黄刺玫品种为材料,以SRAP分子标记为研究方法,对玫瑰的遗传多样性及其与近缘种植物的亲缘关系进行了研究,在此基础上构建了玫瑰品种的指纹图谱,为杂交育种的亲本选择、品种鉴定、新品种保护、品种分类等奠定了基础。主要研究结果如下:1.在正交试验设计的基础上得到了玫瑰最适的SRAP-PCR反应体系,即在25L反应体系中,含有10PCR buffer 2.5L,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,Taq酶1.5U,引物0.25mol/L,模板1.0 ng/L,其中,各因素对PCR反应的影响从大到小依次为:Taq酶,dNTPs,引物,Mg2+,模板;扩增程序为94预变性5 min; 94变性1 min,35退火1 min,72延伸1 min,进行5个循环;94变性1 min,50退火1 min,72延伸1 min进行30个循环;72延伸10 min, 4保存。2.【英文摘要】Rosa rugosa which has great ornamental and economic value is an important kind of ornamental shrub of genus Rosa, it is also the concernful parental in cross breeding. The genetic diversity and relationship of 4 wild germplasms and 46 cultivars of Rosa rugosa and 2 cultivars of Rosa, Rosa multiflora and Rosa xanthina respectively was evaluated according to SRAP markers in this study, the fingerprint of Rosa rugosa was also established. This can give parental selection in cross breeding, identification, righ.【关键词】玫瑰 SRAP 亲缘关系 遗传多样性 品种分类 指纹图谱【英文关键词】Rosa rugosa SRAP genetic relationship genetic diversity classification fingerprint【目录】玫瑰遗传多样性的SRAP分析与品种指纹图谱构建符号说明4-8摘要8-10Abstract10-111 引言12-251.1 相关序列扩增多态性(Sequence-Related Amplified Polymorphism , SRAP)分子标记技术12-201.1.1 常用的分子标记技术12-141.1.2 SRAP 标记的原理和特点14-151.1.3 SRAP 分子标记技术在观赏植物中的应用15-201.2 观赏植物指纹图谱技术20-241.2.1 蛋白质电泳指纹图谱20-211.2.2 DNA 指纹图谱21-241.3 本研究的目的与意义24-252. 材料与方法25-312.1 材料25-262.2 仪器与试剂262.2.1 主要仪器262.2.2 试剂262.3 玫瑰基因组DNA 模板的制备26-272.3.1 DNA 的提取26-272.3.2 DNA 质量检测272.4 玫瑰SRAP-PCR 反应体系的优化27-292.4.1 SRAP-PCR 扩增282.4.2 电泳检测282.4.3 反应体系稳定性的检测28-292.5 引物筛选292.6 供试材料的PCR 扩增与产物检测29-302.6.1 供试材料的PCR 扩增292.6.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳29-302.6.3 银染显色302.7 数据统计与结果分析30-312.7.1 电泳结果统计30-312.7.2 玫瑰亲缘关系和遗传多样性的SRAP 分析312.7.3 玫瑰品种指纹图谱的构建313. 结果与分析31-423.1 玫瑰基因组DNA 的提取31-323.2 玫瑰SRAP-PCR 反应体系的优化32-343.2.1 PCR 反应体系优化结果32-333.2.2 正交试验结果分析33-343.2.3 反应体系稳定性检测343.3 引物筛选34-353.4 SRAP 扩增结果与引物多态性分析35-373.5 玫瑰亲缘关系与遗传多样性的SRAP 分析37-403.5.1 供试材料的亲缘关系分析37-383.5.2 玫瑰种质SRAP 遗传多样性分析383.5.3 聚类分析与玫瑰品种类群的划分38-403.6 玫瑰品种指纹图谱的构建40-423.6.1 核心引物的筛选40-413.6.2 玫瑰品种指纹图谱的构建41-424、讨论42-464.1 SRAP 技术操作过程中的一些问题42-434.2 玫瑰SRAP-PCR 反应体系的优化43-444.3 供试材料之间的亲缘关系分析444.4 玫瑰品种分类的标准44-454.5 作物指纹图谱构建的方法45-464.6 SRAP 分子标记分析玫瑰等蔷薇属植物亲缘关系的可行性465、结论46-485.1 适合玫瑰的SRAP-PCR 反应体系465.2 适合玫瑰SRAP 分析的引物46-47