MS培养基配方.doc

实验八 MS培养基的配制和灭菌一、实验目的：了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。二、实验材料：天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。三、方法步骤1、母液配制大量元素(母液) mgL 100ml。 (2) 微量元素(母液) (3) 铁盐(母液) (4) 有机成分(母液) A 和B (5) 植物生长调节物质(2，4-D，NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液为10倍浓缩液外，其余的均为100倍浓缩液。其中，母液、母液及母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。母液的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。2、培养基配制（1）配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液为100 ml，母液、A和B各10ml。再取2，4-D 10ml、NAA 2ml，与各种母液一起放入烧杯中。（2）称取54g卡拉胶；300g蔗糖；活性炭1g。（3）在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质。（4）加水定容至1升，开搅拌机，搅匀混合液。定容至10升，搅匀。（5）向母液混合物加入白沙糖，继续搅拌；然后停一下搅拌机再加卡拉胶，开搅拌机混匀；接着再停搅拌机加活性炭，开搅拌机搅匀。（6）调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.47.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)（7）将培养基分装到所选用的培养容器中，约30ml/瓶。（8） 盖住瓶口（9）灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。四、分析1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。这里将大量元素中钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。另外，培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累。2. 在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分。例如能用卡拉胶就不用琼脂。3.用搅拌机比较方便。但要人工不好，分配溶液缺乏量化。4.加入活性炭可使培养基变黑，有利于离体生根，还可以降低分泌物的毒害作用。附：MS培养基配方：成分分子量使用浓度 (mg/L)大量元素（母液）硝酸钾101.111900硝酸铵80.041650磷酸二氢钾136.09170硫酸镁246.47370氯化钙147.02440微量元素（母液）碘化钾166.010.83硼酸61.836.2硫酸锰223.0122.3硫酸锌287.548.6钼酸钠241.950.25硫酸铜249.680.025氯化钴237.930.025铁盐（母液）乙二胺四乙酸二钠372.2537.3硫酸亚铁278.0