应用PTLC技术研究补血草指纹图谱.doc

应用HPTLC技术研究补血草的指纹图谱摘要1.项目：应用高效薄层色谱建立补血草的指纹图谱进行植物化学成分的筛选和（HPTLC）技术。2.方法：化学成分初步的筛选已经完成，高效薄层色谱法的研究也在开展了。卡玛高效薄层色谱系统使用的设备是Linomat V 涂层，薄层色谱扫描仪3，薄层数码成像系统3，WIN CATS-4软件。3.结果：植物化学成分研究初步的结果确认了蛋白质，油脂，碳水化合物，减少糖，酚，单宁酸，黄酮，皂甙，三萜，生物碱，蒽醌和醌的存在。利用高效液相色谱指纹图谱用乙醇展开挥干后发现10个斑点的Rf值范围在0.08到0.65间，补血草皮显示的8个峰Rf值在0.07到0.63之间，补血草的叶乙醇提取的8个峰Rf值在0.09到0.49间。通过比较开始，中间和结束吸收谱的位置来确认样品的纯度。结论：由此可以得出结论，N.crenulata的标示物的高效薄层色谱指纹图谱的生化指标也许能应用医学上重要的植物于医药工业和植物系统的研究。 1. 介绍 从药用植物中发现的天然药物是安全和有效的。民间应用过的许多种类植物药物已被用于治疗各种疾病。即使在今天，植物中的化合物作为治疗的补救措施，在许多发展中国家中的初级卫生保健中继续发挥着重要作用。1 植物材料的标准化越来越受需要。一些药典只包含描述植物药材的理化参数。因此，现代方法描述植物药材有效成分的定性和定量也许对草药及其制剂适当的标准有用处。此外，世卫组织强调需要确保药用植物产品的质量，利用现代控制技术和应用合适的标准2。高效薄层色谱（HPTLC）是一个进行可靠识别的有价值的工具。它可以提供色谱指纹图谱，可以可视化，并存储为电子图片3。（草药）补血草（N.红景天） Nicols.（科属：芸香科）就是俗称的泰米尔语Mahavilvam，它是分布在印度各地，特别是在南部的西高止山脉，Sahyadris和Indomalysia的南部与中部地区。这种植物所有的部分，根，茎，树皮，树叶和水果已被用于民间医药5。根作为眼镜蛇咬伤6，全身疼痛7，绞痛8，呕吐和痢疾9的治疗药物。干燥粉末有防止痤疮粉刺和延缓衰老的功效10。树皮应用于产褥热11的治疗，皮塔11和树皮汁外涂在扭伤13处能得到迅速的治疗。传统上，叶子是用来治疗精神障碍14，痢疾11，消化功能紊乱15，发热16和癫痫12。水果汁作为昆虫毒素的解毒剂8，也有作为肠道蠕虫17的驱虫剂的功效11。N.红景天植物化学成分的初步筛选已经完成，以确定的化学成分和高效薄层色谱指纹图谱已经完成，可作为质量评估的一个标准和药物的一个标准。2. 材料与方法2.1. 植物材料植物标本是从Tiruvannamalai的阿迪安纳马莱地区，印度泰米尔纳德邦收集的。植物的分类鉴定印证调查由印度（BSI），哥印拜陀，泰米尔纳德邦，调查证实，（证书No.BSI/SRC/5/23/10-11/Tech.1134）及凭证标本存放在系植物学，政府艺术学院（自治区），昆巴可南，泰米尔纳德邦，印度。2.2. 植物药材的制备和提取 将收集的部分新鲜植物于室温下空气干燥。然后将干燥的植物药材用均质电动搅拌机磨床磨成粗粉，并存储在气密瓶中，用作进一步的分析。取阴凉处放置的粉末状样品，利用Soxhlet装置18，用150mL的乙醇为溶剂萃取8-12小时。2.3. 药材化学物质的筛选植物化学成分的初步筛选方法是Kokate19和Khandelwal20法。2.4. HPTLCHPTLC的研究进行了以下的方法：Harborne21 和 Wagner et al22法。2.4.1. 样品制备皮，茎，叶的乙醇提取物提取物用HPTLC级别的乙醇溶解，用预涂硅胶GF254铝板点样。2.4.2. 展开剂尝试了一些溶剂体系用于提取，但在甲苯 - 乙酸乙酯 - 甲酸（7:3:0.1）的溶剂体系中，得到了满意的解决方案。2.4.3. 点样使用100L的Hamilton注射器在硅胶板上以斑点宽为6mm为宜点样（5L），铝板GF-254板（20厘米10厘米）在Linomat 5上涂装置的帮助下连接到通过WIN CATS软件编程的CAMAG GPTLC系统上。2.4.4. 色谱展开流动相为乙基甲苯，醋酸，甲酸（7:3:0.1），15 mL流动相展开色谱。（20厘米10厘米）玻璃室预饱和后，流动相向上竖直展开。2.4.5. 斑点的检识展开后的板用热空气将溶剂从板上蒸干。挥干后的板用茴香醛硫酸试剂喷雾显色后在100，3分钟的热空气炉中干燥。分别在254和334 nm的UV光下显色，板的图像被保存在照片文件室（CAMAG REPROSTAR 3）中。RF值和指纹图谱数据由WIN CATS软件记录。3. 结果叶，茎和N. crenulata 大花的植物化学成分的初步筛选，得到的蛋白质，脂质，碳水化合物，还原糖，酚，单宁，类黄酮，皂甙，三萜，生物碱和醌。然而，在皮和叶生物碱结果均为阴性。在茎和叶，三萜结果均为阴性。植物的叶，茎和树皮中没有检测到蒽醌类化合物（Table 1，）。表1化学组成 茎 皮 叶蛋白质 + + +脂质 + + +碳水化合物 + + 还原糖 + + 酚类 + + +单宁 + + +类黄酮 + + +皂苷 + + +三萜 + 生物碱 + 蒽醌 醌 + +：阳性 ：阴性在N.补血草的大花，茎，树皮的乙醇提取物HPTLC指纹图谱研究中，显示了若干峰并记录在表2中。紫外光366nm和254nm下的HPTLC谱记录在图1中。相应的高效薄层色谱图如图2-4所示。茎提取物显示的10个斑点的Rf值在0.08到0.65间（表2和图3）。皮提取物显示的8个斑点Rf值在0.07到0.63之间（表2和图4），叶的乙醇提取物显示的8个斑点的Rf值在0.09到0.49间（表2和图5），通过比较在吸收光谱中起始、中间、结束时谱带的位置来确定样品的纯度。 表2补血草 斑点 Rf 高度 面积 茎 1 0.08 0.90 1672.50 2 0.12 5.80 244.40 3 0.19 20.30 400.10 4 0.22 21.70 707.20 5 0.28 4.50 1196.70 6 0.36 0.00 242.00 7 0.42 11.40 315.50 8 0.48 42.80 1178.60 9 0.58 9.90 2735.80 10 0.65 2.70 556.30 皮 1 0.07 0.80 679.202 0.09 8.50 99.203 0.13 0.10 1909.504 0.23 33.50 7807.005 0.28 0.10 1909.506 0.44 18.90 5030.507 0.52 18.80 2480.108 0.63 3.10 2631.10叶 1 0.09 12.20 5514.202 0.12 8.90 653.303 0.15 0.00 310.204 0.23 79.90 2497.805 0.28 0.50 3816.806 0.37 0.20 2167.807 0.44 19.90 1149.608 0.49 41.80 1207.004. 讨论无论以研究为目的或者是商业制剂，在使用这些植物药材时，鉴定药用植物的来源和化学标准是关键的一步。对于任何生物体而言，为了区分本身的种属与其他的种属，特征性是非常重要的。在植物分类学，在这种分子时代，在植物系统的研究中形态特征也起到了至关重要的作用，并用来作为一种种属分类的手段。在当今时代，在除了形态标记之外，解剖，细胞学，生化和分子标记也用于生物体的分类。HPTLC对于植物化学物质的标记是很有用的，并且对植物种群的遗传变异也有很好的估计。在已配置的植物分类的类别中已经发现有用的化学成分的存在或者不存在。HPTLC图谱剖析经常用于这些目的时是如此的重要和强大。HPTLC指纹被证明是描绘，精确的，准确的草药识别方法，并且可进一步用于鉴定和有特征的重要的药用植物。开发高效薄层指纹色谱将有助于中药制剂的质量控制和中草药配方的标准化。指纹图谱用于从掺杂物里面识别物种是有用的，并