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第二十六章 白细胞分化抗原和粘附分子的检测Chapter 26 Assays for Leukocyte Differentiation Antigen and Adhesion Molecule第一部分 教学内容和要求一、目的要求掌握：人白细胞分化抗原、细胞表面粘附分子及可溶性粘附分子的测定原理和方法；熟悉：粘附分子基因及其表达的测定方法；了解：人白细胞分化抗原、粘附分子测定的临床应用。二、教学内容1白细胞分化抗原测定：白细胞分化抗原测定，白细胞分化抗原测定的应用。2粘附分子的测定：细胞表面粘附分子的测定，可溶性粘附分子的测定，粘附分子基因及其表达的检测，粘附分子测定的应用。第二部分 测试题一、 选择题（一）单项选择题（A型题）1白细胞分化抗原测定方法目前主要采用A. ELISAB. 酶免疫组化法C. 放射免疫技术D. 时间分辨荧光免疫法E. 流式细胞仪测定法2下列白细胞分化抗原哪个是人类HIV的主要受体A. CD3 B.CD4 C.CD2 D. CD8 E. CD343参与T细胞黏附的白细胞分化抗原是A.CD3 B.CD4 C.CD2 D.CD8 E.CD284分布于成熟T细胞和部分胸腺细胞表面的白细胞分化抗原是A.CD3 B.CD4 C.CD2 D.CD8 E.CD285称为细胞毒T细胞抗原4的白细胞分化抗原是A.CD3 B.CD4 C.CD152 D.CD34 E.CD286称为白细胞共同抗原的白细胞分化抗原是A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD34 E.CD287.称为白细胞功能相关抗原2的白细胞分化抗原是A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD2 E.CD288.称为白细胞功能相关抗原1的白细胞分化抗原是A.CD11a/CD18 B.CD79/CD21 C.CD28/B7 D.CD4/CD8 E.CD152/CD89参与B细胞抗原识别和活化的白细胞分化抗原是A.CD45 B.CD79 C.CD152 D.CD2 E.CD2810.胰岛素依赖糖尿病的发病与哪类白细胞分化抗原有关A.CD4 B.CD3 C.CD152 D.CD95 E.CD2811.造血干细胞表面表达的白细胞分化抗原是A.CD45 B.CD79 C.CD152 D. CD28 E. CD3412正常人CD4+/CD8+比值在A.1.72.0之间 B.0.81.2之间 C.1.21.8之间D.1.02.0之间 E. 0.51.0之间13免疫细胞化学法检测CD分子常计数多少个细胞，求得相应CD抗原阳性细胞百分率A.100 B.200 C.300 D. 500 E. 100014. B细胞表面最重要的CD分子是A.CD3 B.CD4 C.CD8 D.CD40 E.CD8015.细胞外可溶性粘附分子主要测定法是A. ELISA B. 酶免疫组化法C. 荧光免疫法 D. 流式细胞仪测定法E. 时间分辨荧光免疫法16 用于粘附分子测定的标本A. 活组织切片 B. 淋巴细胞 C. 内皮细胞 D. 组织细胞提取物 E. 以上都是17检测细胞表面粘附分子常用的方法是A. 酶免疫发光法 B. 酶免疫组织化学法C. 荧光免疫法 D. 流式细胞仪测定法 E. 时间分辨荧光免疫法18在检测可溶性粘附分子中，ELISA常用A. 直接法 B. 间接法 C. 夹心法 D. 竞争法 E. 组化法19细胞粘附分子基因的多态性检测的验证方法是A. PCR-SSCP B. PCR-RFLPC. 实时荧光PCR测定技术 D. PCR-直接测序法E. 以上都不是20 炎症的发生与白细胞在血管壁上的哪些变化有关A. 附壁滚动 B. 激活C. 紧密粘附 D. 移行E. 以上都是21.与肿瘤的发展和扩散有关的是A. CD4分子 B. CD4分子变异体C. CD8分子 D. CD8分子变异体E. CD44分子变异体22粘附分子作用是A. 细胞信号传导与活化 B. 细胞的伸展与转移C. 细胞的生长与分化 D. 创伤的愈合E. 以上都是（二）多项选择题（X型题）1. 白细胞分化抗原参与哪些生理或病理过程A. 免疫应答 B. 炎症反应 C. 免疫细胞迁移D. 免疫细胞分化成熟 E. 胰岛素依赖糖尿病2. 白细胞分化抗原测定方法包括哪些A. 荧光免疫显微技术 B. 免疫细胞化学技术 C. 抗体致敏细胞花环法 D. 流式细胞术 E. 补体结合实验3白细胞分化抗原测定的应用A血液病的诊断与洽疗 B血栓与出血性疾病的诊断与治疗 C艾滋病的诊断与治疗D疾病发病机制的研究 EIg含量的研究4.流式细胞仪测CD分子下列哪些是正确的A. 特异性高 B. 快速 C. 准确 D. 仪器普及 E. 操作先进5.以下哪些是CD分子功能特点A. 与T细胞识别、黏附、活化相关B. 参与T细胞黏附C. 作为协同刺激分子，参与T、B淋巴细胞的活化增殖D. 参与TCR复合物的组成E. 参与B细胞抗原识别和活化6免疫球蛋白Fc受体（FcR）有哪几种A FcgR BFcaR C.FcbR D.FcdR E.FceR7下列哪些项是粘附分子结构A. 活化区 B. 胞内区 C. 胞浆区 D. 疏水区 E. 胞外区8.关于肿瘤转移的描述下列哪些是正确的A. 肿瘤转移与粘附分子密切相关B. 内皮细胞肿瘤细胞识别粘附分子C. 不同肿瘤其粘附途径不同D. 恶性肿瘤细胞的转移与炎症时白细胞的浸润一样E. 以上都不是9.器官移植排斥时下列哪些是正确的A. 粘附分子在内皮细胞表达增加B. 粘附分子在肾小球表达增加C. 粘附分子在浸润白细胞上表达增加D. 粘附分子在移植物上表达增加E. 粘附分子抗体有抑制作用10.目前研究粘附分子在探讨哪些疾病发生机制有意义A. 炎症 B. 肿瘤发生 C. 肿瘤移植 D. 免疫应答 E. 移植排斥11.细胞表面黏附分子的测定方法有哪些A.酶免疫组织化学测定 B.免疫荧光方法 C.流式细胞术D.时间分辨荧光免疫测定法 E.酶免疫测定法12.可溶性黏附分子的测定方法主要有A.酶免疫组织化学测定 B.免疫荧光方法 C.流式细胞术D.时间分辨荧光免疫测定法 E.酶免疫测定法13.时间分辨荧光免疫测定方法用于内皮细胞、淋巴细胞等细胞表面黏附分子的测定，其具有哪些特点A. 不受非特异性荧光的干扰B. 可同时用于多种黏附分子的测定C. 有放射性污染的处理问题D. 有较好的灵敏度E. 方法准确、可靠14.酶免疫方法用于细胞表面黏附分子测定的缺点包括哪些A. 存在内源性酶的干扰B. 测定灵敏度差C. 测定不够简单方便D. 固定剂可导致非特异性显色E. 方法难以掌握15.细胞黏附分子基因表达（mRNA）的测定方法主要有哪些A. PCR-SSCPB. PCR-RFLPC. Northern-blotD. RT-PCRE. PCR-ASO16.PCR-SSCP用于黏附分子基因多态性的检测具有下述哪些特点A. 适用于大样本的基因多态性检测B. 适用于未知的基因多态性检测C. 测定点突变，不易出现假阳性D. 快速灵敏E. 检测方法可以标准化二、填空题1. 白细胞分化抗原检测方法包括 、 、 和 。2. CD3分子与 和 组成TCR复合物 。3粘附分子根据存在形式分为 和 。4CD4粘附分子的配体是 ，CD8粘附分子的配体是 。三、名词解释1.免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily)2.E-选择素家族（E-selectin）3.粘附分子（adhesion molecule）四、问答题1. 简述时间分辨荧光免疫测定法的特点？2. 实时荧光PCR方法的优点有哪些？3. 细胞粘附分子基因的多态性测定有哪些？4. 简述酶组化法的基本原理？5. 试述细胞表面粘附分子的测定有哪些？6. PCR-SSCP用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？7. 实时荧光PCR方法用于细胞黏附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么？8. 简述细胞表面黏附分子测定的意义。9. 简述可溶性黏附分子测定的临床意义。10.简述白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中有哪些意义？11.简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在基础免疫学方面有哪些应用？12.简述白细胞分化抗原及其单克隆抗体在临床免疫上主要有哪些应用？ 第三部分 参考答案与题解一、 选择题（一）单项选择题（A型题）1.E 2.B 3.C 4.A 5.C 6.A 7.D 8.A 9.B 10.D 11.E 12.A 13.B 14.D 15.A 16.E 17.B 18.C 19.D 20.E 21.E 22.E （二）多项选择题（X型题）1.ABCDE 2.ABCD 3.ABCD 4.ABCE 5.ABCDE 6.ABE 7.BCDE 8.ABCD 9.ABCE 10.ACDE 11.ABCDE 12.ABDE 13.ABDE 14.AD 15.CD 16.ABD二、填空题1. 荧光免疫显微技术，免疫细胞化学法，抗体致敏细胞花环法，流式细胞术2. abTCR, gdTCR3.细胞表面粘附分子， 可溶性粘附分子4.MHC-类分子， MHC-类分子三、名词解释1.免疫球蛋白超家族:该类细胞黏附分子具有与Ig相似的结构特征，即具有一个或多个IgV样或C样结构域，具有黏附分子功能，种类繁多，统称为IgSF，其识别的配体多为IgSF分子和整合素家族分子。主要参与介导细胞间黏附和信号传递，参与淋巴细胞法与分化，炎症反应和免疫应答及淋巴细胞的归巢和再循环。2.E-selectin：选择素家族成员，主要表达于血管内皮细胞上，其与配体结合后，参与介导白细胞向炎症区和肿瘤细胞转移。3.粘附分子：指介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合的一类分子糖蛋白，分布于细胞表面或细胞外基质，参与细胞信号传导与活化、细胞的伸展和移动、细胞的生长及分化、肿瘤转移和创伤愈合。四、问答题1不受特异荧光的干扰。可同时用于多种因子的测定没有放射性污物的处理问题。2扩增和产物测定同时完成，扩散及应答在测定的始终是处于闭管状态，污染的可能性小。简便快速。可同时测定大量标本。3（1）PCR-SSCP （2）PCR-RFLP （3）实时荧光PCR （4）PCR-ASO （5）PCR-SSO （6）PCR-SSP4酶标抗特异性粘附分子的 抗体与处理好的组织切片标本反应后，如组织细胞存在相应的粘附分子，则酶标抗体即可与其结合，再加入颗粒性底物显色。5. 酶免疫组化法；荧光免疫法；流式细胞仪测定法；时间分辨荧光免疫测定法；酶免疫法。6. 主要缺点是：测定点突变时，不能排除假阳性，测定特异性必须由DNA测序来证实；PCR的测定操作难于标准化。PCR-SSCP测定受影响因素较多，没有一个适合于各种情况下的通用实验条件，实验室必须根据自己的摸索，得出自己实验室的最适实验条件。因此，PCR-SSCP对实验操作者的经验要求较高，不好掌握，应用不是很普遍。7. 优点主要是：扩增和产物测定同时完成，扩增反应管在测定的始终总是处于闭管状态，因此出现扩增产物污染的可能性小；简便快速；可同时测定大量样本。缺点是：对每种突变，需制备得到相应的荧光标记特异探针；需要特殊的实时荧光测定设备。8. 组织细胞活检标本的特定细胞黏附分子测定，可作为恶性肿瘤诊断和预后的指标。LI-钙黏素是肠道特异的细胞黏附分子，胃活检组织标本的LI-钙黏素免疫组化测定可作为胃发生和肿瘤形成及分化较好的腺癌的一个重要的早期辅助诊断指标。对组织标本的E-钙黏素的免疫组化测定为阴性，可能预后不良，如E-钙黏素测定可作为已分化的甲状腺癌的一个独立的预后指标。9.血液循环中可作为疾病辅助诊断的可溶性细胞黏附分子主要有免疫球蛋白超家族的VCAM-1和ICAM-1和选择性家族。ICAM-1在肝病、寄生虫病如阿米巴病、贾第虫病和弓形体病等、转移癌、溃疡性结肠炎等的患者血循环中浓度明显增高，其测定可作为血管内皮损伤及疾病严重程度的诊断指标。VCAM-1在肾功能损害、自身免疫病如系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等、器官移植排斥、深静脉栓塞等的患者血循环中有明显增高。在深静脉栓塞手术后的病人血清中检测VCAM-1，可作为静脉血栓症的早期诊断指标。在器官移植的病人，在移植器官发生排斥反应前数天，即可测出病人血液中VCAM-1有明显升高，可作为器官移植后监测早期排斥发生的非侵入性指标。E、L和P三种类型的选择素均可出现于血循环中，可溶性E-选择素的增高可见于糖尿病、恶性肿瘤、自身免疫病、败血症、结节性多动脉炎和巨大细胞动脉炎等疾病患者血循环中，这种增高与疾病的活动性无关，而与器官受损伤的程度相关。因此，血液中可溶性L-选择素水平的测定可作为疾病严重程度及预后的辅助诊断指标。血液中可溶性L-选择素的增高可见于败血症、HIV感染和AIDS患者，L-选择素具有抑制白细胞对内皮细胞黏附的功能，因此，血液中可溶性L-选择素的增高可作为疾病预后的辅助诊断指标。血液中可溶性P-选择素的增高可见于溶血性尿毒症和血小板减少性紫癫患者，P-选择素可阻断TNF对b-整合素的激活，进而抑制中性粒细胞与内皮细胞的黏附。10.白细胞分化抗原检测在艾滋病诊断和治疗中的意义在于：CD4分子胞膜外区第一个V样结构域是人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus , HIV）外壳蛋白gp120识别的部位，因此人类CD4+分子是HIV的主要受体。HIV感染CD4+细胞后，通过损伤细胞膜、干扰细胞代谢、形成合胞体、CTL和抗体破坏HIV感染的细胞等多种机制，选择性地使CD4+细胞数量锐减和功能降低。由于CD4