讲课——土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 尿素 CO NH2 2 重要的农业氮肥 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用CO NH2 2 H2OCO2 2NH3 一 课题背景 分离产生脲酶的细菌 1 实例 PCR技术 启示 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求 到相应的环境中去寻找 原因 因为热泉温度70 800C 淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制 PCR 的技术 此项技术要求使用耐高温 930C 的DNA聚合酶 筛选菌株 2 筛选菌株的培养基KH2PO41 4gNaHPO42 1gMgSO4H2O0 2g葡萄糖10 0g尿素1 0g琼脂15 0g将上述物质溶解后 用蒸馏水定容到1000mL 二 细菌数目 1 活体计数法 稀释涂布平板法 1 统计原则 选30 300个菌落的平板统计 每个稀释度取3个平板取其平均值 2 统计结果 每克样品中的菌株数 C V MC 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V 所用稀释液的体积 M 稀释倍数 缺点 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 2 显微镜直接计数 利用血球计数板 血细胞计数板 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量 不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数 缺点 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中 从对应稀释倍数为106的培养基中 A B两同学分别得到以下两种统计结果 1 A同学筛选出150个菌落 2 B同学筛选出50个菌落 B认为A的培养基被杂菌污染了 或培养基中混入了其他含氮物质 因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长 A确认自己的操作无误 但也拿不出能令人信服的证据 请你帮助A同学改进实验 提供具有说明了的证据 设置对照 同等条件下 培养空白培养基 三 设置对照的目的 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 一 无菌操作1 取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌 2 应在火焰旁称取土壤 在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中 塞好棉塞 3 在稀释土壤溶液的过程中 每一步都要在火焰旁操作 二 做好标记注明培养基种类 培养日期 平板培养样品的稀释度等 三 规划时间 二 操作提示 三 实验过程 一 土壤取样 1 取样的位置 土壤 天然培养基 含有大量的微物 其中70 90 是细菌 在富含有机质的土壤层的3 8cm处中分布着绝大多数的细菌 2 取样要求 铲去表层土 二 样品稀释 1 测细菌数 一般用104 105 106稀释液 2 测放线菌 一般用103 104 105稀释液 3 测真菌数 一般用102 103 104稀释液原则 确保平板上的菌落数在30 300之间 三 微生物的培养与观察1 接种 用适当的稀释液作涂布平板2 培养 细菌 30 37 1 2d 放线菌 25 28 5 7d 霉菌 25 28 3 4d 3 观察 a 每24h统计一次菌落数目b 以 稳定菌落 为观察对象 四 鉴定 筛选后必鉴定鉴别培养基 不影响微生物的生存酚红培养基 鉴定分解尿素的细菌 原理 脲酶催化尿素分解成氨 培养基碱性增强 酚红变红 脲酶阳性 在一定的培养条件下 相同的培养基 温度及培养时间 同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征 关注菌落的形态 大小 边缘 突起 颜色 质地等等 都是区分细菌的重要手段 关注菌落的形态 大小 边缘 突起 颜色 质地等等 都是区分细菌的重要手段 关注菌落的形态 大小 边缘 突起 颜色 质地等等 都是区分细菌的重要手段 1 使用选择培养基的目的是 A 培养细菌B 培养真菌C 使需要的微生物大量繁殖D 表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别2 能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 A CO2和N2B 葡萄糖和NH3C CO2和尿素D 葡萄糖和尿素 课堂训练 C D 3 下列说法不正确的是 A 科学家从70 80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B 统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1 M2 M3 M4 M5 以M3作为该样品菌落数的估计值 C 设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的可信度D 同其他生物环境相比 土壤中的微生物数量最大 种类最多 4 为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌 常在培养基中加入 A 较多的氮源物质B 较多的碳源物质C 青霉素类药物D 高浓度食盐 B C 5 实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应 用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线 3条线均与下图中的链霉素带接触 将平板置