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文档简介

基因工程的基本操作程序 第一步 获取目的基因 目的基因有哪几种 编码蛋白质的结构基因具有调控作用的因子怎么样获取目的基因 从自然界已有的物种中分离出来用人工的方法合成 第一步 获取目的基因 1 从基因文库中获取目的基因 如果基因文库非常大 包含了一种生物所有的基因 那这个基因文库叫什么 如果基因文库只包含了生物一部分基因 那又叫什么 什么叫基因文库 基因组文库 部分基因文库 第一步 获取目的基因 如何构建基因文库 比较基因组文库和部分基因文库 阅读P10资料卡 基因文库的构建模式图 通过对受体菌的培养而储存基因 第一步 获取目的基因 1 从基因文库中获取目的基因 2 利用PCR技术合成DNA PCR 聚合酶链式反应原料前提条件是必须对目的基因有一定的了解 需要设计引物 第一步 获取目的基因 1 从基因文库中获取目的基因 2 利用PCR技术合成DNA3 采用DNA合成仪人工合成长度不是很大的DNA片段 第二步 基因表达载体的构建 目的基因与载体结合成为重组基因 需要哪两种工具 总结 表达载体需由哪几部分组成 复制原点启动子目的基因终止子标记基因 它们的作用是 第三步 将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞 什么叫转化 常用的转化方法有哪些 具体过程 第四步 目的基因的检测与鉴定 首先 其次 最后 还要 检测与鉴定哪些环节 具体方法 DNA分子杂交技术 基因探针 核酸分子探针是指特定的已知核酸片段 能与互补核酸序列退火杂交 用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测 满足 1 必须是单链 2 带有容易被检测出来的标记物 编码区上游 编码区下游 RNA聚合酶结合位点 RNA聚合酶结合位点 编码蛋白质 原核细胞 真核细胞 真核细胞 如图所示 将人的生长激素基因导入细菌B细胞内生产 工程菌 所用运载体为质粒A 已知细菌B内不含质粒A 也不含质粒A上的基因 质粒A导入细菌B后 其上的基因能得到表达 请回答下列问题 人工获得目的基因的途径一般有哪两条 以目的基因转录成的mRNA为模板 反转录单链DNA 按互补原则合成双链DNA 据蛋白质中氨基酸序列推测出mRNA中碱基序列 再根据碱基互补配对原则推测出DNA碱基序列 通过化学方法合成目的基因 如何将目的基因和质粒相结合形成重组质粒 用一定的限制酶切割质粒 使其出现一个有黏性末端的切口 用同种限制酶切割目的基因 产生相同的黏性末端 将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处 再加入适量的DNA连接酶 使质粒与目的基因结合成重组质粒 目前将重组质粒导入细菌细胞时 效率还不高 完成后得到的细菌 实际上有的根本没有导入质粒 有的导入的是普通的质粒B 只要少数导入的是重组质粒 此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒B或重组质粒 将得到的细菌涂布在一个有青霉素的培养基上 能够生长的就是导入了质粒B或重组质粒 反之则没有 使用这种方法鉴别的原因是 4 若把通过鉴定证明导入
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