5-中药指纹图谱.ppt

2020 2 25 1 SouthernMedicalUniversity 第五章中药指纹图谱FingerprintsofChineseMateriaMedica 2020 2 25 2 同一个成药 疗效一致吗 中药材不同品种 产地 加工 不同厂家 不同工艺 不同辅料 2020 2 25 3 2020 2 25 4 2020 2 25 5 含量一致 疗效一致 不同厂家银杏提取物的色谱指纹图谱 Rb1 Re Rg1 A 0 94 B 0 52 C 0 24 D 0 03 有效成分含量悬殊的人参GreatdisparityamongindividualGinsengroots 2020 2 25 7 白芷原药材与硫熏后的药材质量比较SeriouslossofmajorbioactivecomponentsinBaizhibysulfur fumigationProcess AngelicaeFormosanaeRadix 白芷 A Typicalsampleof BaiZhi B Sulfurfumedsampleof Baizhi currentpopularpractice Thesulfur fumigatedsampleshowedthemajorcoumarincontentshavebeendestroyedseriously lost60 80 Imporatorin Isoimporatorin 11Oxypeucedanin1013cnidilin12791234568 AB A B 2020 2 25 8 SharpcontrastofcrudedrugandslicesfordecoctionofPaeoniaeRadix 白芍 withdifferentcontentsofactiveglycosidesrespectively 有害的饮片加工 硫熏干燥的白芍饮片活性成分大减ActiveingredientsdeclinedBaishaoslicesfordecoctioncomparedwiththenaturaldriedcrudedrug Paeoniflorin sulphite 2020 2 25 9 质量相差悬殊的 连翘 药材Greatdisparityofingredientsindifferent Lianqiao crudedrugs 青翘 老翘 无籽老翘所含有效成分递减 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 10 2010版药典丹参提取物指纹图谱 原儿茶醛 迷迭香酸 丹酚酸B 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 11 中药指纹图谱的含义 掌握 中药经适当处理后 采用一定的分析手段 得到的能够标示该中药特征的共有峰的图谱 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 12 中药指纹图谱的特性 掌握 稳定性 重现性 整体性 模糊性 特征性 在规定的方法与条件下 不同的操作者和不同的实验室应能重复 能反映中药有效部位所含大部分成分的种类 或指标成分的全部 能特征地区分中药的真伪与优劣 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 13 指纹图谱研究的主要目的 对中药质量标准的补充和提高 控制原料 中间体 成品的一致性 控制工艺 减少批间差异 2020 2 25 14 相同处方 不同工艺 疗效 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 15 指纹图谱中应包含的信息 对于中药材和中药饮片 种的共性 用药部位的共性 产地的个性 采收期 炮制方法的个性信息 对于半成品和中药制剂 原药材 甚至辅料 的信息 工艺信息等 药效信息 药效信息 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 16 二 指纹图谱研究手段 色谱技术光谱技术UVIR波谱技术MSNMRX 射线衍射法分子生物学技术 TLCHPLC LC MSGC GC MSHPCE CE MS 色谱指纹图谱 薄层色谱 薄层色谱ThinLayerChromatography TLC 可在同板同时分析多达18个样品 时效高 所用的是正相展开剂 其组成变化灵活 可适应多种成分的分离 离线操作 即可直观比较图谱 又可扫描得到轮廓图和处理数据 占机时间短 具有色彩参数 可获得色彩丰富的色谱图像 直观性强 同时辅以功能团显色剂还可提示成分的类别 提高鉴别的专属性 展距局限在10cm 20cm 柱效 相对较低 对复杂组分不提高分离度则难以提取指纹特征的药材受到限制 开放系统 对环境温度 相对湿度要求较高 2020 2 25 18 TLC举例 区分不同品种 2020 2 25 19 TLC举例 监控工艺 高效液相色谱 反相高效液相色谱 RP HPLC ReversedPhaseHighPerformanceLiquidChromatography 适用范围广 分离性能好 分析速度快 流动相选择范围宽 灵敏度高 色谱柱可多次重复使用 流出组分可以收集 采用多种检测器 可同时获取保留值信息和化合物的光谱 质谱信息 对较为复杂的色谱实验条件要求比较苛刻 由此带来不同实验室之间重现性的难度增大 2020 2 25 21 2020 2 25 22 I III II 诃子 小诃子 大诃子 绒毛诃子 诃子指纹图谱 GCHPCE 气相色谱GasChromatography GC 分离效能高 分析速度快 适用于植物的挥发油成分及其它易挥发性成分或可转化为可挥发的成分测定 可提供保留值信息 与质谱联用 还可提供更丰富的化学结构信息 分辨率高 得到的色谱组份非常复杂 尤其是含挥发油药材 单萜类成分组成很不稳定 样品间差异可能很大 处理数据和判别相似度时一定程度的取舍 毛细管电泳CapillaryElectrophoresis 分离效能高 分析速度快 高分辨率 可与紫外 荧光 电化学 质谱 拉曼光谱等联用 可提供更丰富的化学结构信息 2020 2 25 24 肉桂油的气相色谱指纹图谱 2020 2 25 25 2020 2 25 26 2020 2 25 27 独活GC指纹图谱 羌活GC指纹图谱 2020 2 25 28 HPCE指纹图谱 高效液相色谱 红外光谱 IR InfraredSpectra 几乎所有的物质都有特征的红外光谱 虽然植物中药提取物还是一个混合物 但是由于不同物质的红外光谱具有加合性 因此 植物中药提取物的红外光谱能反映出所有成分的综合信息因而具有全息光谱的特点 操作简便 不需要复杂的提取仪器 快速 准确 经济 溶剂低毒 重复性高 实用性强 2020 2 25 30 红外光谱图 中国药典规定 小蓟在开花时采 根据1384cm 1处吸收峰的有无 可以鉴别其采集时间是否正确 小蓟丁酮提取物的红外指纹图谱 2020 2 25 31 三 指纹图谱构建程序 2020 2 25 32 一 样品收集 最关键的步骤真实性代表性10批以上原药材 不同产地 不同采收季节等 2020 2 25 33 Referencefingerprint 2020 2 25 34 二 供试品溶液制备 原则1 确保中药中的主要化学成分或有效成分在图谱中得以体现2 所含成分的理化性质和检测方法 2020 2 25 35 二 供试品溶液制备 1 原药材 饮片供试品溶液的制备尽可能与生产工艺的提取溶剂接近或一致定量操作进行 2020 2 25 36 二 供试品溶液制备 2 半成品 中间体供试品溶液的制备参考制剂和产品制备工艺 2020 2 25 37 二 供试品溶液制备 2 中药制剂供试品溶液的制备直接使用 稀释或溶剂提取的方式 2020 2 25 38 三 对照品 参照物 溶液制备 1 参照物的选择道地药材 饮片半成品制剂主要活性成分或指标成分内标物2 合适溶剂 2020 2 25 39 四 指纹图谱实验研究 原则 专属性 整体性 重现性试验方法试验条件 2020 2 25 40 液相色谱 色谱柱 比较试验加以选择 2020 2 25 41 流动相 至少用三种不同组成比较 2020 2 25 42 适宜的柱温和检测波长 15 20 25 30 35 203 210 236 254 365 2020 2 25 43 五 方法学验证 1 稳定性试验供试品溶液的稳定性 2020 2 25 44 表3川芎指纹图谱稳定性试验相似度计算结果 n 5 2020 2 25 45 五 方法学验证 3 重复性试验实验方法的重复性n 5峰面积比值RSD不大于3 保留时间 平均相对保留时间 1min 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 46 注意事项 HPLC和GC指纹图谱 记录时间一般为1小时 TLC指纹图谱 须提供从原点至溶剂前沿的图谱 光谱方法制定指纹图谱 必须按各种光谱的相应规定提供全谱 对于化学成分类型复杂品种 必要时可建立多张指纹图谱 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 47 四 指纹图谱分析步骤 标定共有指纹峰 确定参照峰 非共有峰总面积不得大于总峰面积的10 计算各共有峰的相对保留时间 峰面积比 给出标准 对照 指纹图谱及数据 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 48 五 指纹图谱的评价 要求 准确的辨认 而不是 精密的测量 比较供试品与对照品的色谱指纹图谱要求 相似 而不是 相同 评价色谱比较的结果 是根据其模糊属性 着眼于宏观的规律性的特征分析 即着重辨认完整色谱的 图貌 而不是求索细枝末节 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 49 指纹图谱相似度评价 直观分析比较 看一看量化数据比较 算一算 重叠率 相似率等 计算机辅助相似度评价 与标准指纹图谱相比 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 50 重叠率和相似率计算 重叠率 共有峰数 2 指纹图谱峰数 供试品峰数 100 特征指纹峰相似率 指纹图谱中特征指纹峰面积 供试品图谱中特征指纹峰面积 100 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 51 例 银杏提取物EGB761 EGB761中含总黄酮成分24 萜类内酯6 原花青素类7 0 羧酸类成分13 0 儿茶素类2 0 非黄酮类苷类20 高分子化合物4 0 无机物5 0 水分溶剂3 0 其他3 0 有害成分银杏酸类 5ppm 2020 2 25 52 银杏叶提取物指纹图谱 芦丁 2020 2 25 53 银杏叶提取物及制剂指纹图谱 2020 2 25 SouthernMedicalUniversity 54 小结 中药指纹图谱是一种量化的鉴别手段 指纹图谱必须符合整体性 特征性 稳定性 关联性的基本要求 指纹图谱与药效相结合才有现实意义 特征指纹