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文档简介

细菌的简单染色 目的要求 学习微生物涂片 染色的基本技术 掌握细菌的简单染色法 初步认识细菌的形态特征 学习显微镜 油镜 的使用方法 熟悉无菌操作技术 细菌染色意义 由于细菌个体微小 基本上无色透明 故将其用适当染料染色观察 方能显示它的形态 大小 构造及染色特性等 在细菌鉴别上有重要意义 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法 籍此染色法 可将所有细菌区分为两大类 简单染色 利用单一染料对菌体进行染色 染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物 前者赋予染料颜色特征 后者使染料能形成盐 常用的微生物细胞染料都是盐 分酸性染料和碱性染料两大类 美蓝 即亚甲蓝 结晶紫 碱性复红 番红 即沙黄 孔雀绿等都属于碱性染料 酸性复红 伊红及刚果红属于酸性染料 细菌染色方法及原理 1 在中性 碱性或弱酸性溶液中 细菌细胞通常带负电荷 碱性染料在电离时 其分子的染色部分带正电荷 易与细胞结合使其着色 2 细胞处于酸性条件下 如细菌分解糖类产酸 所带正电荷增加 可采用酸性染料染色 革兰染色原理 细菌的等电点较低 约在pH2 5之间 故在中性 碱性或弱碱性溶液中 菌体蛋白质电离后带负电荷 易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合 使细菌被染成紫色或红色 材料 菌种金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌染色剂仪器或其他用具 显微镜酒精灯载玻片接种环香柏油二甲苯擦镜纸生理盐水等 涂片 干燥 固定 染色 水洗 镜检 简单染色方法 干燥 1 涂片 取一块干净的载玻片 平放 在载玻片中央滴一小滴生理盐水 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜 注意 载玻片要洁净无油迹 滴生理盐水和取菌不宜过多 涂片要涂抹均匀 不宜过厚 2 干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥 也可用电吹风低温吹干 3 固定 手持 木夹夹住 已干燥的涂有菌膜的载玻片 涂面朝上 在酒精灯火焰上通过2 3次 原理 加热使细菌细胞的蛋白质凝固 从而固定细菌细胞形态 并使之牢固附着在载玻片上 注意 热固定温度不宜过高 否则会改变甚至破坏细胞形态 4 染色 将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上 滴加染液于涂片上 染液刚好覆盖涂片薄膜为宜 染色时间 吕氏碱性美蓝染色1 2min 石炭酸复红染色约1min草酸铵结晶紫染色约1min 5 水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中 手持细菌染色涂片 置于废液缸上方 用洗瓶中自来水冲洗涂片 直至流下的水无色为止 注意 水洗时 不要直接冲洗涂面 而应使水从载玻片的一端流下 水流不宜过急 过大 以免涂片薄膜脱落 6 干燥 自然干燥 平放于室温 自然干燥 吹干 用电吹风冷风或低温热风吹干 吸
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