山东省自然科学基金申请书(格式模(1).doc

项目类别学科代码 山 东 省 自 然 科 学 基 金 申 请 书申 请 编 号 项 目 名 称 靶向性溶瘤腺病毒CRAd5.shSLUG治疗非小细胞肺癌的研究 申 请 者 依 托 单 位 申 请 金 额 联 系 电 话 电 子 信 箱 申 请 日 期 山 东 省 自 然 科 学 基 金 委 员 会 办 公 室二一年 制填 报 说 明一、 填写申请书前，请先认真查阅山东省自然科学基金管理办法及当年有关申报通知，确认是否具备所要申报项目类别的资格。二、 实事求是，逐条认真填写申请书（含封面）各项内容，黄色框为必须填写的内容。表达要清晰、严谨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。请使用Office Word 2003以上版本软件进行编辑。三、 封面左上角填写项目类别：重点项目、面上项目、青年基金项目、企业联合基金项目。 时间的填写格式为：yyyy-mm-dd。四、 简表部分栏填写要求：1、 所属学科：应尽量根据学科代码分类细化。若属交叉学科，可填两个，学科1为主学科。2、 学科代码：与所属学科相对应，采用国家自然科学基金委代码系统，请在相关网站查询。数理科学A，化学科学B，生命科学C，地球科学D，工程与材料科学E，信息科学F，管理科学G, 医学科学H。3、 项目性质：基础研究-指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。应用基础研究-指有广泛应用前景，但以获取新知识、新原理、新方法为目的的应用理论研究。 4、联合专项：是指主要以高校、科研单位出资，专门资助本单位科技人员的基础和应用基础研究课题，管理参照其他类自然科学基金项目。五、 项目组成员部分须征求本人意见，如实填写。若项目立项，填写立项任务书时，前五位人员不得更改。一、信息简表项目情况项目名称 靶向性溶瘤腺病毒CRAd5.shSLUG治疗非小细胞肺癌的研究 项目性质 02 01 基础研究 02应用基础研究所属学科名称1 学科代码1 名称2 学科代码2 起止时间自 年 月至 年 月申请金额 万元申请者姓名 性别 出生年月 民族 所在院系或部门 专业技术职务 学位 获得时间 学术专长 依托单位单位名称 邮政编码 详细地址 联系人 联系电话 手机 电子信箱 项目组总人数高级职称中级职称初级职称辅助人员在读博士后在读博士生在读硕士生 是否申报联合专项 1是 0否申请者是否主持过国家自然科学基金项目 1是 0否申请者当年是否申报国家自然科学基金项目 1是 0否在此之前主持过几项省自然科学基金项目（未主持过填写0） 研究内容摘要（400字以内） 肺癌是当今世界各国最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率呈不断上升趋势,对人类的健康和生命构成了极大威胁。基因治疗为肺癌的治疗提供了一种新的手段。本课题首先在临床标本中检测SLUG基因的表达，分析SLUG表达与肺癌发生发展之间的关系，然后利用靶向性溶瘤腺病毒载体CRAd5.shSLUG，特异性的在肺癌细胞系中进行干扰，利用Western blot、实时荧光定量PCR、免疫荧光等方法研究shSLUG对肺癌细胞的生长抑制作用，因此具有重要的理论意义和实际应用价值。 二、项目组成员姓名性别年龄专业技术职务学历学位专业工作单位在本项目中的分工每年用于本项目工作的月数签字 三、本研究的立项依据（3000字以内）请按以下提纲填写：1、 研究意义（对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义；对应用基础研究，着重结合科学前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景）；2、 国内外研究现状；3、 本项目的创新之处；4、 主要参考文献及出处（格式：论文作者题目刊名年份卷(期)页码专著作者书名出版者年份）。 1、研究意义（对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义；对应用基础研究，着重结合科学前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用前景）；肺癌是当今世界各国最常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率呈不断上升趋势,对人类的健康和生命构成了极大威胁1。在中国,肺癌每年大约导致40万例患者死亡,已成为发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。研究显示I期肺癌术后10年生存率可达到92%。然而肺癌早期不易诊断,恶性程度高,一经病理确诊多数已属晚期,失去手术治疗的最佳时机,总的5年生存率仅为15%左右。因此,要降低肺癌患者的死亡率关键在于肺癌的早期发现、早期诊断和早期治疗。肺癌的发生是多因素、多基因和多阶段发展的复杂过程,由于传统的影像学检查和支气管镜等检查手段存在敏感性、特异性和适用度等方面的局限,近年来国内外学者对肺癌早期预警或诊断相关的分子标志和多种肿瘤生物标志的联合检测做了大量有益的探索,以期找到更合理、敏感性和特异性更高的分子联合标志2。肺癌的发生是环境因素和遗传因素共同作用的结果,因此在寻找肺癌早期预警或诊断的生物标志时,也可以从两方面着手,即反映机体先天具有或后天获得的对外源性物质产生反应能力的易感性标志；反映早期生物效应、结构和/或功能改变以及疾病的效应标志。因此探寻有意义的靶标分子具有重要的现实意义。2、国内外研究现状；近来发现,上皮细胞间质转分化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)是肿瘤发生发展的重要机制。上皮细胞转分化是一个有序的发生过程,E-cadherin介导的细胞-细胞的粘附功能丧失被认为是EMT的关键步骤3, 4。EMT最早期改变就是E-cadherin的表达抑制,随着E-cadherin的丢失,细胞间的紧密连接遭到破坏,使上皮细胞失去粘附特性。Slug基因属于锌指转录因子超家族成员,可以通过与靶基因的E-box结构域结合从而抑制其转录5。在多个细胞系统研究中发现,SLUG通过与E-cadherin启动元件E-box结合,对E-cadherin的转录进行直接抑制,下调其表达,从而使上皮细胞间失去粘附,促进EMT的发生,参与胚胎发育、肿瘤转移及组织纤维化过程。EMT信号系统中多个重要信号途径如转化生长因子-1-Smad、Wnt/-catenin/淋巴增强因子、Ras/MAPK/细胞外调节蛋白激酶通路等均可调节调节SLUG基因在细胞内的表达6, 7。但SLUG在肺癌细胞EMT过程中作用机制的研究尚未见报道。本研究拟采用腺病毒携带shRNA技术,探讨SLUG基因在EMT中的作用机制,为防治肿瘤的粘附与转移提供新的思路。本研究以临床标本为SLUG的检测基因，利用临床和实验的结合，探讨SLUG在非小细胞肺癌发生、发展中的作用，为最终治疗非小细胞肺癌提供临床和实验依据。3、本项目的创新之处；1）利用临床标本研究SLUG在肺癌癌组织、癌旁组织的表达与病人生存率等的关系具有重要的临床指导意义； 2）利用靶向性溶瘤腺病毒携带特异的shSLUG小干扰片段，可以持续有效的产生干扰效果，对研究SLUG的功能以及在体外对肿瘤细胞的影响具有重要的实验意义和临床指导价值。4、主要参考文献及出处（格式：论文作者题目刊名年份卷(期)页码专著作者书名出版者年份）。1）Zhou, C., et al., Erlotinib versus chemotherapy as first-line treatment for patients with advanced EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer (OPTIMAL, CTONG-0802): a multicentre, open-label, randomised, phase 3 study. Lancet Oncol, 2011. 12(8): 735-42.2）Shi, Y., et al., Prognostic and predictive values of pERK1/2 and pAkt-1 expression in non-small cell lung cancer patients treated with adjuvant chemotherapy. Tumour Biol, 2011. 32(2):381-90.3）Reungwetwattana, T., S.J. Weroha, and J.R. Molina, Oncogenic pathways, molecularly targeted therapies, and highlighted clinical trials in non-small-cell lung cancer (NSCLC). Clin Lung Cancer, 2012. 13(4):252-66.4）Pirozzi, G., et al., Epithelial to mesenchymal transition by TGFbeta-1 induction increases stemness characteristics in primary non small cell lung cancer cell line. PLoS One, 2011. 6(6):e21548.5）Vitali, R., et al., Slug (SNAI2) down-regulation by RNA interference facilitates apoptosis and inhibits invasive growth in neuroblastoma preclinical models. Clin Cancer Res, 2008. 14(14):4622-30.6）Uchikado, Y., et al., Slug Expression in the E-cadherin preserved tumors is related to prognosis in patients with esophageal squamous cell carcinoma. Clin Cancer Res, 2005. 11(3):1174-80.7）Peinado, H., D. Olmeda, and A. Cano, Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progression: an alliance against the epithelial phenotype? Nat Rev Cancer, 2007. 7(6):415-28. 四、检索查新编号及结论检索查新报告编号 查新机构名称 五、研究方案1、 研究内容、研究目标和拟解决的关键科学问题（3000字以内） 1、研究内容、研究目标和拟解决的关键科学问题1.1 研究内容1）针对SLUG基因mRNA的RNA干扰质粒的构建根据人SLUG基因的mRNA,采用RNAi设计软件,进行全基因组扫描和序列同源性分析,设计针对Genbank中SLUG基因的特异siRNA,同时设计序列相同的阴性对照组。采用shRNA的腺病毒表达载体的方法体外制备人类SLUG基因的shRNA表达载体。利用实时荧光定量PCR、MTT、Western blot、免疫荧光等检测SLUG基因的表达，以及下游靶向基因Bcl-2、E-cdherin的表达，从而阐述SLUG shRNA的干扰效果。2）从临床非小细胞肺癌患者的SLUG表达出发，研究SLUG与非小细胞肺癌患者的生存率、骨转移等因素的关系，为解决非小细胞肺癌患者的发生、发展提供了临床依据。 2、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析（2000字以内）。 2、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析2.1 技术路线与研究方法22 可行性、可靠性论证以临床标本的检测为出发点，研究单一SLUG基因的功能，对于非小细胞肺癌的发生、发展的研究以及临床和实验的相互结合具有重要的指导意义，并且在理论和实践上都是可行的。 3、研究计划的总体进度及安排（1000字以内） 3.1 2013.01-2013.12完成非小细胞肺癌癌旁、癌组织的临床标本中SLUG基因表达的检测，并就病程相关性与SLUG基因的表达进行相关的统计学分析。4.2 2014.01-2014.12完成腺病毒Ad5.shSLUG基因在体外对肺癌细胞增殖影响的研究。4.3 2015.01-2015.12结果整理，并撰写相关论文和申请相关专利。 4、 本研究的特色及主要创新点（1000字以内） 1） 从临床非小细胞肺癌患者的SLUG表达出发，研究SLUG与非小细胞肺癌患者的生存率、骨转移等因素的关系，为解决非小细胞肺癌患者的发生、发展提供了临床依据。2） 利用体内外实验，研究Ad5-shSLUG腺病毒治疗非小细胞肺癌的效果，为临床治疗非小细胞肺癌提供了实验依据。 5、 研究工作的成果形式及知识产权、技术水平、市场前景及产业化后经济、社会效益预期结果（1000字以内） 本研究可以从分子水平阐述SLUG在非小细胞肺癌中的发生、发展机理，为最终治疗非小细胞肺癌提供了实验和临床依据，本项目的完成可以发表相关的学术论文2篇、申请发明专利1项。 六、研究基础与条件（一）、申请者1、申请者的研究工作简历（按照时间先后顺序列出大学以上学历、所获学位、授予单位以及主要学术任职、主要科研工作经历） 2、申请者近五年承担的项目情况（包括国家、省部级及厅局、市级各类科技发展计划、国家及省自然科学基金计划）项目编号项目名称资助金额位次计划类别计划下达单位起止年月完成或进展情况 3、申请者近五年发表的与本项目有关的代表性论著（不超过10篇）发表时间论著名称发表刊物、出版社本人位次收录情况影响因子备注 4、申请者近五年完成的科研成果名称以及获奖情况（仅限省部级以上奖励）授予时间成果名称奖励名称等级完成人本人位次授予单位 （二）、项目组其他成员（请