第一篇　细菌学 第七章 细菌感染的检测方法与防治原则

作者 张力平 单位 首都医科大学 第七章 细菌感染的检测方法与防治原则thedetectionmethodandcontrolprincipleofbacterialinfection 第一节细菌感染的实验室诊断 第二节细菌感染的特异性防治 第三节细菌感染的抗菌药物治疗原则 重点难点 1 细菌感染的实验诊断方法的原理与应用2 疫苗的种类 1 细菌感染的实验室检验流程2 常用疫苗的特点 细菌感染的抗菌药物治疗原则 医学微生物学 第9版 细菌感染的实验室诊断laboratorydiagnosisofbacterialinfection 第一节 细菌感染的实验室检测方法 医学微生物学 第9版 一 临床标本的采集与运送原则 医学微生物学 第9版 二 细菌的形态学检查 二 细菌的形态学检查 细菌的染色 革兰染色 抗酸染色 荧光金胺O染色 其他特殊染色 医学微生物学 第9版 葡萄球菌 革兰染色阳性 大肠埃希菌 革兰染色阴性 医学微生物学 第9版 革兰染色结果 张力平提供 细菌检查的一般程序 三 细菌的分离培养与鉴定 标本 脓 痰 尿等 血液 脑脊液 涂片 染色 镜检 分离培养 纯培养 染色镜检生化反应血清学鉴定药敏试验 增菌 医学微生物学 第9版 1 细菌的分离培养 是微生物学诊断的金标准 是最可靠的传统诊断技术 1 培养基的营养成分 2 酸碱度 pH 3 培养时间 4 温度 5 气体环境 三 细菌的分离培养与鉴定 在血平板上的肺炎链球菌菌落 张力平提供 医学微生物学 第9版 血平板上的完全溶血环 引用资源ID678481 细菌对糖类和蛋白质的分解产物不完全一样 故有关酶类和代谢产物可作为鉴别细菌的重要依据之一 2 生化试验 三 细菌的分离培养与鉴定 肠道感染细菌在含铁双糖培养基上的生化反应 张力平提供 医学微生物学 第9版 3 血清学鉴定 三 细菌的分离培养与鉴定 1 利用已知的特异性抗体检查未知的纯培养细菌 2 对细菌进行种 群 型的鉴定 沙门菌血清学鉴定 倪语星尚红 临床微生物检验 第5版PPT 医学微生物学 第9版 4 药物敏感试验 antimicrobialsusceptibilitytest 最低抑菌浓度 minimuminhibitoryconcentration MIC 能够完全抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度最低杀菌浓度 minimumbactericidalconcentration MBC 能够杀死培养基中细菌的最低药物浓度方法 纸片扩散法 稀释法 E test法 三 细菌的分离培养与鉴定 医学微生物学 第9版 4 药物敏感试验 1 纸片扩散法在琼脂平板上接种待检病原菌 贴含有定量抗生素的纸片后培养 纸片上的抗生素向周围琼脂中扩散 形成了逐渐减小的药物浓度梯度 根据药物纸片周围抑菌环的有无和大小来判定试验菌对该抗菌药物耐药或敏感 三 细菌的分离培养与鉴定 医学微生物学 第9版 4 药物敏感试验 2 稀释法以一定浓度的抗菌药物与含有待检细菌的培养基进行一系列不同倍数稀释 通常为双倍稀释 经培养后观察其最低抑菌浓度 方法琼脂稀释法 使用琼脂培养基肉汤稀释法 使用肉汤培养基 三 细菌的分离培养与鉴定 医学微生物学 第9版 4 药物敏感试验 3 浓度梯度琼脂扩散法 E test法 简称浓度梯度法将稀释法和扩散法的原理相结合 使用预先设定的稳定且连续的抗菌药物浓度梯度 采用琼脂培养基培养以确定不同抗菌药物对微生物的最低抑菌浓度 MIC 三 细菌的分离培养与鉴定 医学微生物学 第9版 E test试验结果 张力平提供 5 自动微生物鉴定及药敏分析系统 将培养基上分离的可疑致病菌配制成纯菌液 放入自动微生物鉴定及药敏分析系统中 通过计算机自动扫描 读数 分析 最后报告鉴定及药敏结果 三 细菌的分离培养与鉴定 自动微生物鉴定及药敏分析系统 张力平提供 医学微生物学 第9版 药敏检测原理 微型化的肉汤稀释试验根据CLSI标准得到相应敏感度 敏感 中度敏感和耐药 微生物数码鉴定原理 计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和 性能特点 自动化程度较高 检测速度快 可鉴定细菌种类及药敏试验种类多 数据处理软件功能强大 结果准确可靠 系统组成 测试卡 板 菌液接种器 培养和监测系统 数据管理系统 自动微生物鉴定及药敏分析系统 医学微生物学 第9版 四 细菌成分的检查 1 免疫学检验技术 医学微生物学 第9版 用已知抗体检测待检标本中未知的颗粒性抗原 IgG的Fc段与金葡菌的SPA结合 Fab段与细菌抗原结合后 可使金葡菌发生肉眼可见的凝集现象 用已知的荧光抗体检测待检标本中的未知抗原 借助荧光显微镜观察 用酶标抗体检测特异性可溶性抗原 利用双向琼脂扩散与电泳技术相结合的方法 由于电泳和电渗作用 抗原向正极移动 抗体向负极移动 在比例合适处形成肉眼可见的沉淀线 凝集试验 协同凝集试验 免疫荧光试验 酶免疫技术 对流免疫电泳 2 分子生物学检验技术 四 细菌成分的检查 医学微生物学 第9版 PCR技术 可用于常规培养困难或耗时太长的病原体以及细菌毒素基因的检测 核酸杂交技术 可从标本中直接检出病原菌基因 对尚不能或难以分离培养的病原菌尤为适用 高通量测序技术 可用于病原菌的分类鉴定 菌群结构和物种多样性的分析和系统发育研究 具有检测未知病原体的应用前景 3 质谱分析法 massspectrometry 质谱法是将有机化合物的分子电离 碎裂 然后按照离子的质荷比 m z 大小把生成的各种离子分离 检测其强度并排列成谱 根据细菌的蛋白质质谱图 与数据库中的细菌参考谱图比对 对细菌的属 种 甚至不同亚种进行鉴定与分类 常用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALDI TOFMS 该技术具有简便快速 准确度高 重复性好 低成本 自动化和高通量等特点 四 细菌成分的检查 医学微生物学 第9版 4 生物芯片技术 biochiptechnology 将核酸片段 蛋白质或酶 抗原或抗体 细胞及组织等生物样品有序地固定于硅片 尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应 用化学荧光法 酶标法或同位素法显示反应结果 通过特定的仪器读取与收集数据 并用软件进行数据分析 从而判断样品中靶分子的种类和数量 分类 液态芯片 固态芯片 蛋白芯片 基因芯片 糖芯片 细胞芯片等 四 细菌成分的检查 医学微生物学 第9版 4 生物芯片技术 用途微生物感染的快速诊断 对某些病原体多重快速检查与鉴别 微生物变异机制和耐药机制的研究 微生物基因分型及分子流行病学的调查 微生物基因组及后基因组的研究 可研究病原体基因的序列 转录表达及抗原的表达 抗微生物感染药物的研制等 四 细菌成分的检查 医学微生物学 第9版 用已知的细菌或其特异性抗原检测病人血清或其他体液中的抗体及其效价的变化 可以作为感染性疾病的辅助诊断 由于本实验多采取病人血清检测抗体 故常称为血清学诊断 serologicaldiagnosis 一般适用于抗原性较强的细菌 以及病程较长的感染性疾病 也可用于调查人群对某病原菌的免疫应答水平以及检测疫苗接种后的预防效果 五 细菌感染的血清学诊断 医学微生物学 第9版 细菌性感染的血清学诊断 医学微生物学 第9版 细菌感染的特异性防治specificpreventionandtreatmentofbacterialinfection 第二节 机体获得特异性免疫力的方式 医学微生物学 第9版 自然免疫 主动免疫 隐性或显性感染被动免疫 获得母体的Ab 胎盘 初乳 人工免疫析 主动免疫 疫苗被动免疫 抗毒素或丙种球蛋白等 人工主动免疫 artificialactiveimmunization 是将疫苗接种于人体 刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答 机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施 主要用于特异性预防 采用人工主动免疫方法通常称为预防接种 prophylacticinoculation 或疫苗接种 vaccination 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 疫苗的种类死疫苗 killedvaccine 亦称灭活疫苗 inactivatedvaccine 用物理 化学方法杀死病原微生物 但仍保持其免疫原性的生物制剂 常用的有 伤寒 霍乱 流行性脑膜炎 钩端螺旋体病等 活疫苗 livingvaccine 亦称减毒活疫苗 attenuatedvaccine 是通过毒力变异或人工选择法 如温度敏感株 而获得的减毒或无毒株 或从自然界直接选择出来的弱毒或无毒株经培养后制成的疫苗 常用的有 卡介苗 鼠疫 炭疽等细菌性减毒活疫苗 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 活疫苗与死疫苗的比较 疫苗的种类类毒素 toxoid 外毒素经0 3 0 4 甲醛处理后 失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品 加入吸附剂 佐剂 氢氧化铝后便制成精制类毒素 吸附剂可延缓类毒素在体内的吸收时间 刺激机体产生足量的抗毒素 举例 白喉类毒素 破伤风类毒素 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 疫苗的种类多糖疫苗 carbohydratevaccine 提取纯化细菌中能引起特异性保护作用的多糖成份制备而成 成分单一 不存在易引起免疫副反应的物质 更为安全有效 已成为应用最多的疫苗之一 在临床上被广泛使用的荚膜多糖疫苗包括 肺炎链球菌 脑膜炎奈瑟菌 流感嗜血杆菌荚膜多糖疫苗等 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 疫苗的种类多糖结合疫苗将细菌的聚糖共价连接到适当的蛋白载体上而制备形成 TI Ag转变TD Ag 抗体IgM为主向IgG为主转变 抗体亲和力更强 效价更高 持续时间也更长 目前上市的细菌多糖蛋白结合疫苗有 b型流感嗜血杆菌 脑膜炎球菌和肺炎球菌等多糖结合疫苗 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 疫苗的种类联合疫苗 combinedvaccines 由不同抗原组分混合制成的疫苗 包括多联疫苗与多价疫苗 多联疫苗 由两种或两种以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多种免疫原性的疫苗 可同时预防多种疾病 如 百白破疫苗 DTP 多价疫苗 由同一种细菌的不同亚型或不同血清型抗原合并组成的含多价抗原成分的一种疫苗 典型的如23价肺炎球菌多糖疫苗 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 疫苗的种类基因工程疫苗 geneengineeredvaccine 是利用基因工程技术将编码病原体保护性抗原表位的目的基因导入原核或真核表达系统中 利用表达的抗原产物或重组体本身制成的疫苗 基因工程亚单位疫苗 基因工程载体疫苗 核酸疫苗 基因缺失活疫苗等 一 人工主动免疫 医学微生物学 第9版 抗毒素 antitoxin 将类毒素或外毒素给马免疫制成 用途 外毒素所致疾病的治疗和紧急预防 精制破伤风 白喉和肉毒抗毒素以及多价精制气性坏疽抗毒素等 使用这些异种抗毒素时应注意避免 型超敏反应的发生 二 人工被动免疫 医学微生物学 第9版 丙种球蛋白 gammaglobulin 血清丙种球蛋白 胎盘丙种球蛋白 用途 某些感染性疾病的紧急预防 烧伤患者预防感染 丙种球蛋白缺乏症患者 经长期化疗或放疗的肿瘤患者等 抗菌血清 antisera 已基本被淘汰 对于由铜绿假单胞菌多重耐药菌株所引起的严重烧伤疾病感染的治疗 尚可以考虑试用 二 人工被动免疫 医学微生物学 第9版 两种人工免疫方法的比较 医学微生物学 第9版 细菌感染的抗菌药物治疗原则theprinciplesofantimicrobialtherapyforbacterialinfection 第三节 主要采用抗菌药物来治疗细菌感染 抗菌药物一般是指具有杀菌或抑菌活性的药物以及由微生物合成的抗生素类药物 正确合理应用抗菌药物是提高疗效 降低不良反应发生率以及减少或减缓细菌耐药性发生的关键 医学微生物学 第9版 诊断为细菌性感染者 方有指征应用抗菌药物 尽早查明感染病原 根据病原种类及抗菌药物敏感试验结果选用抗菌药物 按照药物的抗菌作用特点及其体内代谢过程特点选择用药 抗菌药物治疗方案应综合患者病情 病原菌种类及抗菌药物特点制订