HLA-Ⅱ类基因与红斑狼疮自身抗体相关性研究.doc

HLA-类基因与红斑狼疮自身抗体相关性研究HLA-类基因与红斑狼疮自身抗体相关性研究2010-02-22 谢尚葵冯树芳沈福民 【摘要】目的分析HLA-类等位基因与自身抗体的相关性，探讨系统性红斑狼疮的自身抗体反应类型。方法应用聚合酶链反应/序列特异寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOPH)检测技术对113例确诊SLE病人进行HLA-DR、DQA1和DQB1基因分型。结果抗dsDNA与DQB1*1601和DRB3*0301负相关；ANA与DRB3*0202和DQA1*0501正相关；抗RNP与DQA1*0301正相关，与DQA1*0103负相关；抗La与DQA1*0501正相关；RF因子与DQB1*0501负相关。结论不同的HLA等位基因介导不同的自身抗体反应类型，同一基因位点的不同等位基因对抗体反应的影响作用有明显差异，甚至作用相反。 【关键词】红斑狼疮，系统性临床特征多因子遗传人白细胞抗原基因多态性遗传易感性 Relationship of HLA- alleles autoantibody to lupus erythematosusXIE Shangkui,FENG Shufang,SHEN Fumin.Shanghai Huashan Hospital,Shanghai 200040 【Abstract】ObjectiveTo investigate the relationship between HLA alleles and autoantibodies.MethodsThe HLA-DR and DQ alleles were typed by the PCR-SSOPH in 113 diagnosed patients with systemic lupus erythematosus.ResultsThe anti-dsDNA associated with DRB1*1601 and DRB3*0301 negatively,ANA with DRB3*0202 and DRA1*0501 positively,anti-RNP with DQA1*0301 positively and with DQA1*0103 negatively,anti-La with DQA1*0501 positively,DQB1*0501 with rheumatic factor negatively.ConclusionDifferent HLA alleles affect the same autoantibody response,the different alleles at the same loci impact the responses on different ways,even on the opposite. 【Key words】Lupus erythematosus,systemicClinical featuresMultifactorial inheritanceHuman leukocyte antigenGenetic polymorphismGenetic susceptibility 国外已有大量证据表明HLA拥有多个SLE易感基因，是SLE发病相关的主要座位。SLE相关的HLA基因存在明显的种族、地区因素差异性，多数报道易感基因与SLE自身抗体的特异性比与SLE本身强。我们引入聚合酶链反应/序列特异寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOPH)检测技术，对上海地区113例确诊SLE病人进行HLA-DR、DQ位点基因分型，进而分析等位基因与SLE自身抗体的相关性，探讨遗传因子介导自身免疫反应机制。 1资料与方法 1.1研究对象 113例SLE患者均符合1982年SLE ARA诊断标准14条或4条以上。 1.2观察指标 记录病程中自身抗体检测结果，包括抗核抗体(ANA)、抗dsDNA抗体、抗ENA抗体(包括免疫印迹法测定的抗RNP、抗Sm、抗Ro/SSA、抗La/SSB)、类风湿因子(RF)等。 1.3标本 外周静脉血5 ml(抗凝)。 1.4实验方法 1.4.1基因组DNA的提取：盐析法2。 1.4.2DNA体外扩增聚合酶链反应(PCR)：共有6对引物，其中AMP-B为DR位点扩增的共用引物，均由第十一届国际组织相容性抗原会议(IHWC)3提供，所有引物均扩增基因的第二外显子，扩增产物DRB1(generic)274 bp，DR2-DRB1 261 bp，DR52-DRB3 271 bp,DR52 associated-DRB1 266 bp。 1.4.3斑点杂交：计有探针DRB 11个，DQA 12个，DQB 15个。采用Boeheringer Mannheim公司生产的DIG Oligonucleotide 3-End Labeling kit作探针标记及使用DIG Nucleic Acid Detection kit检测杂交结果，均按试剂盒说明操作。 1.5统计学处理 拟合优度测验、卡方相关分析，以P0.05为具统计学显著性。 2结果 2.1HLA 类基因分型 2.1.1等位基因分型结果：用12个DQA1探针检出7个亚型；用15个DQB1探针检出12个等位基因；用4个DR2探针检出4个亚型；用4个DR52组探针检出3个亚型；用8个DR52相关组探针分出9个亚型，见表1。 表1等位基因的阳性率 z 例数 率(%) z 例数 率(%) DQA1* DR2组 0101 26 23.0 DRB1* 0102 43 38.1 1501 25 22.1 0103 32 28.3 1502 21 18.8 0201 20 17.7 1601 17 15.0 0301 48 42.5 1602 13 11.5 0501 24 21.2 DR52组 0601 16 14.2 DRB3* DQB1* 0101 4 3.5 0201 23 20.4 0202 22 19.5 0301 30 26.5 0301 14 12.4 0302 19 16.8 DR52相关组 0303 32 28.3 z 0302 19 16.8 DRB1* 0303 32 28.3 0301 19 16.8 0401 11 9.7 0302 6 5.3 0402 2 1.8 1101 12 10.6 0501 11 9.7 1103 5 4.4 0502 11 9.7 1202 5 4.4 0503 1 0.9 1301 2 1.8 0601 29 25.3 1304 28 24.8 0602 32 28.3 1305 2 1.8 0605 3 2.7 1403 2 1.8 2.1.2H-W吻合度测验结果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值与观察值很好吻合，分 别P0.1和P0.5，说明基因已达到遗传平衡，本组病人可作为可靠的供研究的群体资料。 2.2等位基因与自身抗体的相关性 DRB1*1601与抗dsDNA负相关；DRB3*0202与ANA正相关；DRB3*0301与抗dsDNA负相关；DQA1*0103与抗RNP负相关；DQA1*0301与抗RNP正相关；DQA1*0501与ANA和抗La正相关；DQB1*0501与RF因子负相关(见表2)；均P0.05。 表2自身抗体与HLA-类基因的相关性 等位基因 自身抗体 N1/N2 N3/N4 2 P值 DQA1*0103 抗Ro阳性 26/74 5/30 3.48 0.06 抗RNP阳性 22/56 9/49 6.69 0.04 DQA1*0301 抗RNP阳性 17/56 27/49 6.75 0.03 DQA1*0501 ANA阳性 1/24 23/89 5.31 0.02 抗La阳性 11/69 12/35 4.54 0.03 抗Ro/La阳性 8/59 15/46 5.48 0.04 DQB1*0501 RF阳性 7/33 1/15 7.05 0.03 抗dsDNA阳性 7/38 4/61 3.34 0