高效液相色谱的操作规程.doc

岛津LC20A高效液相色谱操作规程一、仪器开机过程1、开机前的检查工作在开机前，首先检查柱子与检测器（目前连接的是示差检测器）是否连接完好。实验过程中只能使用一种检测器，将使用的柱子直接接入相应的检测器。（注：标有“IN”/蓝色的管路为进液管，标有“OUT”/白色的管路为流出废液管）柱子有方向性。2、液相色谱的开机顺序及自检首先打开柱温箱及检测器的开关，最后打开泵开关。开启后检查是否有如下界面：紫外检测器： 254nm 0.00 AU D2 1.0 AV/V柱温箱：SET ACTUAL T.MAX 泵： 1.000ml max 20.0 5.3 MPa min 0.0示差检测器： 0 over 100 A(注：自检需要12min，如果出现“CHECK- GOOD”为正常；出现“CHECK-NO GOOD”为故障需与工程师联系)3、电脑开机及软件的进入方式打开电脑，点击桌面图标“LC Solution”，打开后点击“仪器1”（上方方框）进入操作界面。在操作栏中找到“LC：就绪”，出现两声爆鸣声，即表示开机正常。如不出现“LC：就绪”可以在左侧边栏中找到“系统配置”中的“自动配置”，点击“自动配置”将自动添加或更改检测器。如果完成以上操作后，仍未出现“LC：就绪”，与工程师联系。4、上样前的排空工作（很重要） 刚开机以及换流动相时都要做排空（1）点击电脑控制泵的图标（机器上的“PUMP”灯灭），确认泵处 于关闭状态。（2）逆时针旋转泵上的排空阀90度以上 （3）按“purge”键（4）屏幕上出现“purging line” （5）再按“purge”键 （6）顺时针关闭排空阀（注：此过程大概需要3min，且每次使用前都必须排空。转不动的时候为关，即顺时针为关闭，则走柱子，可进行实验；逆时针转动为开阀，即不进柱子，将泵里空气和废液排空。）5、排空后电脑操作过程点击“文件”菜单下的“打开文件”，检查一下方法是否准确。先在电脑上调出方法文件，方法如果不改的话，点击下载；如果更改的话，先保存方法后点击下载。然后在电脑上点仪器开关（注：图标凹陷表示打开，点仪器开关后，所有的泵、柱温箱开关都打开）。开泵后，如果使用示差检测器的话，就要点击Rflow和Balance，用于冲洗参比池和检测池。首先点击Rflow，屏幕出现0和Over的时候，关掉Rflow。点击Balance，检测冲洗的效果。Balance数字会上升然后再下降，直到0左右。这个过程可以重复数次，知道Balance显示0为止。这个时候系统一直以方法文件中的参数运行，待基线平稳后，准备进样。6、单次运行方式及参数设定点击“单次运行”按钮，出现“采集信息、数据文件、方法文件、进样体积”对话框。将“数据文件”重新命名，“进样体积”设定为20L。点击“确定”，弹出“开始/否”对话框，不要进行任何点击操作。此时开始进样。7、进样方法：插入进样针，向上搬动阀门，推针进样，然后向下搬动阀门，拔出进样针。（注：如果进样前未点击“单次运行”键，“停止”键不可用。这时可按“LC停止”键强制停止当前操作。）二、数据分析1、如需改变实验的分析时间，可点击工具栏中的“采集”，找到“更改分析时间”进行修改。2、从“数据文件”中可以找到已命名的所需文件，进行实验分析。3、在“数据采集”中选择“显示批处理”，可删除无用的表格。三、关机操作过程1、用示差检测器的话，首先换掉柱子，流动相含盐的话，将流动相换成抽虑完的双蒸水，停泵，排空，开泵，点击Rflow，2ml/min流速的话，冲洗1min，0.8 ml/min流速的话，冲洗10min，通过Balance检查。此过程是为了将盐置换；再将流动相更换成甲醇（30%-40%甲醇水，V/V）（预备长期闲置时应用纯甲醇）冲洗时间在0.8 ml/min时半小时。 如果流动相不含盐的话（0.0001mol/L H2SO4），直接将流动相换成甲醇，停泵，排空，开泵，点击Rflow，0.8 ml/min流速，冲洗30min，通过Balance检查。 停泵，再依次关闭柱温箱和检测器开关。2、用紫外检测器的话，如果流动相不含盐分时，在就绪状态下，用此流动相以原流速大量冲洗，待基线稳定后，停泵（按电脑上的泵按纽，其与机器上的开关效果一样），再依次关闭柱温箱和检测器开关。3、用紫外检测器的话，如果流动相含有盐分时，在就绪状态下，先用此流动相以原流速大量冲洗，待基线稳定后，停泵、排空换成甲醇水（甲醇含量30%40%）继续以原流速大量冲洗至基线稳定。停泵、排空再换成纯甲醇溶液冲洗。停泵，再依次关闭柱温箱和检测器开关。 （注：每次更换流动相时都要进行排空操作）四、清洗、出现问题与维护1、清洗泵头后面的方法：由于泵头后存在死角，极易残留盐分，可用针管吸入纯水或30%的甲醇水，缓慢推入，注意压力不易过大。每天两次，做样之前1次，做样后一次2、清洗进样阀残留物的方法：不开进样阀，用22号针头（清洗针）吸入纯水或30%的甲醇水由进针口处缓慢推入，注意压力不易过大。在基线不平稳的时候清洗。3、清洗进样阀针腔的方法：可用另一种白色的柱头插入针管上，吸入纯水或30%的甲醇水由进针口处缓慢推入，注意压力不易过大。4、如出现压力不稳的情况可能由如下原因造成：（1）两个单项阀堵塞（即在线过滤器堵塞）。旋开螺丝，取下。在超声机内加入异丙醇或甲醇溶液，垂直放置进行超声。如果安装后仍然还不稳定的话再取下来用稀硝酸溶液超声。都未见效果时，联系工程师。（2）也有可能是密封垫漏液导致（3）在新柱子换上后，也会发生压力不稳的情况，通常在34兆帕之间变化属于正常值，若超过10兆帕，则可能堵在在线过滤器上。岛津LC20A高效液相色谱使用注意问题一、本仪器隶属于微生物重点实验室，未经本室主任葛菁萍老师允许，不得擅自使用，如出现问题，请自行赔付。二、本仪器需要经过培训并经老师检测合格后方可使用，未经培训，不得使用，如出现问题，请自行赔付。三、本仪器比较娇贵，耗材消耗量很大，希望大家节约珍惜使用。四、本仪器目前只连接示差检测器，不能擅自更改检测器。五、所有用于本仪器的样品，都需要经过如下步骤的前处理： 超声波去除气泡、0.45um滤膜过滤（大量样品用抽滤装置过滤、少量样品用滤器过滤），然后才可以进样。六、进样采用1mL注射器 22号针头的方式。每次进样20uL。为了节约，不使用仪器配置的进口进样针。七、每次操作结束，务必认真清洗管路，直到基线跑平为止。八、所有操作人员在使用本仪器时，不得擅自离开。九、仪器软件使用说明