医学类维生素c的定量测定课件

维生素C的定量测定 定量测定维生素C的方法 一 氧化还原法1 直接碘量法2 2 6 二氯酚靛酚滴定法二 分光光度法1 紫外快速测定法2 2 4 二硝基苯肼法3 高铁还原法测定血浆中的抗坏血酸三 光电比浊法四 电化学法五 荧光分析法1 抗坏铁酸的微量荧光测定法2 抗坏铁酸总量的荧光测定 直接碘量法定量测定维生素C的原理 维生素c分子中含有烯二醇基 易被I2定量氧化成含二酮基的脱氢维生c 故可用直接碘量法测定定含量 从上式可以看出 在碱性条件下有利于反应向右进行 但维生素c的还原性很强 在碱性环境中易被空气中的O2氧化 故滴定时加一些HAc使滴定在弱酸性溶液中进行 以减少维被空气氧化所造成的误差 2 6 二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的原理 维生素C具有很强的还原性 它可分为还原性和脱氢型 还原型抗坏血酸能还原染料2 6 二氯酚靛酚 DCPIP 本身则氧化为脱氢型 在酸性溶液中 2 6 二氯酚靛酚呈红色 还原后变为无色 一旦溶液中的维生素C已全部被氧化时 则滴下的染料立即使溶液变成粉红色 所以 当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化 此时即为滴定终点 O H 蓝色 还原型抗坏血酸 氧化型脱氢抗坏血酸 2 6 二氯酚靛酚 还原型2 6 二氯酚靛酚 红 色 H OH 无色 N Cl Cl O 紫外快速测定法定量测定维生素C的原理 维生素C的2 6 二氯酚靛酚容量法 操作步骤较繁琐 而且受其它还原性物质 样品色素颜色和测定时间的影响 紫外快速测定法 是根据维生素C具有对紫外产生吸收和对碱不稳定的特性 于243nm处测定样品液与碱处理样品液两者消光值之差 通过查标准曲线 即可计算样品中维生素C的含量 光电比浊法的原理 在酸性介质中 抗坏铁酸与亚硒酸 H2SeO3 能定量地进行氧化还原反应 1mol的抗铁酸能将2mol的亚硒酸还原成硒 在一定条件下 生成的元素硒在溶液中形成稳定的悬浊液 当抗铁酸的浓度在0 4mg 25 50ml的范围内 该溶液生成的浊度与抗坏铁酸的含量成正比 将试液置分光光度计上测其浊度可以定量地测定抗坏铁酸 荧光分析法的原理 用酸洗活性炭将抗坏铁酸氧化为顺式脱氢抗坏铁酸 然后与邻苯二胺缩合成一种荧光性化合物 样品中其它荧光杂质的干扰可以通过向氧化后的样品中加入硼酸 使脱氢抗坏铁酸形成硼酸脱氢抗坏铁酸的络合物 它不与邻二苯胺生成荧光化合物 这样可以测定其它荧光杂质的空白荧光强度而加以校正 碘量法定量测定维生素C 1 配制0 05mol l 1I2标准溶液称取6 5gI2和12 5gkI 置于小研钵中 加水少许 研磨至全部溶解后移入棕色瓶中 加水500ml 摇匀后避光阴凉处放置过夜 2 标定I2溶液浓度吸取25 00mlI2溶液置于250ml锥形瓶中 加水50ml 用标定过的Na2S2O3标准溶液滴定至浅黄色后 加入0 2 淀粉溶液2 4滴 继续用Na2S2O3溶液滴定至蓝色恰好退去 根据下式计算I2溶液的浓度 3 维生素c含量的测定准确称取约0 2g维生素c 放入锥形瓶中 加入新蒸过的蒸馏水50ml2mol l 1HAc使其溶解 加淀粉指示剂1ml 立即用I2标准溶液滴定至浅蓝色 按下式计算维生素c的含量 c 维生素C含量 c I2 V I2 M 维生素C S样 二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C 一 试剂2 草酸溶液 草酸2g溶于100ml蒸馏水中 1 草酸溶液 草酸1g溶于100ml蒸馏水中 标准抗坏血酸溶液 1mg ml 准确称取100mg纯抗坏血酸 应为洁白色 如变为黄色则不能用 溶于1 草酸溶液中 并稀释至100ml 贮于棕色瓶中 冷藏 最好临用前配制 0 1 2 6 二氯酚靛酚溶液 250mg2 6 二氯酚靛酚溶于150ml含有52mgNaHCO3的热水中 冷却后加水稀释至250ml 贮于棕色瓶中冷藏 4 约可保存一周 每次临用时 以标准抗坏血酸溶液标定 二 材料苹果 卷心菜等 三 器材锥形瓶 100ml 组织捣碎器 吸量管 10ml 漏斗 滤纸 微量滴定管 5ml 容量瓶 100ml 250ml 四 提取水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果 用纱布或吸水纸吸干表面水分 然后称取20g 加入20ml2 草酸 用研钵研磨 四层纱布过滤 滤液备用 纱布可用少量2 草酸洗几次 合并滤液 滤液总体积定容至50ml 五 标准液滴定准确吸取标准抗坏血酸溶液1ml置100ml锥形瓶中 加9ml1 草酸 用微量滴定管以0 1 2 6 二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色 并保持15s不褪色 即达终点 由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸 取10ml1 草酸作空白对照 按以上方法滴定 六 样品滴定准确吸取滤液两份 每份10ml 分别放入2个锥形瓶内 滴定方法同前 另取10ml1 草酸作空白对照滴定 七 计算式中 VA为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数 VB为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数 C为样品提取液的总毫升数 D为滴定时所取的样品提取液毫升数 T为1ml染料能氧化抗坏血酸毫克数 W为待测样品的重量 g 紫外快速测定法定量测定维生素C 一 材料 仪器与试剂 一 材料 各种水果蔬菜 果汁及饮料 二 仪器 紫外分光光度计 离心机 分析天平 容量瓶 10ml 25ml 移液管 0 5ml 1 0ml 吸管 研钵 三 试剂1 10 盐酸 取浓盐酸133ml 加水稀释至500ml 2 1 盐酸 取浓盐酸22ml 加水稀释至100ml 3 1mol L氢氧化钠溶液 称取40gNaOH 加蒸馏水 不断搅拌至溶解 然后定容至1000ml 二 操作步骤 一 标准曲线的制作1 抗坏血酸标准溶液的配制 用分析天平准确称取抗坏血酸10mg 加2ml10 盐酸 加蒸馏水定容至100ml 混匀 此抗坏血酸溶液的浓度为100ug ml 蒸馏水加入体积 ml 3 消光值的测定 以蒸馏水为空的 在243nm处测定标准系列抗坏血酸溶液的消光值 以抗坏血酸的含量 ug 为横坐标 以相应的消光值为纵坐标作标准曲线 二 样品的测定1 样品的提取 将果蔬样品洗净 擦干 切碎 混匀 称取5 00g于研体中 加入2 5ml1 盐酸 匀浆 转移到25ml容量瓶中 稀释至刻度 若提取液澄清透明 则可直接取样测定 若有浑浊现象 可通过离心 10000g 10min 来消除 2 样品的测定 取0 1 0 2ml提取液 放入盛有0 2 0 4ml10 盐酸的10ml容量瓶中 用蒸馏水稀释至刻度后摇匀 以蒸馏水为空白 在243nm处测定其消光值 3 待测碱处理液的制备 分别吸取0 1 0 2ml提取液 2ml蒸馏水和0 6 0 8ml1mol L氢氧化钠溶液依次放入10ml容量瓶中 混匀 15min后加入0 6 0 8ml10 盐酸 混匀 并定容至刻度 以蒸馏水为空白 在243nm处测定其消光值 4 由待测样品与待测碱处理样品的消光值之差和标准曲线 即可计算出样品中维生素C的含量 5 也可直接以待测碱处理液为空白 测出待测液的消光值 通过查标准曲线 计算出样品的维生素C的含量 四 计算 V总Vc的含量 g g V1 W总式中 从标准曲线上查得的抗坏血酸的含量 g V1 测消光值时吸取样品溶液的体积 ml V总 样品定容体积 ml W总 称样重量 g 关于维生素C的常识 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一 缺少它时会产生坏血病 因此又称为抗坏血酸 ascorbicacid 它对物质代谢的调节具有重要的作用 近年来 发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力 并具有化学致癌物的阻断作用 维生素C是具有L系糖型的不饱和多羟基物 属于水溶性维生素 它分布很广 植物的绿色部分及许多水果 如橘子 苹果 草莓 山楂等 蔬菜 黄瓜 洋白菜 西红柿等 中的含量更为丰富 补维生素C 要不就这样了 谢谢欣赏 主要参考资料维生素及其分析方法聂洪勇等著上海 上海科学技术文献出版社维生素手册英 J 玛克斯著 郑昌学等译北京 科学普及出版社癌与维生素C 美 鲍林 美 卡梅伦著 王艳茹 王文仲译北京 科学普及出版社 随致病菌的种类 数量 毒力以及患儿年龄和抵抗力的强弱不同而异 轻者仅有一般感染症状 重者可发生感染性休克 DIC 多器官功能衰竭等 1 1感染中毒症状 大多起病急骤 先有畏寒或寒战 继之高热 热型不定 弛张热或稽留热 体弱 重症营养不良和小婴儿可无发热 甚至体温低于正常 精神萎靡或烦躁不安 严重者可出现面色苍白或青灰 神志不清 四肢末梢厥冷 呼吸急促 心率加快 血压下降 婴幼儿还可出现黄疸 1 2皮肤损伤 部分患儿可见各种皮肤损伤 以瘀点 瘀斑 猩红热样皮疹 荨麻疹样皮疹常见 皮疹常见于四肢