饲料中霉菌毒素检测技术ppt课件

饲料中霉菌毒素检测技术 交流提纲 一 饲料中霉菌毒素的危害 二 饲料中霉菌毒素的主要检测方法 三 ELISA法的操作要点及注意事项 质量第一公正科学及时准确 四 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用 一 饲料中霉菌毒素的危害 1 什么是霉菌毒素 霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物 次级代谢产物 一 饲料中霉菌毒素的危害 2 霉菌毒素产生的原因 霉菌无处不在 它们可在农作物生长 收获 运输和储存期间生长并产生毒素农作物作为饲料原料在生产 销售 储存 运输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变 遭受霉菌毒素污染 一 饲料中霉菌毒素的危害 3 霉菌毒素的种类 现已报道的霉菌毒素大约有300种在饲料中常见的 对人和动物健康造成潜在危害的毒素主要有 黄曲霉毒素 玉米赤霉烯酮 赭曲霉毒素 T 2毒素 伏马毒素和脱氧雪腐镰刀菌稀醇 呕吐毒素 等6种毒素 一 饲料中霉菌毒素的危害 4 霉菌毒素的主要危害 一是可以引起饲料的变质 产生异味 降低其饲用价值 甚至完全让其失去商品价值二是饲料被霉菌污染后 导致畜禽的急 慢性中毒 免疫机能和生产性能下降 造成养殖业效益的下降三是残留于畜禽肌肉 内脏或乳中的霉菌毒素通过食物链传递给消费者 给食品安全带来更大的风险 二 饲料中霉菌毒素的主要检测方法 3 主要检测方法的特点比较 二 饲料中霉菌毒素的主要检测方法 4 检测方案 阳性样确证 初筛 批量样本 可疑样品 二 饲料中霉菌毒素的主要检测方法 5 检测流程 三 ELISA法的操作要点及注意事项 1 酶联免疫吸附 ELISA 试验的定义及分类 定义 用酶标记抗原或抗体检测液体中未知抗体或抗原的方法 间接法将已知抗原吸附于固相载体 酶标记二抗检测液相中未知抗体双抗体夹心法将已知抗体吸附于固相载体 酶标记一抗检测液相中的可溶性抗原竞争法将已知抗体或抗原吸附于固相载体 酶标记抗原或抗体检测液相中的可溶性抗原或抗体 分类 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 竞争ELISA的原理 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 检测步骤及注意事项 1 准备阶段详细阅读说明书确认试剂盒试剂组成 数量及其用途试剂配制试样的制备 提取及稀释试剂盒试用前要充分回温实验室室温最好控制在20 25 准备好实验器具 移液枪机及枪头 确认仪器设备运行正常 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 检测步骤及注意事项 续 2 加样标准曲线孔 酶标抗原 标准曲线溶液样品测试孔 酶标抗原 样品提取物溶液注意事项 加样体积准确前后加样时间不宜过长不可漏孔 跳孔防止交叉污染 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 操作要点及注意事项 续 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 操作要点及注意事项 续 3 孵育孵育前应混匀反应物严格按照说明书控制温度 时间及避光要求防止微孔内液体挥发 加以密封 4 洗板甩除液体要干净利落 不要投鼠忌器加洗液不要溢出微孔 防止交叉污染拍板用力适当 看不到明显液体为宜 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 操作要点及注意事项 续 5 显色加显色液要快速准确回形振荡混匀 消除气泡严格按照说明书控制温度 时间及避光要求防止微孔内液体挥发 加以密封 6 显色终止按照加显色液的顺序及速度加终止夜回形振荡混匀液体 三 ELISA法的操作要点及注意事项 2 操作要点及注意事项 续 6 读数 检测吸光度 终止反应后应尽快检测吸光度按照说明书要求设置酶标仪参数 三 ELISA法的操作要点及注意事项 3 其他应注意的问题劳动安全保护及环境保护不同批次的试剂盒微孔板不要混用试剂盒质量差异 重复性 准确性 明显 四 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用 1 HPLC法检测霉菌毒素的关键点比较 四 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用 2 免疫亲和柱净化原理 四 HPLC法在饲料霉菌检测中的应用 3 免疫亲和柱使用注意事项 免疫亲和柱应在2 8 保存 不要冷冻 关注有效期免疫亲和净化柱使用前要恢复其温度至室温 20 25 整个纯化过程尽量不要让柱子干涸免疫亲和净化柱不能混用具体使用方法按照说明书操作