从病毒入侵到靶向治疗hbv防治新策略课件

从病毒入侵到靶向治疗 HBV防治新策略 重庆医科大学病毒性肝炎研究所 感染性疾病分子生物学教育部重点实验室 HBV生活周期 RehermannB NascimbeniM NatureReviewsImmunology2005 5 215 229 机体的防御机制 CarloFerrari Annu Rev lmmunol 1995 13 29 60 病毒入侵机制 过程 吸附受体识别膜融合内吞 Stoeckl Larsetal Proc Natl Acad Sci USA2006 103 6730 6734 HBV病毒颗粒示意图 病毒入侵机制 配体 GlebeDetal WorldJGastroenterol2007 13 22 38 HBV外膜蛋白结构图 病毒入侵机制 配体 GlebeDetal Gastroenterology2005 129 234 245 HBV感染模型的建立 一直是研究HBV入侵机制过程当中的一大难题 近年来在这方面有所突破 原代培养的树鼩肝细胞 PTH 能在体外感染HBVGripon等在2002年所建立的肝癌细胞系HepaRG在体外诱导分化的条件下可以感染HBV 病毒入侵机制 感染模型 K ckJetal JVirol2001 75 5084 5089 GriponPetal PNAS2002 99 15655 15660 GlebeDetal WorldJGastroenterol2007 13 22 38 GlebeDetal WorldJGastroenterol2007 13 22 38 有关preS1介导HBV入侵的证据最早来自Neurath等的报道 preS121 47aa 10 36aaingenotypeD EandG 合成多肽能特异地与HepG2结合 preS121 47aa合成多肽能阻断HBV与HepG2的结合 针对该区段的preS1单抗同样能特异地阻断HBV与HepG2结合 病毒入侵机制 preS1功能 NeurathARetal Cell1986 46 429 436 LeSeyecetal在HBV感染原代培养人肝细胞模型中证实 L蛋白preS1中3 77aa的完整性对于保持HBV的感染力是必需的 preS2对于保持HBV的感染力则可有可无 病毒入侵机制 preS1功能 LeSeyecetal JVirol1999 73 2052 2057 Gripon和Bruss实验小组在各自的体外感染实验中均证实PreS1N端第二位甘氨酸的豆蔻酰化为HBV感染PHH所必需 preS1N端1 47aa豆蔻酰化的合成多肽在体内外均能够阻断HBV的感染 失去豆蔻酰化的合成多肽的阻断作用则明显降低 病毒入侵机制 preS1烷酰化功能 GriponPetal Virology1995 213 292 299 BrussVetal Virology1996 218 396 399 GriponPetal JVirol2005 79 1613 1622 GlebeDetal Gastroenterology2005 129 234 245 BarreraAetal JVirol2005 79 9786 9798 EngelkeM etalHepatology2006 43 750 760 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 Glebeetal进一步发现 preS1合成多肽N端烷酰化侧链越长 疏水作用越强 感染抑制活性越高 IC50 2 48pentanoyl 2 48myristoyl 2 48palmitoyl 2 48stearoyl 病毒入侵机制 preS1烷酰化功能 GlebeDetal Gastroenterology2005 129 234 245 GriponPetal JVirol2005 79 1613 1622 Abou Jaoud 等在近期的研究中证实 如将豆蔻酰化的位点从L蛋白转移到M蛋白或者S蛋白后 以HBV包膜蛋白包装的HDV则失去感染能力 进一步提示 不仅烷酰化本身 而且烷酰化发生的位置对于保持HBV感染活性也是至关重要的 病毒入侵机制 preS1烷酰化功能 Abou Jaoud etal Virology2007 365 204 209 HBVpreS区示意图 显示preS1在病毒入侵中的重要性 基因型D 108aa OG O glycosylation myr myristoylation TLM trans locationmotif 病毒入侵机制 preS1功能 GlebeDetal WorldJGastroenterol2007 13 22 38 preS1N端2 48aa 病毒与宿主相互作用的重要决定簇具有强大的感染抑制活性理想的抗病毒入侵抑制剂 Entryinhibitor 具有潜在的应用前景 为此 Urbanetal在感染动物模型中开展了相关的抗病毒实验研究 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 动物模型 肝细胞移植感染动物模型 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 实验方案 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 血清中WMHBVDNA水平 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 肝组织中病毒标志物检测 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 肝组织中病毒标志物检测 d Cyt 18stainingofmouseno 1830treatedwithscramblecontrolpeptide e HBcAgstainingofmouseno 1830treatedwithscramblecontrolpeptide f HBcAgstainingofmouseno 1828treatedwithHBVpreS 2 48stearoylpeptide f e 药代动力学 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 g h 疗效 preS 2 48stearoyl优于preS 2 48myristoyl体内分布 以肝脏为主毒性 未见明显毒副作用给药方式 皮下注射推荐剂量 100 g d 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008 26 335 341 适应症 疫苗接种后再感染肝移植后再感染阻断垂直传播 入侵抑制剂的分子设计与功能验证 PetersenJ etalNatureBiotechnology2008