活性氧（ros）介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究

活性氧 ROS 介导的乙醛氧化损伤心肌致细胞凋亡的初步研究 上海中山医院心血管病研究所 研究背景 酒精性心肌病迅速蔓延 在西方世界 酒精是继发性非缺血性扩张型心肌病主要原因1 据统计 成年人2 3不同程度饮酒2 酒精性心肌病 1 3以上与酒精有关在中国 随着生活水平不断提高 酒精性代谢相关疾病增多 乙醇 乙醛 损伤心肌 乙醇 乙醛诱导心肌细胞比较实验1 养化应激水平2 细胞凋亡水平转基因过表达ADH或ALDH比较实验1 过表达ADH加剧心肌收缩功能障碍2 过表达ALDH减少心肌细胞凋亡乙醇乙醛乙酸 ADH ALDH 乙醛通过何种途径损伤心肌 心肌肥大 凋亡致功能改变 遗传因素 病毒感染 DNA突变 免疫改变 T细胞杀伤 心肌炎 ROS ROS途经导致静脉内皮细胞凋亡 J Biol Chem 279 11244 心肌细胞胞浆特异表达 MHC 200 体外心肌细胞培养 ROS随乙醛诱导浓度增加的变化 umol L ROS随乙醛诱导时间增加的变化 h 乙醛诱导心肌细胞Bcl 2蛋白表达 02612182448h 不同条件诱导下ROS的变化 乙醛诱导细胞培液上清SOD活性 h 乙醛诱导心肌细胞实验结论 ROS介导的氧化损伤是乙醛诱导心肌细胞凋亡的主要原因乙醛较H2O2诱导产生的ROS增量水平低 提示乙醛对心肌作用为慢性氧化损伤乙醛介导的氧化损伤可能经线粒体途径发挥作用降低细胞内氧化应激水平可有效改善心肌缺氧缺血状态 减少心肌细胞凋亡 心肌凋亡 ROS 心力衰竭 功能障碍 扩张型心肌病 ALDH2 蛋白质组学研究意义 筛选出差异蛋白研究与疾病的相关性 SD鼠心力衰竭模型中ALDH2明显下调 染色体定位 12q24 2蛋白定位 线粒体内膜 醛脱氢酶2aldehydedehydrogenase ALDH2 线粒体功能 ROS产生主要场所引起氧化损伤ATP能量来源抗氧化酶系凋亡和抗凋亡蛋白Bcl家族 线粒体功能 ALDH2的mRNA转录水平表达 NormalTransplant GAPDHALDH2 心肌组织ALDH2活性测定结果 RT PCR WesternBlot 在SD鼠心衰模型中 Realtime PCR ALDH2 pAd HM4质粒构建 CAG polyA PI SceI I CeuI KpnI ApaI XhoI 2 SalI 2 BamHI 2 XbaI 2 SalI 2 PstI 2 SphI HindIII 3 total35 3kb 1720bp 730bp 30 3kb Ampr XbaI 2 ALDH2 1954bp EcoR Pst Bgl Bgl Hind 0 8kb 2 5kb Adenovirusgenome E3 28133 30818 Adenovirusgenome E1 342 3523 ITR ITR PacI PacI 技术路线 细胞培液上清 DCM组 转ALDH2 1 形DNAladder态TUNEL 基ALDH2因ADH 1 蛋Bcl 2家族白caspase 移植心脏组织 SD鼠心肌细胞 活ALDH2性ROS 对照组 对照组 乙醛干预 转ALDH2 2