唾液淀粉酶的最适PH的测定 2.doc

唾液淀粉酶最适ph值的实验测定实验目的：掌握测量PH对酶活性的方法，测定唾液淀粉酶的最适PH实验原理：ph的改变对酶的催化影响很大，酶催化活性最高时，反应体系的PH值称为最适PH值。本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受ph影响的情况。淀粉被分解越多，剩余底物越少，A值最小，过酸或过碱会抑制酶的活性，使底物分解减少，A值增大。碘液与淀粉的不同程度水解的产物反应呈不同颜色，即：淀粉（蓝色）、紫色糊精（紫色）、红色糊精（红色）、麦芽糖及葡萄糖（黄色）。1利用朗伯比尔定律，用分光光度计测量出各溶液在660nm处地吸光度A，从而间接测出唾液淀粉酶的最适PH值。A在ph值6.08.0内范围变化，并且随着ph的增大而先减少后增大，ph=6.2（6.8）左右，吸光值最低，所以唾液淀粉酶最适ph值约为6.2（6.8）。实验仪器与试剂：试管、试管架、洗耳球、小烧杯、坐标纸、37恒温水箱、v-1110D可见分光光度计、吸量管（1ml 5ml 10ml）试剂药品：碘液、0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、蒸馏水、2.5g/L淀粉溶液实验步骤：（1）配置缓冲液：配置各个PH的缓冲液10ml， 选择ph值从6.0到8.0，间隔0.2.不同ph值的测（总共10ml） 用量（ml）试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0磷酸氢二钠 0.615 0.925 1.325 1.875 2.45 3.05 3.6 4.05 4.35 4.575 4.735 磷酸二氢钠 4.385 4.075 3.675 3.125 2.55 1.95 1.4 0.95 0.65 0.425 0.265 H2O 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5（2）唾液的获取：.喝一大口凉白开（或蒸馏水），不要咽下去，做咀嚼运动2分钟，然后 吐入烧杯中，即可。（预实验）唾液的稀释、淀粉用量的确定（3）淀粉用量的确定： 管号 1 2 3 空白7.0PH缓冲液 0.9 0.9 0.9 0.92.5g/L淀粉 0.4 0.5 0.6 - 唾液（稀释10倍） 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液 H2O 5.6 5.5 5.4 6.0 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其中用量 结果：（ 0.4ml） 2.5g/L淀粉为最适量（颜色最浅）（4)酶液稀释倍数的确定：稀释倍数 5 10 15 20 25 30酶液（ml） 1 0.5 0.4 0.25 0.2 0.2H2O(ml) 4 4.5 4.6 4.75 4.8 5.8另取试管各取配好的稀释液0.1ml：管号 1 2 3 4 5 6 7稀释倍数 5 10 15 20 25 30 空白7.0PH缓冲液/ml 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉/ml 由第3步操作确定唾液/ml 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6 混匀，观察现象，并选择适中一支，记录稀释倍数颜色 结果：观察到酶稀释颜色最浅，即酶稀释倍数最适合（10倍最适）（5)最适pH确定： PH试剂 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 PH缓冲液/ml 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 0.9 2.5g/L淀粉/ml 由第3步操作确定某倍数唾液/ml 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1（由第4步操作确定） 混匀，37水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O(ml) 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 混匀，用蒸馏水调零，测定A660nmA660nm 以A660nm为纵坐标，PH为横坐标作图（6.2最小）实验结果:（A在ph值（6.08.0）内范围变化，根据实验做出平滑曲线最低点对应 （ph=6.2），即唾液淀粉酶最适p