MS培养基的作用.doc

MS培养基的作用植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制步骤这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素(母液) mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl22H2O 8 800 MgSO47H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO44H2O 4 460 ZnSO47H2O 1 720 Na2MoO42H2O 50 CuSO45H2O 5 CoCl26H2O 5 铁盐(母液) FeSO47H2O 5 560 Na2-EDTA2H2O 7 460 有机成分(母液)A 肌醇 20 000 B烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 20 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量，除了母液为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中， 母液、母液及母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5?5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6-BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0?1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6-BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。 配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液为50 mL，母液、A和B各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 MS培养基配制培养液时的注意事项配制培养液时应注意： 在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制； 用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次； 量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂，制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.47.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8)。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。 高压灭菌 培养基的高压灭菌 步骤高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。 第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。 第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 下，灭菌20 min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。 开放分类： 植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素大量元素大量元素大量元素(母液母液母液母液) mgL NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl22H2O 8 800 MgSO47H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素微量元素微量元素微量元素(母液母液母液母液) KI 166 H3BO3 1 240 MnSO44H2O 4 460 ZnSO47H2O 1 720 Na2MoO42H2O 50 CuSO45H2O 5 CoCl26H2O 5 铁盐铁盐铁盐铁盐(母液母液母液母液) FeSO47H2O 5 560 Na2-EDTA2H2O 7 460 有机成分有机成分有机成分有机成分(母液母液母液母液) A 肌醇 20 000B 烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6) 100 盐酸硫胺素(维生素B1) 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量，除了母液为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液、母液及母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。 配制培养液配制培养液配制培养液配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液为50 mL，母液、A和B各5 mL。再取2，4-D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 配制培养液时应注意：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。 溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。 调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5 47 0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5 8为止(培养基的pH必须严格控制在5 8)。 培养基的分装培养基的分装培养基的分装培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶(50 mL或100 mL)中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/51/4。每1 000 mL培养基，可分装2530瓶。 培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸(每块大小约为9 cm9 cm)中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。 高压灭菌高压灭菌高压灭菌高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。 第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶(以上物品都要用牛皮纸封口)，用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。 第三，灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 下，灭菌20 min。 灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用一母液配制与保存 配制培养基时如果每次配制都要按着杨成分表依次称量既费时又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率一般将常用的基本培养基配制成10200倍甚至1000倍的浓缩贮备液即母液。母液贮存于冰箱中使用时将它们按一定的比例进行稀释混合可多次使用并在配制较多数量的培养基时降低工作强度也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种大量元素浓缩20倍微量元素浓缩100倍铁盐浓缩200倍除蔗糖之外的有机物质浓缩100倍 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量分别溶解在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中贴好标签和做好记录后可常温保存或放入冰箱内保存。 表1 大量元素母液配1L20倍的母液 序号 成分 配 方 用 量/mg.L-1 称取量/mg 配1mL培养基吸取量/mL 1 NH4NO3 1650 33000 50 2 KNO3 1900 38000 3 KH2PO4 170 3400 4 MgSO4.7H2O 370 7400 5 无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时也应分别称量和分别溶解定溶时不分先后次序可随意加入溶量瓶中定容表2一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中贴好标签和做好记录后可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2 微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分 配方用量/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取量/mL KI 083 83 10 MnSO4.H2O 223 1690 H3BO3 62 620 ZnSO4.7