广东地区高三生物全套精品复习课件选修三DNA的粗提取与鉴定1.pptVIP

dna的粗提取与鉴定 尝试dna的粗提取与鉴定方法 材料用具 实验原理 方法步骤 材料用具 香蕉或菜花 氯化钠或食盐 餐具洗涤液或洗衣粉 皂 液 95 乙醇或普通白酒 60度 生理盐水 二苯胺试剂 天平 研钵 量筒 纱布 烧杯 试管 玻璃棒 酒精灯 石棉网 试管夹 实验原理 洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱 它们可使细胞膜破裂 蛋白质变性 使蛋白质与dna分离开来 dna不溶于酒精 加入酒精可以使dna从溶液中析出 利用dna遇二苯胺变蓝的特性对dna进行鉴定 方法步骤 1 将30g香蕉或菜花切碎 放入研钵中 向研钵中加入2g氯化钠 研磨直至成半流体状 2 向研钵中加入10ml蒸馏水或凉开水 搅拌 然后加入10ml洗涤剂 轻轻搅拌 3 将混合液用两层纱布过滤 4 取两支试管 分别加入2mol lnacl5ml 将dna挑至其中一支试管中 轻轻搅拌使其溶解 向滤液中加入预冷的10ml乙醇溶液 静置 可产生絮状的dna 5 向两支试管中各加入4ml二苯胺混匀后 放入沸水中加热5min 6 待试管冷却后 观察并比较两支试管中溶液颜色的变化 注意 二苯胺有毒 使用时不要溅到皮肤上 并保持实验室通风 1 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂 答 蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体 水分可以大量进入血细胞内 使血细胞胀裂 再加上搅拌的机械作用 就加速了鸡血细胞的破裂 细胞膜和核膜的破裂 从而释放出dna 2 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么 答 洗涤剂是一些离子去污剂 能溶解细胞膜 有利于dna的释放 食盐的主要成分是nacl 有利于dna的溶解 3 如果研磨不充分 会对实验结果产生怎样的影响 答 研磨不充分会使细胞核内的dna释放不完全 提取的dna量变少 影响实验结果 导致看不到丝状沉淀物 用二苯胺鉴定不显示蓝色等 4 此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分 答 可能含有核蛋白 多糖和rna等杂质 5 为什么反复地溶解与析出dna 能够去除杂质 答 用高盐浓度的溶液溶解dna 能除去在高盐中不能溶解的杂质 用低盐浓度使dna析出 能除去溶解在低盐溶液中的杂质 因此 通过反复溶解与析出dna 就能够除去与dna溶解度不同的多种杂质 6 方案二与方案三的原理有什么不同 答 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白 从而使提取的dna与蛋白质分开 方案三利用的是dna和蛋白质对高温耐受性的不同 从而使蛋白质变性 与dna分离 练习 1 请解释提取dna的实验操作中主要的步骤的目的 答 提取dna的第一步是材料的选取 其目的是一定要选取dna含量较高的生物材料 否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难 第二步是dna的释放和溶解 这一步是实验成功与否的关键 要尽可能使细胞内的dna全部溶解 第三步是dna的纯化 即根据dna的溶解特性 对酶及高温的耐受性的不同等特性 最大限度地将dna与杂质分开 最后一步是对dna进行鉴定 这是对整个实验的结果的检测 2 你认为从细胞中提取某种特定的蛋白质与提取dna一样容易吗 答 提取蛋白质比提取dna的难度大 这是因为 与dna相比 蛋白质对温度 盐浓度 ph等条件要敏感得多 很容易失活 并且蛋白质的空间结构多种多样 理化性质各不相同 使得蛋白质的提取没有一种统一的方法 只能根据特定蛋白质的特性摸索提取的条件 设计特定的方法 去除滤液中的杂质 为了纯化提取的dna 需要将滤液作进一步处理 下面是去除杂质的三个方案 你可以根据实际情况选用一种 或者自己设计一个方案 方案一利用dna在不同浓度的nacl溶液中溶解度的不同 通过控制nacl溶液的浓度去除杂质 具体做法是 在溶液中加入nacl 使nacl溶液浓度为2mol l 过滤除去不溶的杂质 再调节nacl溶液浓度为0 14mol l 析出dna 过滤去除溶液中的杂质 再用2mol l的nacl溶液溶解dna 方案二直接在