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文档简介
实验2分离以尿素为氮源的微生物 实验目的 1 使用专一的培养基 含尿素 分离专一的细菌 有脲酶的细菌 2 使用指示剂颜色的变化检知酶 脲酶 所催化的反应 实验原理 脲即尿素 是蛋白质降解的产物 有一些细菌含有脲酶可以分解尿素 利用尿素作为其生长的氮源 nh2 2c o h2o2nh3 co2 脲酶 本实验目的是从土壤中分离出能利用尿素的细菌 了解它在生态平衡中的作用 并与lb全营养培养基做对照 设备及用品 灭菌锅或高压锅 250ml的三角瓶1个和100ml的三角瓶2个 封口膜和橡皮圈 培养皿4个 接种环和玻璃三角刮刀 恒温培养箱 摇床 酒精灯和超净台 一次性塑料手套 装有酒精棉球的广口瓶 镊子 有盖的试管 15mm 150mm 3支和试管架实验材料 1 25mllb固体培养基 蛋白胨0 25g 酵母提取物0 12g nacl0 25g 琼脂0 5g 加水25ml 2 25ml尿素固体培养基 0 025g葡萄糖 nacl0 12g k2hpo40 12g 酚红0 25mg 琼脂0 5g 加水15ml 灭菌冷却到60 时加入经g6玻璃漏斗过滤 使其无菌 的尿素 3 实验步骤 1 灭菌 将配制好的50mllb液体培养基和50mllb液体培养基分别装入两个250ml的三角瓶中 加上封口膜 用高压锅进行灭菌 2 制平板 在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中 使培养基铺平皿底部 待凝 使之形成平面 3 接种扩大培养 靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三角烧瓶的液体培养基中 三角烧瓶在37 摇床振荡培养12h 4 划线分离 将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的平板上连续划线 然后将盖好的培养皿倒置 放在37 恒温培养箱中进行培养 5 单菌落接种培养 在无菌操作下将单菌落用接种环取出 再用划线法接种在空白斜面上 在37 下培养24h 4 冰箱保存 实验讨论实验完成后 接触过细菌的器皿应如何处理 实验完成后 所有接触过细菌的器皿都必须先高压灭菌后再洗涤 特别是培养基 有可能被有害菌体污染 在培养繁殖后 大量有害菌体影响人畜健康 也污染环境 因此必须高压灭菌 使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃 对于取样器的取样头 通常
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