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药品微生物实验室 质量管理2018 06 微生物类别 特点 体积小 结构简单 分布广 种类 10 20万种 繁殖快 易变异 微生物概述 芽孢 微生物所需的营养物质 药品中微生物的主要污染途径 1 水系统 饮用水 纯化水 注射用水 纯蒸汽 过滤净化后检测微生物 细菌内毒素 2 原辅料 植物性 动物性 风险最大 2020版药典中药饮片增加耐热菌 沙门菌 3 包装材料 安瓿 PVC PTP 塑料瓶 检测微生物4 药品中微生物的主要污染途径 4 生产人员 最不可控因素 咳嗽 喷嚏 动作幅度大 皮肤掉屑 测手指 洁净服 5 气体 压缩空气 惰性气体 控制微生物或无菌 6 生产环境 洁净区密封 空气过滤 定期消毒 测沉降菌 浮游菌 悬浮粒子 A B C D级 验证和日常监测7 设备及配件 清洁 消毒 灭菌 清洁验证 影响药品微生物检验结果的因素 1 样品中的微生物可能分布不均匀 2 微生物检验方法误差大 3 检验方法未经过验证 4 实验室因素 人员 培养基 试剂 菌种 环境 设备 样品 人员要求 1 操作人员具备微生物学或相近专业知识的教育背景 2 培训 职责培训 岗位操作规程的培训 设备操作培训 检验技术的培训 包括无菌操作 培养基制备 消毒 灭菌 注平板 菌落计数 菌种传代 菌种保藏 微生物检查方法 微生物鉴定基本技术 3 实验室安全方面的培训 保证自身安全 防止实验室被污染 4 对微生物管理人员的培训 实验室安全 实验室结果的评估 数据偏差的调查 培养基管理 培养基影响微生物试验结果的因素1 供应商 稳定 资质合格 业内口碑好 供货能力强 2 培养基的接收2 1查看培养基名称 批号 厂家 生产日期 有效期 执行标准是否符合要求 2 2在每瓶培养基瓶上贴标签 编号 唯一的标识 批号 接收日期 接收人 开瓶日期 开瓶后的有效期 2 3培养基接收记录 3 培养基的储存按照供应商提供的方法保存 多数是避光 个别厂家要求阴凉干燥 低于20 培养基管理 4 培养基的适用性检查 药典要求 4 1如果培养基的配制和灭菌程序经过验证 那么同一批脱水培养基适用性检查可只做1次 4 2如果培养基的配制和灭菌程序未经过验证 那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检查 培养基的配制和灭菌方法的验证 存储期 包括 灭菌前后PH值 外观性状 灭菌后的无菌性检查 灵敏度检查 保存几周后的无菌 灵敏度检查 培养基管理 4 3适用性检查 购买对照培养基 购买菌种枯草 白念 黑曲霉接种于计数用培养基金葡 铜绿 枯草 生孢 白念 黑曲霉接种于无菌检查用培养基 依据药典附录1105试验操作后判断是否合格 以下是三种培养基适用性检查要求 计数用培养基 无菌检查用培养基 选择性培养基 计数用培养基适用性检查要求 无菌检查用培养基适用性检查要求 选择性培养基适用性检查要求 用于环境监控的培养基管理 市售 双层包装和终端灭菌 如果不能采用终端灭菌的培养基 在使用前进行100 的预培养 防止出现假阳性 沉降菌碟暴露时间的验证 选择在换气次数大的需要监控的操作间 培养基加菌暴露若干小时 培养后计算菌的回收率大于70 暴露多长时间不干裂 促生长能力良好 包装形式 试管 三角瓶 密封 贮存房间的条件 取样计划 取样时间点 测试项目 PH值 无菌 适用性 加菌液0 1ml 不能加1ml 菌种的管理 菌种的来源CMCC中国复活标准贮备菌株 0代 解冻转种工作菌株 低温冷冻干燥 不得重新冷冻 TACC美国1代 是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养 工作菌株不可替代标准菌株 菌种的管理 涉及菌种管理的记录标准菌种的申购记录 从标准菌株到工作菌株的操作SOP及记录 菌种的传代记录 菌种的检查记录 确认记录 菌种的灭活 销毁记录 菌种的管理 菌种的接收1 检查外观是否完好 2 核对菌种名称 编号 3 核对接收时是否在合适的环境中 4 核对菌种是否在有效期范围内 5 给每株菌一个独立的编号 不能重复 菌种的管理 菌种的保存1 标准菌株 超低温冷冻 低于 30 有效期一年 70 以下冷冻保藏 有效期三年 2 斜面菌种 2 8 冷藏 有效期3 6个月 3 菌液 室温下 2小时内使用 2 8 24小时内使用 黑曲霉孢子悬液2 8 贮存期要验证 菌种的管理 菌种的使用 斜面菌种只允许一次使用菌种的传代1 将微生物转接到新的培养基 进行培养获得新鲜菌种的过程 2 购买的标准菌株必须经过传代后使用 在5代以内 环境的管理 硬件 阳性菌实验室 培养室 贮藏室 区 试验结果观察区 培养基及实验用具准备区 灭菌区 样品接收区 标准菌株贮藏室 区 污染物处理区 以上区域要有标识 降低交叉污染 无菌检查 B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统 微生物限度检查 不低于D级背景下的B级单向流空气区域 环境监测 1 空调验证 高效过滤器完整性 气流组织 空气流速 平均风速 换气次数 压差 温度和相对湿度 测试应在模拟正常检测条件下进行 依据药典附录9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则2 日常监测 异常情况要进行分析 不仅仅是数数而已 监测项目 洁净区灭菌和消毒 A B级洁净区使用无菌的或经无菌处理的消毒剂或清洁剂 化学消毒剂应验证消毒效果 不止一种 清洁剂 消毒剂在规定的效期内使用 常用灭菌法干热灭菌法 火焰法 酒精灯 烘箱250 1h 湿热灭菌法 121 30min 设备设施管理 1 设备的确认 检定 校准 每年一次 注意连续性 2 设备使用日志 使用即填 3 设备定期清洁和消毒 水浴锅 培养箱 冰箱 生物安全柜 4 无菌器具要有明确的标识 已灭菌 未灭菌 5 温度计的校准 注意量程 精度 6 天平 标准砝码的校准 移液管的校准 7 悬浮粒子计数器 浮游菌采集器的校准 8 紫外灯消毒效果的定期检测 操作方法注意 1 操作SOP中明确的检验方法要经过方法学验证 而且和验证方案报告 省药检所的方